无创DNA 产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用价值

覃颜

(珠海市斗门区妇幼保健院医院，广东 珠海 519125)

0 引言

染色体非整倍体异常属于胎儿常见的一种染色体异常，每三百个胎儿中就有一个胎儿发病，主要包括13-三体综合征、18-三体综合征、21-三体综合征等[1]。其中21-三体综合征也叫做唐氏综合征，患儿表现以先天智力低下、五官畸形、四肢畸形等症状为主[2]。因此产前检查中准确诊断胎儿染色体非整倍体疾病，对优生优育具有重要意义。上世纪以来，我国在孕中期逐渐开展血清学筛查，随着研究的深入，更多的无创性筛查指标得到应用[3]。无创DNA 产前检测通过测量孕妇外周血，提取总游离DNA，然后使用高通量测序技术结合生物学信息分析，获得胎儿的游离DNA 片段，以此判断胎儿的染色体异常情况[4]。无创DNA 产前检测不对孕妇造成创伤，具有较高的敏感度和特异度，众多研究证实该方法对21-三体综合征的检出率在99%左右[5]。为此，本文将对在胎儿染色体非整倍体疾病诊断中采用无创DNA 产前检测的价值展开探讨，详细报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本次研究共2685 例研究对象，均选自在我院进行围产期保健的单胎孕妇，选取时间范围在2019 年01 月至2020 年06 月期间。其中219 例为唐氏筛查高风险，431 例为临界风险，2035例为没有高危因素直接进行早期唐筛和无创DNA 检测。其中年龄最小19 岁，最大46 岁，平均年龄为(30.26±4.39)岁；孕周最小12 周，最大26 周，平均孕周(18.46±1.41)周。。全部孕妇及家属了解研究内容，同意参与研究并签字。

1.2 方法

标本采集和处理：采集所有孕妇外周血7mL，放置于EDTA抗凝管中，8 个小时之内进行离心处理，离心环境4℃，离心速度3000r/min 和13000r/min 各进行离心处理10 分钟，做好血浆分离工作，分装(每管650μL)放置于80℃的环境中进行保存。采取DNA 提取试剂盒(来源于德国，QIAGEN)应用磁珠分离对样品DNA 进行抽提；应用克列诺酶、T4 多聚核苷酸激酶和T4 DNA 聚合酶对所提取到的血浆DNA 末端进行补平，在血浆DNA 的3"末端±基“A”，将特定接头接在DNA 片段末端，应用PCR 技术对含有接头的两端DNA 片段展开扩增处理，获取到与样本相对应的DNA 文库，对所获取到的DNA 文库展开质量检测，检测符合要求展开上机测序。无创DNA 检测：采取高通量基因测序展开产前筛查检测，测序仪器选取为Illumina Nextseq500 二代测序仪，确保所获得的有效reads 数大于等于400M，平均每个样本reads 数大于等于4M。参考BWA map软件将人类基因组参考序列图谱和运行序列展开对比。采取NIPT 分析系统(来源于广州万德基因医学科技有限公司)以分析结果为依据统计每一条染色体含有的序列个数。分析胎儿的患病风险以及染色体核型。

对于无创DNA 检测结果阳性者，进一步实施羊水穿刺或者胎儿染色体核型分析证实结果。在妊娠18 周至24 周期间通过超声引导下进行羊膜腔穿刺术，抽取20mL 羊水，送至实验室培养，得到细胞，通过滴片处理后G 显带分析，每例观察20 个分裂象。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 所有孕妇无创DNA 检测结果情况

全部2685 例孕妇中，无创DNA 产前检测结果显示，74 例阳性孕妇，阳性检出率2.76%，74 例阳性孕妇中6 例为21-三体阳性，2 例为18-三体阳性，3 例为13-三体阳性，63 例性染色体及其他染色体异常，详情如表1 所示。

表1 无创DNA 检测结果情况[n(%)]

2.2 无创DNA 和羊水染色体核型结果对比

对74 例阳性孕妇进一步行羊水穿刺检查，结果9 例得到确诊，6 例为21-三体阳性，1 例为18-三体阳性，0 例为13-三体阳性，2 例性染色体及其他染色体异常；无创DNA 检测结果和羊水染色体核型结果之间具有良好的一致性，差异无统计学意义(P＜0.05)，详情如表2 所示。

表2 无创DNA 和羊水染色体核型结果对比[n(%)]

3 讨论

胎儿染色体非整倍体疾病给患儿的家庭以及社会均带来巨大的精神和经济负担，严重影响到了我国新出生人口的素质[6]。因此如何有效控制和减少出生缺陷，一直是临床妇科重点关注的问题。目前临床针对胎儿染色体非整倍体疾病诊断以血清学生化筛查为主，其中在孕中期进行血清学三联筛查法对该类型疾病的检出率最高可达75%[7]。而酶联免疫法作为主要的检测方法应用比较广泛，但是该检验方法容易受到多种因素的影响，造成各个单位诊断指标有所区别，进而造成诊断特异性和敏感性受到干扰，假阳性率较高[8]。而羊膜腔穿刺、脐血穿刺虽然是目前胎儿染色体非整倍体疾病的诊断标准，但是该方法属于侵入性操作，并且由于孕妇数量的不断增多，现阶段的卫生资源无法满足产前诊断需求[9]。

随着临床高通量测序技术的不断进步，无创DNA 产前检测逐渐应用于胎儿染色体非整倍体疾病的诊断中。从本次研究结果看出，无创DNA 产前检测共检出74 例阳性孕妇，而羊水穿刺检查共证实9 例孕妇，可见无创DNA 检测结果和羊水染色体核型结果之间具有良好的一致性(P＜0.05)。对于拒绝有创性产前诊断或者存在侵入性产前诊断禁忌症的孕妇，无创DNA检测具有快捷、无创等优势，安全性较高，不会受到母体孕周或者生育年龄等因素的影响，避免了对孕妇和胎儿造成损伤[10]。无创DNA 检测有效提高了产前诊断的准确性，减少了传统检测方法给孕妇带来的精神负担，避免了羊水穿刺等侵入性操作造成的并发症风险，不会增加流产的发生几率，为产前诊断提供了新方法，可作为传统产前诊断技术有效的辅助手段。本次研究中无创DNA 检测存在一定假阳性情况，可见无创DNA 检测仍然一定的局限性。无创DNA 检测只能对胎儿染色体拷贝数异常情况进行检出，而对于易位型、嵌合体、微缺失等结构异常无法有效检出，所以在产前诊断中可将无创DNA 检测技术和其他产前筛查体系相结合。

综上所述，无创DNA 产前检测应用于胎儿染色体非整倍体疾病诊断中，具有较高的准确率，同时操作便捷、安全性较好具有良好的临床推广意义。