不同炮制方法对苍术中苍术素含量及苍术特征图谱的影响

赵娟，王科，杨帆（湘潭市食品药品检验所，湖南 湘潭 411100）

苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根茎，辛、苦，温，归脾、胃、肝经，具有燥湿徤脾、祛风散寒、明目的功效，用于湿阻中焦、脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气痿躄、风湿痹痛、风寒感冒、夜盲、眼目昏涩[1]。苍术的炮制品从唐代开始已有记载，历代沿用的方法有炒焦、炒黄、炒炭、米泔水炒、麸炒、土炒、醋炒、盐炒、酒制等20 余种[2]，而目前《中国药典》2020年版一部仅收录了生品和麸炒两种[1]。

苍术是常用中药材，不同的炮制方式在临床使用时有不同药效[3]，本文采用了麸炒、炒焦、晒干、烘干4 种常用且操作简单的炮制方式，分别对茅苍术和北苍术进行处理，运用HPLC 法测定苍术素的含量，并通过特征图谱比较炮制前后的成分变化情况，旨在为苍术的炮制和临床使用提供参考。

1 材料

1.1 仪器

安捷伦1260高效液相色谱仪，包括VWD1260紫外检测器（美国安捷伦公司）；SHIMADZU 电子天平（AUW220D）（日本岛津）；高速万能粉碎机FW100（北京市永光明医疗仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱WGLL-125BE（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药

苍术素对照品（批号：111924-201605，纯度：99.5%）、白术内酯Ⅱ对照品（批号：111976-201501，纯度：99.9%）、白术内酯Ⅲ对照品（批号：111978-201501，纯度：99.9%）（中国食品药品检定研究院）；β-桉叶醇对照品（STANDARD，批号：473-15-4，纯度＞98%）；苍术苷A 对照品（成都普瑞发科技开发有限公司，CAS：126054-77-1，纯度：98%）；北苍术对照药材（批号：120983-201605），茅苍术对照药材（批号：120932-201708）（中国食品药品检定研究院）；色谱甲醇（批号：R4CG2H）、色谱乙腈（批号：P3RA1H）（Honeywell）；磷酸（分析纯，批号：20171218）（国药集团化学试剂有限公司）；甲苯（上海沃凯生物技术有限公司，批号：20180111）；纯化水实验室自制。

1.3 样品来源

样品来源于当地采挖，经本所蔡永副主任药师鉴定为茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.和北苍术Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的根茎鲜品，其中茅苍术采自湖北英山县，北苍术采自河北涉县。

2 方法与结果

2.1 炮制方法

参照《中国药典》2020年版四部[4]（通则）0213 炮制通则和《湖南省中药饮片炮制规范》2010年版[5]，麸炒和炒焦由湖南亚飞中药饮片有限公司炮制完成，具体操作如下：晒干：将鲜品洗净，晒干，撞去须根，再洗净润透，切片，晒干。

烘干：将鲜品洗净，烘干，撞去须根，再洗净润透，切片，调节电热鼓风干燥箱温度为50℃烘烤24 h。

麸炒：将鲜品洗净，晒干，撞去须根，再洗净润透，切片，按照100 kg 洗净晒干切片的样品加10 kg 麸皮的比例加入麸皮，炒至表面呈黄色或深黄色时，取出，筛去麸皮，放凉。

炒焦：将鲜品洗净，晒干，撞去须根，再洗净润透，切片，放至锅中不断翻炒，至表面呈棕黑色，取出，放凉。

2.2 水分值的测定

苍术的水分值按照《中国药典》2020年版四部[4]（通则0832）第四法测定，结果见表1。

表1 不同炮制方法下苍术的水分值(%)Tab 1 Water percentage in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%)

2.3 不同炮制方法下苍术中苍术素的含量情况

精密称取苍术素对照品10.80 mg，加甲醇制成21.60 μg·mL－1的溶液，即得。将“2.1”项下4 种炮制方法制备的苍术粉碎，过三号筛，取约0.2 g，按照《中国药典》2020年版一部[1]苍术项下的含量测定方法进行检测，结果见表2。单因素方差分析采用统计软件SPSS 21.0 进行分析。

表2 不同炮制方法苍术中苍术素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

表2 不同炮制方法苍术中苍术素的含量(%， ±s，n ＝3)Tab 2 Content of atractylodin in Atractylodis Rhizoma by different processing methods (%， ±s，n ＝3)

注：不同字母代表差异有统计学意义（P ＜0.05）。Note：Different letters represent significant differences（P＜0.05）.

炮制方法 茅苍术苍术素含量 北苍术苍术素含量晒干烘干麸炒炒焦0.438±0.07a 0.416±0.01b 0.348±0.06c 0.273±0.03d 0.503±0.03a 0.528±0.05a 0.362±0.06b 0.287±0.05c

茅苍术与北苍术经过不同方法炮制后，苍术素的含量为：晒干法＞烘干法＞麸炒法＞炒焦法，且不同方法之间苍术素的含量有显著差异，但均高于药典标准（苍术药材及净制饮片按干燥品计，苍术素含量不得少于0.30%；麸炒苍术则不得少于0.20%）。

2.4 不同炮制方法下苍术的特征图谱

2.4.1 对照品溶液的配制 精密称取苍术素、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、β-桉叶醇、苍术苷A 对照品适量，分别置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，配制成含苍术素0.0216 mg·mL－1，白术内酯Ⅱ0.3026 mg·mL－1，白术内酯Ⅲ0.4265 mg·mL－1，β-桉叶醇0.2282 mg·mL－1，苍术苷A 0.4955 mg·mL－1的对照品溶液，装入棕色液相进样小瓶备用。

2.4.2 供试品溶液的制备 试验避光操作。分别精密称定不同炮制方法下的茅苍术和北苍术粉末各约1.00 g（过三号筛），置150 mL 具塞锥形瓶中，精密加入50 mL 甲醇，称取重量，超声提取40 min（功率250 W，频率40 kHz），取出放置冷却至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即为供试品溶液。装入棕色液相进样小瓶备用。

2.4.3 色谱条件 色谱柱为Agilent 5 TC-C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A），0.5%磷酸溶液（B），梯度洗脱，洗脱程序见表3[6]；柱温为30 ℃；流速为1 mL·min－1；检测波长为220 nm；进样量为20 μL。

表3 流动相梯度洗脱程序Tab 3 Gradient elution program

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 取同一批北苍术，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件连续进样6 次，记录色谱图，以苍术素为参照，共有峰相对保留时间RSD＜1.0%，相对峰面积RSD＜1.6%，结果表明仪器精密度良好。

2.5.2 稳定性试验 取同一批北苍术，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件分别在0、6、12、24 h 和1 周后进样分析，记录色谱图，以苍术素为参照，共有峰相对保留时间RSD＜1.0%，相对峰面积RSD＜1.9%。结果表明样品在1 周内稳定性良好。

2.5.3 重复性试验 取同一批北苍术6 份，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，以苍术素为参照，共有峰相对保留时间RSD＜1.3%，相对峰面积RSD＜1.7%。结果表明方法重复性良好。

2.6 对照特征图谱

取“2.4.1”项下对照品溶液，按照“2.4.3”项下色谱条件进样分析，色谱图见图1。

图1 各对照品HPLC 图谱Fig 1 HPLC chromatogram of the controls

2.7 茅苍术和北苍术对照药材的特征图谱

取茅苍术对照药材和北苍术对照药材各约1.00 g，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，结果如图2所示。

2.8 不同炮制方法下茅苍术和北苍术的特征图谱

取茅苍术和北苍术药材各约1.00 g，按“2.4.2”项下方法制备供试溶液，按“2.4.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，结果见图3及图4。

如图3所示，茅苍术在不同炮制方法下特征图谱的主要区别在与1号峰和2号峰，麸炒和炒焦后，1 号峰和2 号峰不明显。如图4所示，北苍术的炒焦和麸炒品在3 号峰到6 号峰之间比晒干品有更丰富的色谱峰。结合图2～4 来看，茅苍术和北苍术的比较：茅苍术7 号峰比北苍术含量高，茅苍术9号峰和10 号峰的比值＞1，而北苍术9 号峰和10号峰的比值＜1，但从茅苍术和北苍术的对照药材来看并无这一特点，这可能还与样品的产地有关。

图2 茅苍术和北苍术对照药材特征图谱比较Fig 2 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC and Atractylodes chinensis（DC.）koicz.

图3 不同炮制方法下茅苍术的特征图谱Fig 3 Characteristic chromatogram of Atractylodes lancea（Thunb.）DC with different processing methods

图4 不同炮制方法下北苍术的特征图谱Fig 4 Characteristic chromatogram of Atractylodes chinensis（DC.）koicz.with different processing methods

3 讨论

3.1 提取条件的优化

考察了超声提取、回流提取（1 h）和索氏提取（4 h）3 种方法，结果超声提取效率较高，操作方便快捷。考察了不同超声时间（30、40、50、60 min）（功率250 W，频率40 kHz）提取的效果，以苍术素的含量为依据，《中国药典》2020年版一部标准规定为超声1 h，本文对比不同超声时间的苍术素色谱峰面积，结果40、50、60 min 苍术素的峰面积之间不存在显著性差异，所以最终确定超声提取40 min。考察了不同浓度的甲醇作为提取液，以苍术素为参照物，最终确定无水甲醇提取率高。

3.2 色谱条件的确定

考察了甲醇-0.5%磷酸水、乙腈-0.5%磷酸水作为流动相，使用乙腈-0.5%磷酸水作为流动相时，各峰分离度较好，基线较平稳，色谱峰信息较丰富；对比了波长220、245、254、270、340 nm 条件下色谱峰的出峰情况，在波长220 nm 下，色谱峰信息丰富，基线较平稳[6]。

3.3 测定结果分析

不同的炮制方法对苍术中的苍术素的含量具有显著影响，且含量高低呈现晒干法＞烘干法＞麸炒法＞炒焦法，但苍术中的成分复杂，已知成分达100 多种，其质量控制需结合临床药效综合评价[7]。

传统炮制理论认为苍术炮制后可去油以减缓燥性，减少不良作用，并增强健脾止泻作用。现代研究也认为苍术中过量的挥发油对人体有较强的中枢抑制作用，且能致泻。因此适当降低苍术炮制品中挥发油的含量是避免其临床毒副作用的主要方法[8]。不同炮制方法下的茅苍术和北苍术，各峰含量不同，有学者指出炒制品尤其是麸炒品挥发油苍术酮、苍术素相对百分含量比生品低，而茅苍术醇和β-桉叶醇相对百分含量高，本研究炮制品苍术素的含量低于生品，从特征图谱上也可以看出5 号峰β-桉叶醇在茅苍术和北苍术的炮制品中含量高于生品，目前因10 ～40 min 各峰的具体化学成分不能完全确认，有待进一步研究。

中药炮制是指以中医药理论为指导，根据辨证施治用药的需求和调剂、制剂、贮藏的不同要求，对中药材加工处理的技术和工艺的总称[9]，其主要目的是增效减毒，更加适合临床应用[10]。苍术的炮制方法沿用至今，对其炮制目的《中药炮制经验集成》有“泔制、土制、麸制，去油、减缓其燥性；炒焦、能温脾祛湿，止泻”[11]之论述。苍术历代流传下来的炮制方法多达数十种，而目前《中国药典》2020年版仅收载生品和麸炒品，有学者认为米泔水浸炒使苍术挥发油含量减少较多，且其炮制方法条件较难掌握，需时也较长[12]，在满足现代临床需求的前提下，目前苍术饮片实际上多使用生片、清炒（炒焦）和麸炒三种炮制品。炮制之后的苍术各成分含量有新的变化，从中药检验的角度出发，利用质谱探明苍术各成分及其炮制前后的变化情况，是后续研究的内容，也有利于临床更好地使用苍术。