生物检测技术PCR 在兽医微生物检测中的应用

张玲玲，崔嵩嵩

（哈尔滨元亨生物药业有限公司，黑龙江 哈尔滨 150025）

PCR 技术的出现最早是在上世纪80年代的美国，该技术可在检测特定DNA 的片段中发生微量扩增，从而完成检测的工作任务。应用在相关的领域，PCR 技术在灵敏度和特异性方面都比较好。随着相关技术水平的不断发展与创新，目前PCR 技术的应用范围在不断扩展，最初是应用在基因克隆方面，而今在兽医临床的治疗和诊断过程中都有充分的应用。所以针对PCR 技术开展更加深入的研究，在实现微生物精准检测方面具有重要意义。

1 PCR 技术的原理与应用特征

1.1 PCR 技术原理 将现有的技术作为基础，使各种DNA片段序列有效的进行扩增，加之人工合成DNA 片段的相互作用，即可在两条链的末端进行互补，凸显出核苷酸引物，基于此种方式的作用，受到酶的作用之后待检DNA 序列会发生扩增，称其为PCR 技术。通常PCRM 就是体外人工选择性扩增DNA 的方法，类似生物体内的DNA 的复制情况。在这整个反应过程中，DNA 模板会发生变性、退火以及延伸3 个过程，并且是由许多个循环序列而组成的。首先，受到高温的作用之后DNA 模板发生变性解链，之后会通过降温方式而促使寡核苷酸和模板DNA 链在三端都有退火的情况。此外受到聚合酶的作用，存在4 种dNTP 底物，同时会在模板互补的实际过程中而出现新的链条形成。除此之外，在单一的拷贝过程中，基因会将25～30 作为基数，最终能够将其扩展到100 万～200 万。扩增的后期会因为产物的积累，造成原来本是呈现指数扩增的反应转变为平坦的曲线，而且产物也不会再继续随着循环数而呈现出明显的上升趋势，实际应用中将其称为平台效应。处于平台期，原先因为错配而产生的低浓度非特异性产物会呈现出继续大量扩增的状态，从而能够达到比较高的水平。因此，在实际应用过程中需要针对循环次数进行适当的调节，并且反应要结束在平台期之前，这样可以有效降低非特异性产物的量。平台期需要的循环次数主要就是取决于样品中模板的拷贝。

1.2 PCR 技术特征 PCR 反应结束后自然会产生新的引物，还包括各种聚合酶以及缓冲液，但是技术的基本特征主要体现在以下几个方面：首先是引物，DNA 片段在扩增的过程当中主要会受到寡核苷酸的作用，使得PCR 扩展特性中的关键因素突显出来，并且在针对引物的设计过程中，还可以突显出PCR 扩展的成效。一般碱基会在链条之中发生不断的重复，这样会使引物之间的Tm 与标准值更加的接近，从而有效避免GC 含量呈现出过高的趋势。其次是PCR 在扩展中能够充分的应用DNA 聚合酶，并且应用的类型是Tag DNA，主要就是受到水生栖热菌的作用而产生的，在热稳定性方面表现比较好。如果PCR 具有比较高的扩展能力，就会影响DNA 的具体特性。

2 PCR 技术在兽医微生物检测中的应用

在兽医微生物检测工作中，采用传统方法进行微生物监测工作的步骤非常繁琐，而且具有比较强的局限性，即实际操作时要求待测样品经过被检测的微生物富集培养后，至微生物的数量达到既定水平，才能开始分离并检测。但采用PCR 技术可有效的避免以上问题，在兽医微生物检测的过程中，只需要通过特定的核苷酸引物，即可进行快速分析，并对样本中的微生物种类加以确定。具体操作是提取细菌靶DNA，过滤的方式或离心方式处理，从待检样品中分离出细菌细胞；针对细菌细胞采取裂解式处理，通过核酸纯化处理之后，可以为后续的检验工作奠定基础。实际检测时为了操作的便捷性，还可直接裂解待检样品中细菌细胞，再将其中的核酸抽取出来。

目前，在我国PCR 技术被应用到许多领域，且衍生许多新颖的检测技术。将PCR 技术与其他技术进行联合应用能有效解决生产中存在的技术难题。但是日常的实际操作和应用的过程中仍然存在问题，所以还应该不断的深入研究。随着PCR 技术不断的完善，并且联合应用其他的新技术，能够在很大程度上推动畜牧及水产养殖业有效的发展进步。

3 结语

当前生产中应用的生物检测技术方式，PCR 技术的精准度具有明显的优势，所以广泛并且充分的应用在兽医微生物检测领域。从事检测工作的人员需要将多试剂进行试管液相杂交，这样能够完成具有比较高灵敏度的快速诊断，最终在一定程度上提升实际检测诊断的效率。