酒精性肝病患者肠道菌群变化与T淋巴细胞的相关性研究

温建军

【摘要】 目的：研究酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）患者肠道菌群变化与T淋巴细胞的相关性。方法：将2018年10月-2020年10月本院收治的ALD患者105例作为观察组，另选取同期到本院体格检查的健康者100例作为对照组。入选者均接受肠道菌群、淋巴细胞亚群检测。观察两组肠道菌群、淋巴细胞亚群水平，并分析肠道菌群变化与淋巴细胞亚群的相关性。结果：观察组大肠埃希杆菌（7.48±1.20）lgCFU/g、粪肠球菌（8.81±1.49）lgCFU/g、乳酸杆菌（7.08±1.26）lgCFU/g，均高于对照组（6.91±1.65）、（7.38±1.43）、（6.12±1.08）lgCFU/g，雙歧杆菌水平（7.06±1.25）lgCFU/g低于对照组（8.92±1.14）lgCFU/g，差异均有统计学意义（P<0.05）。观察组CD3+（69.85±12.95）%、CD4+（38.61±10.27）%、CD8+（23.87±9.34）%、NK细胞水平（11.73±5.29）%，均低于对照组（75.74±8.53）%、（47.24±7.92）%、（26.65±8.45）%、（20.87±6.34）%，B细胞水平（15.93±10.14）%高于对照组（11.15±3.76）%，差异均有统计学意义（P<0.05）。经Pearson相关性检验结果显示，大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌与B细胞均呈正相关（P<0.05），大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈负相关（P<0.05），双歧杆菌与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈正相关（P<0.05），双歧杆菌与B细胞呈负相关（P<0.05）。结论：ALD患者存在肠道菌群失调、免疫功能紊乱现象，且两者具有一定的相关性，可为ALD诊治、预后评估提供参考。

【关键词】 酒精性肝病 肠道菌群变化 T淋巴细胞 相关性

[Abstract] Objective： To study the relationship between changes in intestinal flora and T lymphocytes in patients with alcoholic liver disease. Method： A total of 105 patients with ALD who were treated in the hospital from October 2018 to October 2020 were enrolled in the observation group， another 100 healthy subjects who had taken physical examinations in the hospital for the same period were selected as the control group. All selected subjects were tested for intestinal flora and lymphocyte subsets. The levels of intestinal flora and lymphocyte subsets in the two groups were observed， the correlation between changes in intestinal flora and lymphocyte subsets was analyzed. Result： The levels of Escherichia coli， Enterococcus faecalis， and Lactobacillus in the observation group were respectively （7.48±1.20）， （8.81±1.49）， （7.08±1.26） lgCFU/g， higher than （6.91±1.65）， （7.38±1.43）， （6.12±1.08） lgCFU/g in the control group， the Bifidobacteria level was （7.06±1.25） lgCFU/g in the observation group， lower than （8.92±1.14） lgCFU/g in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of CD3+， CD4+， CD8+ and NK cells in the observation group were （69.85±12.95）%， （38.61±10.27）%， （23.87±9.34）% and （11.73±5.29）% respectively， lower than （75.74±8.53）% （47.24±7.92）%， （26.65±8.45）% and （20.87±6.34）% in the control group， the B cells level was （15.93±10.14）% in the observation group， higher than （11.15±3.76）% in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Pearson correlation test showed that， Escherichia coli， Enterococcus faecalis and Lactobacillus were positively correlated with the level of B cells （P<0.05）， and Escherichia coli， Enterococcus faecalis， Lactobacillus were negatively correlated with CD3+ CD4+， CD8+ and NK cells （P<0.05）， and Bifidobacteria was positively correlated with CD3+， CD4+， CD8+ and NK cells （P<0.05）， Bifidobacteria was negatively correlated with B cells （P<0.05）. Conclusion： ALD patients are with imbalanced intestinal flora and immune dysfunction， and there is certain correlation between them， which can provide reference for ALD diagnosis， treatment and prognosis evaluation.

[Key words] Alcoholic liver disease Intestinal flora changes T lymphocytes Correlation

First-authors address： Ganzhou Peoples Hospital， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.002

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是指长期大量饮酒所致的肝脏疾病，多数患者患病早期无典型症状，随着病情的进展，将逐渐发展为肝硬化、酒精性肝炎，更为严重将出现广泛肝细胞坏死、肝功能衰竭，危及患者生命安全[1-2]。目前乙醇已成為导致肝损伤的重要原因，乙醇在直接损害肝脏外，还可导致肠道菌群紊乱，而经诸多研究证实，肠道菌群失调参与ALD发生、发展，若患者肠道菌群紊乱、免疫功能低下可促使肠道细菌移位，诱发严重并发症[3-5]。鉴于此，本研究将观察肠道菌群变化与ALD患者T淋巴细胞的相关性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2018年10月-2020年10月本院收治的ALD患者105例作为观察组，另选取同期到本院体检中心进行体格检查的健康人群100例作为对照组。观察组纳入标准：（1）ALD诊断符合文献[6]中相关标准，经肝脏B超、CT、临床症状表现检查确诊;（2）入选者近期内未接受抗生素、益生菌制剂治疗;（3）均无嗜肝病毒感染者。排除标准：（1）合并肝细胞癌者;（2）伴有中毒、药物性肝损伤者;（3）自身免疫性肝病者;（4）无法积极参与本次研究相关检查者。对照组纳入标准：经相关体检健康人。排除标准：依从性差。本研究已经医院伦理学委员会批准，研究对象均知情同意。

1.2 方法 （1）入选者肠道菌群培养、检测具体方法如下：通过无菌便盒收集大便，并采取系列稀释法稀释粪便标本，其中乳酸杆菌培养利用MRS琼脂培养基（由上海广锐生物科技有限公司提供），双歧杆菌培养利用BS培养基250（由青岛高科园海博生物技术有限公司提供），粪肠球菌培养利用MERCK肠球菌培养基（由上海市默克微生物培养基厂家提供），大肠埃希杆菌培养利用麦康凯琼脂板（由郑州安图绿科生物工程有限公司提供），针对乳酸杆菌、双歧杆菌的培养需置于37 ℃环境中孵箱，并于厌氧环境中培养3 d，大肠埃希杆菌、粪肠球菌则于37 ℃环境中孵箱，于需氧条件下培养，并采用梅里埃ATB半自动微生物鉴定系统完成细菌鉴定。（2）淋巴细胞亚群检测具体方法如下：采集入选者空腹静脉血5 mL，采用美国FACS Calibur流式细胞仪（由BD公司提供）对淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、B细胞、NK细胞）进行测定。

1.3 观察指标 观察两组肠道菌群、淋巴细胞亚群水平，并分析肠道菌群变化与淋巴细胞亚群的相关性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0统计学软件，计数资料以百分数和例数表示，比较采用字2检验;计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验;计量资料间双变量相关性分析采用Pearson相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料对比 观察组：女36例，男69例;年龄29～76岁，平均（52.64±3.74）岁;体质量指数（body mass index，BMI）16～26 kg/m2，平均（22.59±1.10）kg/m2;血糖4.02～6.85 mmol/L，平均（5.26±1.01）mmol/L。对照组：女33例，男67例;年龄26～78岁，平均（52.59±3.76）岁;BMI 16～27 kg/m2，平均（22.62±1.07）kg/m2;血糖3.86～6.79 mmol/L，平均（5.23±0.97）mmol/L。两组基本资料相比，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组肠道菌群指标对比 与对照组相比，观察组大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌水平均较高，双歧杆菌水平较低，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 两组T淋巴细胞水平对比 与对照组相比，观察组CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞水平均较低，B细胞水平较高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 肠道菌群指标与T淋巴细胞相关性分析 经Pearson相关性检验结果显示，大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌与B细胞均呈正相关（P<0.05），大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈负相关（P<0.05），双歧杆菌与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈正相关（P<0.05），双歧杆菌与B细胞呈负相关（P<0.05）。见表3。

3 讨论

近年来由于我国饮酒人数、饮酒量的不断上升，促使临床上ALD患者占比逐渐增大[7-9]。目前ALD的发病机制仍未完全明晰，但长期大量摄入乙醇已成为诱发ALD的重要因素。经研究发现，酒精可导致肠道菌群紊乱，而肠道菌群比例失调将增加ALD发生风险，在正常情况下，人体每克粪便微生物约有1011个，而所有菌谱中常驻菌占了90%左右，各菌群间将依据特定比例组合，利于达到相互制约与生存的作用，进而从质与量上达到生态平衡，在机体吸收、消化中发挥了重要作用[10-12]。

酒精将损伤人体肠道屏障功能，进而破坏肠道黏膜屏障，提高肠道通透性，促使肠道菌群移位[13-15]。大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌作为常见的肠道菌群，本研究中针对健康者、ALD患者肠道菌群进行了分析，结果得出，与对照组相比，观察组大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌水平均较高，双歧杆菌水平较低（P<0.05），由此可见，酒精可促使肠道菌群失调，并以有害菌增加、益生菌减少为主要表现。高祀龙等[16]研究实证，较健康者相比，ALD患者机体内双歧杆菌水平将显著下降，与本研究结果较为相似，同时也进一步证实ALD患者伴有肠道菌群紊乱现象。近年来有研究指出，免疫介导的机制在ALD发生、转归间起到了一定的作用[17]。ALD患者长期饮酒，而酒精与其代谢产物乙醛加合物具有免疫原性，可启动免疫反应，进而打破机体免疫平衡，同时酒精与其代谢产物将诱导形成新抗原，而这将进一步激发免疫反应，造成肝脏损伤[18]。经诸多研究发现，肝脏内出现T淋巴细胞则反映存在免疫机制介导的炎症反应，而树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等肝脏先天免疫系统的过激反应将加重ALD的发展，加速肝脏损伤[19-20]。肝损伤时T细胞将向肝脏迁移，同时酒精将激活不同免疫表型T淋巴细胞，促使趋化因子、促炎性因子表达，由于T淋巴细胞浸润肝脏而破坏其功能，同时除T淋巴细胞外，永久性自然杀伤细胞也参与免疫应答，引起肝脏损伤。王大刚等[21]研究中观察了非嗜肝病毒感染所致的肝损伤患者病因及免疫功能变化情况，结果得出，非嗜肝病毒感染所致的肝损伤患者伴有淋巴细胞形态变化外，还存在免疫功能紊乱现象，而这也为诱发该类患者肝损伤的主要原因。本研究结果显示，与对照组相比，观察组CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞水平均较低，B细胞水平较高（P<0.05），由此可见，相对于健康人群而言，ALD患者伴有免疫功能紊乱现象，故通过测定外周血淋巴细胞亚群，可对ALD免疫功能变化进行评估，有助于为ALD的诊断、治疗及预后提供帮助。此外，经Pearson相关性检验结果显示，大肠埃希杆菌、粪肠球菌、乳酸杆菌与B细胞均呈正相关，与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈负相关（P<0.05），双歧杆菌与CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均呈正相关，与B细胞呈负相关（P<0.05），提示肠道菌群与淋巴细胞亚群具有一定的相关性，进而可通过调控菌群来干预患者免疫功能变化，同时基于肠道菌群、免疫功能紊乱在ALD发生、发展及转归中起到的重要作用，可将其用于评估ALD的诊治效果。

综上所述，ALD患者存在肠道菌群失调、免疫功能紊乱现象，且两者具有一定的相关性，利于为ALD诊治、预后评估提供参考。

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（收稿日期：2021-07-29） （本文编辑：张爽）