北京南海子麋鹿苑春季麋鹿粪样皮质醇激素变化及其指示作用

张树苗 李夷平 陈 颀 孟庆辉 程志斌 陈 星 白加德

(北京麋鹿生态实验中心，北京，100076)

麋鹿(Elaphurusdavidianus)俗称“四不像”，是世界自然保护联盟IUCN红皮书野外灭绝(EW)物种。1920年在我国本土灭绝[1-2]。1985年，我国开启了麋鹿重引进项目，项目首选了北京南海子皇家猎苑作为重引进放归地，并在1985—1987年共重引进77只麋鹿作为北京南海子麋鹿苑和江苏大丰麋鹿国家级自然保护区的基础种群，以恢复园囿种群，为恢复野生种群储备动物。经过30年的圈养繁殖和种群扩大、输出及野外放归，截至2020年，我国的麋鹿分布于全国81个迁地保护场所，种群数量达到8 000余只。其中，野生种群1 000余只，圈养和半散放种群7 000余只，这些圈养或半散放场所多对公众开放。

在对外开放的场所中，开展游客对动物的干扰程度的研究是当前动物保护、动物福利关注的热点之一。动物受到干扰会产生应激反应，此时体内皮质醇激素会产生显著变化，因此，皮质醇激素成为公认的反应动物应激状态的指标[3-5]。麋鹿应激状态的高低在一定程度上能够反映其适应环境条件的能力[6]，通常情况下，过低的应激水平表明动物不能对环境变化及时做出有效的反应，过高的应激状态则会损害动物的正常生理活动。近几年来，研究者已逐渐采用非损伤性取样法研究动物粪样内的皮质醇激素值，并评价目标动物的生存状态[7-10]。迄今，崔媛媛等[11]通过监测粪样中皮质醇激素浓度考察游客密集程度对圈养大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)的影响程度。Der等[12]通过监测粪样中皮质醇激素含量高低研究游客密度对3种狐蝠(Acerodonjubatus、Pteropusvampyrus、Pteropushypomelanus)的影响，Barja等[13]研究发现位于核心保护区(无干扰区)的松貂(Martesmartes)粪样中皮质醇激素明显低于有游客干扰的限制区及自由进入区。

2）十二指肠支架：该种支架放置后由于肠蠕动的影响本身就存在移位的可能。镍钛合金类支架与MRI兼容，对移位的附加力影响不大，不锈钢支架对于移位的参与度多少不清楚，通常要禁行MRI检查。

本文采用非损伤性方法，研究春季(客流量)北京南海子麋鹿苑半散放麋鹿种群的生理应激状态，并与游客干扰程度相比较，旨在阐明生态旅游中游客量的变化对麋鹿生存状态造成的影响，以期为麋鹿迁地保护场所的科学管理提供参考数据。

动迁办很快进了南菜村，拆迁的传言得到证实。火车站南移，和高铁并站。日子确实要变了，南菜马上就要被格式化了。看到盖着大红印章的政府通告，侯大同很惊讶，好像是谁告诉他无花果开花了。政府这叫专制，没有征得我们的同意就要拆迁，没门！

1 材料与方法

1.1 粪样采集和保存

参照郎冬梅等[14]的提取方法并略做改动：将冷冻保存的粪样置于室温解冻，取5 g左右粪便颗粒放入研钵中研磨。而后称取约1 g湿粪于15 mL离心管中，加入5 mL 90%乙醇溶液；用恒温水育振荡器20℃下振荡混合液20 min；经2 500 rpm离心15 min后收集上清液和沉淀，向离心管沉淀物中再加入同浓度提取液5 mL，重复上述步骤，将2次得到上清液混合均匀后取1 mL于新离心管，做完标记后置于-20℃下保存待测。同时设置对照组，测定粪便含水量，依次将测得的数据换算为每克干粪所含各激素的量(ng/g)。

1.2 粪便皮质醇激素提取和测定

2017年3—5月，对北京南海子麋鹿苑的健康麋鹿采集粪样，3月采集样品240份(8 d，30份/d)，5月采集样品150份(5 d，30份/d)，共获得样品390份。采样时间为每天8：00—10：00，每头麋鹿采取新鲜粪便5 g左右，选取时挑选粪便中无污染的中心部分颗粒，并抓匀放入自封袋内，记录好个体编号、采集日期，排除空气封口后立刻放入-20℃冰箱保存。

2017年3—5月，我们对北京南海子麋鹿苑麋鹿粪样皮质醇含量及游客量进行了测定与统计，结果见图1、图2、图3所示。

1.3 数据分析

在高职院校的发展过程中，为了可以更好的培养学生的工匠精神，院校还应该对结合自身发展现状，对课程内容、课程设计等进行合理革新。

2 结果

2.1 春季麋鹿粪样中皮质醇水平变化

采用酶联免疫吸附法(ELISA)对上述样品中皮质醇激素含量进行检测。酶免试剂盒：试剂盒为北京北方生物技术研究所生产。主要技术参数：(1)测定范围：5—100 ng/mL；(2)灵敏度：<1 ng/m；(3)变异系数：批内<9%，批间<11%；(4)特异性：无交叉反应。

通过对北京南海子麋鹿苑麋鹿粪样皮质醇含量与前一日游客量及当日游客量进行Pearson相关性分析，结果见表1、表2所示。

从图1、图2，我们可以看出麋鹿粪样中皮质醇水平的变化趋势与当日客流量不存在相关性，而与前一日游客的数量变化趋势基本一致。2017年北京南海子麋鹿苑1月的平均游客量为282人，2月的平均游客量为1 334人，3月9日游客量上升到1 500人，次日麋鹿粪样中的皮质醇含量为140 ng/g。在3月12日植树节，当日随着游客量的显著增多，次日麋鹿粪样中的皮质醇含量明显上升至204 ng/g；3月14日随着游客量的下降，次日的麋鹿粪样中的皮质醇含量也下降。而后随着游客量的上升第2日的粪样中的皮质醇含量再度上升。

广东粤垦农业小额贷款股份有限公司于2015年12月办理工商注册登记，注册资金人民币30,000万元，注册地在珠海横琴自贸区，运营总部在广州。公司的股权结构为：广东农垦及成员企业占65%，中国人保资产占30%，横琴金投占5%。公司2016年3月29日经省金融办批准开业，系广东省农垦集团公司控股的省级国有小额贷款公司。

2017年北京南海子麋鹿苑第一季度的平均游客量为1 210人，第二季度的平均游客量为1 799人。通过比较北京南海子麋鹿苑麋鹿第一季度和第二季度皮质醇水平(图3)，我们发现：第二季度整体皮质醇水平高于第一季度，与第二季度游客量增高趋势相同，但第一季度存在较多高应激水平离群值，综合每日激素水平折线图分析，我们发现3月13日和17日粪样皮质醇含量较高，这2 d正好是植树节期间麋鹿苑游客量较多。

2.2 春季麋鹿粪样中皮质醇含量与游客量的相关性

例如，在《燕子》一课教学中，小学语文教师首先可以引导学生进行文章阅读，在此基础上进行文章结构的分析，鼓励学生自主将文章中生动的词句以及成语等勾画出来，并鼓励学生根据所阅读的内容展开仿写，描写其他的小动物，如小老虎、小狗以及企鹅等，整个仿写练习中，可以加深学生对语文知识的理解，同时还能够引导学生掌握更多的写作技巧，因此通过阅读篇章引导学生展开仿写与续写对于提升小学生的写作能力具有重要意义。

所有数据经过粪便干物质校正。采用 Moreira 等的迭代方法计算每只个体的粪便皮质醇基值水平。具体方法为：去除每个个体粪便皮质醇高于 2 SD 的值，所得均值即为该个体的基值。粪便皮质醇浓度表示为 mean±SE。所有数据在做统计分析前进行正态检验。使用Excel 2010对数据进行整理及作图，并通过SPSS 18.0分别对麋鹿粪样中的皮质醇激素含量与当日客流量，以及麋鹿粪样中的皮质醇激素含量与前一日客流量进行相关性分析(personal correlation analysis)，检验设为双尾检验，显著性水平设置为α=0.05。

表1 麋鹿粪样皮质醇含量与前一日游客量的相关性

表2 麋鹿粪样皮质醇含量与当天游客量的相关性

我们发现，前一日客流量与皮质醇水平正相关，即客流量越大皮质醇水平越高，当日客流量与皮质醇水平不具有相关性。

3 讨论

野生动物的应激生理状态是机体应对各种生存胁迫因子而产生的一种生理适应，应激反应可对机体健康产生广泛的影响，过高或过低的应激状态都不利于动物的生存适应，过低的应激水平表明动物不能对各种应激源做出及时有效的反应，而过高的应激状态又会损害动物正常的生理活动，甚至引发疾病。

动物的性类固醇激素能反映其繁殖生理状态，当机体繁殖生理机能异常时，动物体内的性类固醇激素分泌水平会呈现波动并表达于粪便。任何过高或过低的粪样性类固醇激素值，表明该麋鹿个体的繁殖生理状态可能偏离了正常值范畴，其偏离程度是其繁殖生理状态的直接反应，以此作为诊断该个体繁殖生理状况的依据之一。

人为干扰主要包括动物栖息地的破坏[15-16]、城市化[17-18]以及游客干扰[13，19-20]等。其中游客对动物体造成的影响是当前动物保护、动物福利关注的热点问题。与血样相比，粪样内的皮质醇激素水平可以更准确地反映动物的实际应激性，但是由于胃肠的蠕动时间较长，食物在消化道中停留一段时间，使得粪样中的激素从分泌至排出往往有一定时间的延迟性[21-22]。对于麋鹿而言，从吃下食物到排粪约需1 d左右时间，其分泌的皮质醇激素在粪样中排出需要1 d左右的延迟。

本研究结果显示：粪样中的皮质醇变化均与前一日的游客量显著性相关，而与当日客流量的相关性则不明显，即表示粪样中的皮质醇存在1 d左右的延迟性。这一点与李骏[23]、刘娟等[24]、于小杰等[25]、崔媛媛等[11]对于大熊猫的研究结果相一致。