华蟾素联合化疗在食管癌中对人端粒逆转录酶表达的影响

杨 柳 洪永贵 胡彦伟 郭君兰

(安阳市肿瘤医院肿瘤内科 安阳 455000)

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，全世界每年约有30万人死于该病。我国是食管癌高发地，每年病死人数可达15万左右，其中太行山脉一带，即林州市又为全国发病率之最[1]。目前关于食管癌发病机制考虑与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相关。EMT是肿瘤侵袭过程中的核心事件，侵袭性较低的上皮表型细胞转化为侵袭性较高的间质表型细胞是导致食管癌发生侵袭与转移的主要因素[2]。华蟾素作为中药抗肿瘤的重要成员，已被广泛应用于消化道肿瘤的治疗。现今已有大量基础实验证实[3]，华蟾素可以通过对多种分子信号传导通路的影响，抑制肿瘤细胞的增殖、分化，并诱导其凋亡，显著降低瘤细胞的增殖及远处侵袭能力，对多种中晚期肿瘤均有显著的疗效，并能减轻癌痛，缓解终末期病人痛苦，与化疗联合使用，增加了抗肿瘤疗效，同时降低化疗毒副反应。人端粒酶由人端粒逆转录酶(hTERT)，人端粒酶RNA组(hTR)及人端粒酶相关蛋白(hTEP1)组成[4]。由此可知，人端粒逆转录酶(hTERT)是食管癌侵袭转移的重要分子蛋白酶。本文收集2018年9月～2019年9月我院食管癌中应用华蟾素联合化疗及单纯化的患者的外周血，利用RT-PCR法检测食管癌患者外周血中的人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA阳性表达率，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集安阳市肿瘤医院在2018年9月～2019年9月收治的30例华蟾素注射液联合化疗的食管癌患者作研究资料。联合组男17例(56.6%)，女13例(43.4%)，中位年龄64岁(42～90岁)。并随机收集同一时期单纯化疗的食管癌患者30例作对照组。对照组男18例(60%)，女12例(40%)，中位年龄61岁(38～87岁)。两组资料在性别、年龄、分期上无统计学差异。

1.2 方法

收集两组病例：(1)一般情况包括年龄、性别、分期；(2)两组资料1周期治疗后外周血中的人端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)水平。

外周血(hTERTmRNA)检测方法：(1)收集两组病人治疗1周期治疗后的外周静脉血5ml，抗凝处理(EDTANA2)；(2)采用RT-PCR法行mRNA检测提取；(3)提取出mRNA含量在紫外分光度计上测定260nm和280nm的吸光度值，并计算260/280的值和RNA的浓度；(4)根据hTERT-mRNA的引物进行mRNA扩增；(5)利用荧光定量分析hTERT-mRNA的含量(用拷贝数/ml表示)。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS13.0对数据进行处理，两组计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

联合用药组外周血 hTERT MRNA阳性率53.3%(16/30)，单纯化疗组为86.7%(26/30)，联合用药组与化疗组比较明显降低(P<0.05)，见表1。

表1 食管癌外周血hTERT mRNA表达与临床相关参数的关系[n(%)]

3 讨论

食管癌是危害安阳地区民众健康的重要杀手，但目前其治疗效果尚不尽如人意。据不完全统计，食管癌手术治疗的5年生存率小于30%，放疗的5年生存率小于20%，而晚期食管癌化疗的5年生存率不足5%。因此积极寻找新的治疗手段和治疗模式是提高生存率的重中之重。

端粒酶是一种具有逆转录活性的核糖核蛋白。目前研究提示，它与肿瘤的增值、分化和衰老有密切关系，与肿瘤发生发展密切相关，可以作为诊断肿瘤转移及预后的指标。华蟾素作为中药抗肿瘤的重要成员，已被广泛应用于消化道肿瘤的治疗[5]。华蟾素通过影响hTERT-mRNA表达水平，从而降低肿瘤复发转移的研究目前尚无相关报道。本研究补充了相关研究的空白，实验结果提示华蟾素联合化疗组外周血中hTERT MRNA阳性率53.3%(16/30)，单纯化疗组为86.7%(26/30)。实验证明，华蟾素联合化疗较单纯化疗组，其外周血中hTERT mRNA的阳性表达率明显降低。因此，华蟾素联合化疗能更好抑制肿瘤发生发展，降低肿瘤侵袭力，提高患者疗效，同时降低化疗毒副反应，改善患者预后。由上述数据分析可知，食管癌患者血浆中hTERT mRNA的表达与性别及年龄无关，与临床分期及淋巴结转移情况相关[6]。因此临床上通过检测外周血中hTERT mRNA，对食管癌早期诊断，近期疗效及预后判断均有一定提示作用。

综上所述，本课题通过研究华蟾素联合化疗对食管癌患者外周血内hTERT-mRNA表达水平的差异性，探讨华蟾素联合化疗对肿瘤侵袭能力及临床预后的影响，从而为提高食管癌治疗效果和改善患者生活质量寻求更多治疗方法。华蟾素注射液联合化疗提高了食管癌患者生活质量，减轻了化疗痛苦，增强机体免疫力，延长了生存期，临床应用安全有效，值得为临床所推广。