乳香的薄层色谱研究*

刘世军 ，宋忠兴 ，郭 洁 ，许 刚 ，陈衍斌 ，张雪原 ，张 娱 ，刘红波

1 陕西中医药大学/陕西省中药资源产业化协同创新中心，陕西 咸阳 712083；2 陕西省创新药物研究中心；3 陕西步长制药有限公司

乳香为橄榄科植物乳香树Boswellia carteriiBirdw.及同属植物Boswellia bhawdajianaBirdw.树皮渗出的树脂［1］。主要分布于红海沿岸至利比亚、苏丹、土耳其等，主产于红海沿岸的索马里和埃塞俄比亚，分为索马里乳香和埃塞俄比亚乳香，每种乳香又分为乳香珠和原乳香，我国有些地方也有分布。

心脑血管疾病是发病率较高的人类疾病之一，步长脑心通［2-3］是治疗此类疾病的有效药品，受到广泛关注。乳香味辛、苦，性温，具有活血定痛，消肿生肌的功效。可用于胸痹心痛、胃脘疼痛、痛经经闭、产后瘀阻、癥瘕腹痛、风湿痹痛、筋脉拘急、跌打损伤、痈肿疮疡等病症。乳香作为步长脑心通里重要的树脂类药材之一，充分发挥其化瘀通络的作用，对于气虚血滞、脉络瘀阻所致的中风有着显著的疗效。

2015 年版一部《中华人民共和国药典》对乳香的成分鉴别采用的方法是气相色谱法，这种方法虽然精确，但操作复杂，成本较高。本试验采用薄层色谱法对其原药材进行鉴别，不仅价格低廉，操作简单，可操作性强，而且还能全面地将原药材尽可能多的成分进行提取鉴别。

1 试剂与仪器

1.1 仪器FA2004B 型电子天平（上海佑科仪器仪表有限公司），KQ-300DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），100×200 双槽层析缸，硅胶G 薄层板（青岛海浪硅胶干燥剂有限公司），101 型电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司），挥发油提取器，电热套（北京科伟永兴仪器有限公司）。

1.2 试药同一产地乳香见表1，不同品质乳香见表2。

表1 同一产地乳香药材

表2 不同品质乳香药材

1.3 试剂甲醇（成都市科隆化学品有限公司），环己烷（天津市盛奥化学试剂有限公司），乙醚（洛阳市化学试剂厂），石油醚（60-90℃）（成都市科龙化工试剂厂），苯（天津市盛奥化学试剂有限公司），乙酸乙酯（天津市天力化学试剂有限公司），甲酸（天津市科密欧化学试剂有限公司），以上试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶剂的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取乳香对照药材0.5173 g，加入甲醇5 mL，超声提取30 min，取出，放至室温后，取上清液过0.22 μm 微孔滤膜，置于1.5 mL 小离心管中，稍挥去溶剂，放于冰箱中，备用。

2.1.2 乳香供试品溶液的制备 按照表2 中药材乳香编号，分取表中药材的用量，加入10 mL 甲醇，超声提取30 min，静置，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，置于1.5 mL小离心管中，稍挥去溶剂，放于冰箱中备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 取乳香药材适量，研细，按照表1中药材的量称取粉末，加入甲醇10 mL，超声提取30 min，取出，待冷却至室温后取上清液，过 0.22 μm 微孔滤膜，置于 1.5 mL 小离心管中，稍挥去溶剂，置于冰箱中备用。同法制得3 批供试药材试液。

2.1.4 挥发油的制备［4-5］取乳香药材适量，稍研成小块，称取200 g置于圆底烧瓶中，加入1600 mL饮用水，采用水蒸气蒸馏法，回流提取至挥发油液面不再增加，收集挥发油。精密量取挥发油200 μL，加入400 μL 甲醇，制得挥发油稀释液，置于冰箱中备用。

2.2 展开系统与试验结果

2.2.1 展开系统［1］根据2015年版第一部《中华人民共和国药典》中没药的鉴别方法进行展开。分别吸取3 批乳香供试药材试液和乳香对照药材试液约2 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-乙醚（4∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液显色，置于105℃条件下至斑点清晰，见图1。

经查阅资料，选用苯-乙酸乙酯（95∶5）为展开剂，采用一次展开法见图2。二次展开法进行展开见图3。展开完全后，取出，晾干，用5%香草醛硫酸为显色剂进行显色，日光下即可观察，或置于105℃条件下显色完全。

2.2.2 试验结果 乳香药材与对照药材显示斑点基本一致。以环己烷-乙醚（4∶1）为展开剂，所显示出的斑点较少，以苯-乙酸乙酯（95∶5）为展开剂，所显示出的斑点较多。两种展开条件下特征都很明显，均可作为鉴别依据。但由于后者显示斑点较多，所以本实验以第二种展开剂为最终结果。

2.3 不同品质乳香的薄层层析与结果

2.3.1 展开系统 按照表2 中的编号顺序，依次点样，分别以苯-乙酸乙酯（19∶1）（图 4A）、苯-乙酸乙酯（25∶1）（图4B）为展开剂进行二次展开，待展开完全后，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，日光下即可观察到斑点，再置于105℃条件下至显色完全，并记录结果。

2.3.2 乳香薄层结果 根据实验结果图可知，以苯-乙酸乙酯（25∶1）为展开剂时，展开效果较好，所以本实验选用苯-乙酸乙酯（25∶1）为展开剂，经二次展开得到其指纹图谱结果。见图4。

图1 环己烷-乙醚（4∶1）为展开剂的乳香薄层色谱图

图2 苯-乙酸乙酯（95∶5）为展开剂一次展开

图3 苯-乙酸乙酯（95∶5）为展开剂二次展开

图4 不同比例苯-乙酸乙酯为展开剂的乳香薄层色谱图

图5 不同比例环己烷-乙醚、纯环己烷、纯石油醚为展开剂的乳香挥发油薄层色谱图

2.4 乳香挥发油展开系统的讨论分别吸取乳香挥发油稀释液2 μL，点于硅胶G 板上，以环己烷-乙醚（4∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液显色，置于105℃条件下至斑点清晰。在环己烷-乙醚（4∶1）的展开条件下，极性稍大的环己烷-乙醚（4∶1）成分可以较好地分开，但是展开前沿极性稍小的部分未能很好展开，现以极性稍小的未展开部分为主要对象，对其展开剂的选择进行讨论。

展开系统的选择：分别以不同比例环己烷-乙醚（图5A-F）、纯环己烷（图5G）、纯石油醚（图5H）为展开剂展开，待展开完全后，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇进行显色，置于105℃条件下至显色完全。

从试验结果可以看出，以纯石油醚为展开剂，乳香挥发油分离效果较好。

为提高乳香挥发油斑点分离度，改变月牙形斑点，将石油醚与环己烷按不同比例混合作为展开剂。见图6。

分离效果有所提高但仍不是很理想，并且部分斑点呈月牙形。选择在分离较好的以石油醚-环己烷（2∶1）为展开剂的混合展开剂中加入一滴甲酸，并采用二维法［5］进行展开，分离效果明显提高。见图7—8。

图6 不同比例石油醚-环己烷为展开剂的乳香挥发油薄层色谱图

图7 石油醚-环己烷（2：1）为展开剂的乳香挥发油薄层色谱图

3 讨论

本实验采用多次薄层色谱法中的二次展开法，在原药材的分离方面重复性好，特征明显，可以考虑作为乳香定性鉴别及指纹图谱研究的参考。乳香挥发油极性与药材甲醇提取液极性不同，在原药材所用的薄层条件下不能很好地分离，需要改变展开条件。对于本实验，乳香挥发油极性极小且成分复杂，采用环己烷-乙醚（4∶1）只能将极性较大的成分分离，而极性较小的部分需要极性更小的展开剂，如本法采用的环己烷、石油醚及环己烷与石油醚的混合物等。

二维薄层色谱技术是一种新型的薄层色谱技术，可在保留一维色谱结果的基础上再次进行展开，将很难分开的化合物进行分离，既保留了一维薄层色谱的优点又改进了一维色谱的缺点。本实验尝试了分离效果更好的二维薄层色谱技术。

薄层色谱法受外部因素影响较大，如温度、展开剂种类、点样误差、展开方法等。试验宜在温湿度变化差异较小的室内环境下进行。

图8 石油醚-环己烷（2：1）+甲酸（1滴）为展开剂的乳香挥发油薄层色谱图