组织CXCL13和Dyrk1b表达预测卵巢癌预后的临床意义

朱怡

卵巢癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，其死亡率占女性恶性肿瘤之首，并且在我国近年来的发病率呈上升趋势，严重威胁和影响女性的身体健康和生命安全[1]。卵巢癌的发病无典型的临床特征和体征，发现时往往已经属于晚期。CXCL13在结直肠癌、胃癌、乳腺癌和宫颈癌等多种肿瘤浸润，血管形成和肿瘤的发生发展中具有明显的相关性[2-4]。双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b(Dyrk1b)在乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和胃癌等肿瘤呈高表达，而在正常组织呈表达或者不表达，参与了肿瘤的发生发展[5]。本研究通过免疫组织化学的方法对卵巢癌组织进行检测，观察其表达与临床病理因素和预后的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2012年1月至2016年1月在我院行手术治疗的卵巢癌患者116例为卵巢癌组，年龄31～76岁，平均年龄(56.37±12.38)岁；组织类型：浆液性101例，非浆液性15例；分化程度：高分化29例，中分化23例和低分化64例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期98例；淋巴结转移：转移61例，无转移55例；腹腔积液：有71例，无45例。患者均行病理确诊卵巢癌；术前未行化疗和放疗；病历资料完整。选择同期在我院行卵巢良性肿瘤98例，为良性肿瘤组，年龄25～72岁，平均年龄(55.76±14.19)岁；以卵巢良性肿瘤无病变区域的组织标本30例为对照组，所有标本经医院病理科高年资的医师复核。

1.2 随访分组 卵巢癌患者术后以门诊、电话和微信等随访方式进行随访，患者均随访2年，其中死亡患者62例，为死亡组，生存患者54例为生存组。

1.3 免疫组织化学检测 卵巢癌，卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织采用免疫组织化学SP法进行染色。取出石蜡切片，用4 μm切片机连续切片，经过脱水和水化后，使用柠檬酸液体进行抗原修复2 min，用PBS冲洗3次，5 min/次，然后经过3%过氧化氢进行水浴10 min，然后用PBS冲洗3次，5 min/次，加入山羊血清50 μl封闭好抗原，并在37℃温度下孵育，时间为15 min。去除山羊血清，加入CXCL13和Dyrk1b一抗(1∶100)，在室温下孵育1 h，用PBS冲洗，在室温下孵育15 min后，行DAB显色，显微镜下观察显色4～5 min，自来水冲洗后用苏木素进行复染，PBS冲洗后返蓝，梯度乙醇脱水后，使用二甲苯脱水，用中性树脂封片，并固定。阳性表达的标准：以细胞核和细胞质为出现黄色、棕黄色和棕褐色为阳性表达。通过显微镜和图像采集软件Zoom Browser Ex在40倍物镜下，随机采取阳性部位的图像，每个组织随机采集10个阳性细胞的视野，使用Imagepro Plus图像分析软件测试每个阳性细胞视野的灰度值。根据参考文献[6]，计算出代表阳性染色的相对阳性单位(positive unit，PU)，每张切片阳性密度最高的区域随机选择5个视野，并求出平均值PU。

1.4 观察指标 比较3组表达CXCL13和Dyrk1b量的差别，卵巢癌组织表达CXCL13和Dyrk1b量与临床病理指标的关系，随访2年后生存组和死亡组的差异，预测死亡的灵敏度和特异性。

2 结果

2.1 3组组织CXCL13和Dyrk1b表达量比较 卵巢癌组组织表达CXCL13和Dyrk1b的量明显高于良性卵巢瘤组和正常对照组(P<0.01)，而良性肿瘤组明显高于正常对照组(P<0.01)。见表1。

表1 3组组织CXCL13和Dyrk1b表达量比较 PU值,

2.2 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量与临床指标的关系 卵巢癌组织表达CXCL13和Dyrk1b量与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、腹腔积液、CA125水平和对化疗药物敏感性具有明显的相关性(P<0.01)，而与年龄年龄、绝经、组织类型和肿瘤直径无明显相关性(P>0.05)。见图1，表2。

表2 卵巢癌患者组织CXCL13和Dyrk1b表达量与临床指标的关系 PU值,

2.3 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量与预后的关系 死亡组的卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量明显高于生存组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表3 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量与预后的关系 PU值,

2.4 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量在预测预后的临床价值 卵巢癌组织表达CXCL13和Dyrk1b量在预测死亡方面，通过受试者曲线进行分析，发现CXCL13和Dyrk1b表达量在预测死亡具有较高的灵敏度和特异性，并且发现两个指标通过二元Logistic分析得曲线0.265X CXCL13+0.216XDyrk1b-19.111，形成联合检测指标，其灵敏度87.1%，特异性88.9%，曲线下面积明显优于单纯指标CXCL13(Z=2.200，P=0.028)和Dyrk1b(Z=2.573，P=0.010)，而在预测死亡方面CXCL13和Dyrk1b两指标无明显差异(P>0.05)。见表4，图2。

表4 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量在预测预后的临床价值

3 讨论

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，由于卵巢癌位置较深，早期症状不典型，发现往往属于晚期，所以卵巢癌是妇科预后较差的恶性肿瘤。趋化因子参与了肿瘤的血管形成，在肿瘤细胞黏附，侵袭，增殖和转移等过程中具有重要的作用。CXCL13是趋化因子中的重要成员，在调节炎症和内环境稳定方面具有作用，对肿瘤的血管形成和肿瘤细胞的远处转移具有重要作用[7]。本研究表明卵巢癌组织标本表达CXCL13的量明显高于卵巢良性肿瘤和正常对照组，并且发现卵巢癌组织表达CXCL13量与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、腹腔积液、CA125水平和对化疗药物敏感性具有明显的相关性，说明CXCL13参与了卵巢癌的发生发展，并且与卵巢癌的恶性程度具有相关性，同时本研究提示CXCL13指标显示CXCL13与卵巢癌患者化疗耐药具有一定的联系。对乳腺癌患者进行研究发现乳腺癌组织表达CXCL13明显高于正常组织，并且发现与患者的预后不良具有显著的关系[7]。另一项肺癌的研究中，发现CXCL13在肺癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常肺组织，并且其阳性率与肿瘤的分化程度，脉管内癌栓和淋巴转移等具有相关性[9]。本研究还发现2年随访出现死亡患者卵巢癌组织CXCL13表达量明显高于存活者，说明CXCL13表达量与患者的预后密切相关。本研究还发现卵巢癌组织CXCL13表达量在预测患者2年死亡方面具有较高的灵敏度和特异性，当卵巢癌组织标本CXCL13蛋白表达量>38.6 PU，其灵敏度79.0%，特异性88.9%，曲线下面积0.881，说明当卵巢癌组织标本表达CXCL13到一定的量，可能预示着预后不良，提示我们对这部分患者进行早期干预。

图2 卵巢癌组织CXCL13和Dyrk1b表达量在预测死亡的效能

本研究还显示卵巢癌组织Dyrk1b表达量明显高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织，并且发现卵巢癌组织Dyrk1b表达量与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、腹腔积液、CA125水平和对化疗药物敏感性具有明显的相关性，说明Dyrk1b不仅参与卵巢癌的发生发展过程，还与卵巢癌患者的预后和化疗耐药具有明显的相关性。Dyrk1b是属于Minibrain/Dyrk家族成员，具有11个外显子和10个内含子，除骨骼肌细胞外在大多数细胞呈低表达，而在结肠癌，宫颈癌，肺癌和卵巢癌等肿瘤中呈高表达，在卵巢癌的研究中发现其表达水平是正常卵巢上皮细胞的2～17倍[14]。在一项小鼠的研究中发现将Dyrk1b敲除的小鼠为引起明显的表型改变，提示Dyrk1b对生存能力并无明显影响，不是生存必须的蛋白，但对卵巢癌的发生发展具有关键作用[11]。在一项研究中显示宫颈癌组织Dyrk1b表达量与化疗耐药具有明显的相关性[12]。Dyrk1b在对宫颈癌患者的影响，显示随着并且的进展Dyrk1b阳性表达率越高，使用Dyrk1b抑制剂能够明显抑制宫颈癌细胞的增殖，并诱导宫颈癌细胞的凋亡[13]。本研究还显示在卵巢癌患者死亡组卵巢癌组织Dyrk1b表达量明显高于存活组，说明卵巢癌组织Dyrk1b表达量是卵巢癌预后的重要指标。本组研究在研究卵巢癌组织Dyrk1b表达量在预测死亡方面的研究，但Dyrk1b表达量>43.17PU时，其预测2年内死亡灵敏度为79.0%，特异性79.6%，曲线下面积0.862，说明卵巢癌组织Dyrk1b表达在预测预后方面具有重要参考价值。本研究还发现联合CXCL13和Dyrk1b表达量在预测2年死亡方面明显优于单个指标预测，其灵敏度高达87.1%，特异性88.9%，曲线下面积0.935，说明联合检测能够提高预测不良预后的效能。

综上所述，CXCL13和Dyrk1b参与了卵巢癌的发生发展，联合检测组织CXCL13和Dyrk1b表达量对预后判断具有重要的临床价值。