咽拭子取样法在新型冠状病毒核酸检测中的应用价值

王亚丽

（安徽省第二人民医院，安徽 合肥 230012）

随着国内生产、生活的逐渐恢复，严防新型冠状病毒肺炎疫情的再度传播已成为当下急需解决的重要问题。尽早识别、隔离新型冠状病毒肺炎患者是有效控制疫情传播的关键环节。新型冠状病毒肺炎患者主要有呼吸道症状、发热等临床症状，在发病的早期其可出现淋巴细胞计数、白细胞计数减少或正常及C 反应蛋白水平升高但血清降钙素水平正常等临床表现。有研究表明，新型冠状病毒肺炎患者肺部的影像学图像具有一定的特异性，故肺部CT 检查结果一度成为临床上诊断新型冠状病毒肺炎的主要依据[1]。新型冠状病毒肺炎患者的肺部CT 图像中出现小斑片影、多发的磨玻璃影像，病情严重的患者还出现肺实变，而且其纵膈淋巴结可见胸腔积液[2]。但是，随着临床研究的不断深入，发现影像学检查的结果不足以确定患者是否真正感染了新型冠状病毒。目前，国内各级卫生医疗机构已将新型冠状病毒核酸检测作为筛查新型冠状病毒肺炎的主要方法。但是，新型冠状病毒的RNA 属于单链，病毒分布的不稳定性和特殊性均易造成检测结果的假阴性。咽拭子取样法具有便捷、高效、取样时间短的特点，是目前各医院发热门诊进行新型冠状病毒核酸检测的主要取样方法。但是，目前关于使用咽拭子取样法进行新型冠状病毒核酸检测的灵敏度、特异度尚无报道。本次研究主要是探讨咽拭子取样法在新型冠状病毒核酸检测中的应用价值。

1 资料和方法

1.1 临床资料

本次研究的对象为在安徽省第二人民医院经临床综合诊断后被确诊的28 例新型冠状病毒肺炎患者。这28 例患者的病情符合《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》[3]中确诊病例的诊断标准，并被确诊为新型冠状病毒肺炎。在这28 例患者中，有男18 例，女10 例；其平均年龄为44.9 岁；其从发病至病情被确诊的平均时间为5.5 天；其中合并慢性肾病的患者有1 例，合并心血管疾病的患者有1 例，合并糖尿病的患者有3 例，合并高血压的患者有3 例；其中出现发热症状的患者有22 例，出现乏力症状的患者有10 例，出现咳嗽症状的患者有15 例，出现咳痰症状的患者有8 例，出现胸闷症状的患者有5 例，出现流涕症状的患者有3 例，出现咽痛症状的患者有3 例；其中血肌酸激酶同工酶水平升高的患者有1 例，血肌酸激酶水平升高的患者有1 例，血肌红蛋白水平升高的患者有1 例，血清降钙素原水平轻度升高的患者有1 例，血白细胞计数正常的患者有20 例，血白细胞计数降低的患者有7 例，血白细胞计数升高的患者有1 例，血淋巴细胞计数正常的患者有13 例，血淋巴细胞计数降低的患者有15 例，血中性粒细胞计数正常的患者有22 例，血中性粒细胞计数降低的患者有4 例，血中性粒细胞计数升高的患者有2 例，血小板计数正常的患者有23例，血小板计数降低的患者有5 例；其中肺部CT 图像表现为磨玻璃影、斑片影、实变影、纤维条索影、纵隔淋巴结肿大、胸腔积液的患者分别有25 例、19 例、8 例、8 例、5例、2 例。

1.2 研究方法

对这28 例患者均采用咽拭子取样法和诱导排痰取样法进行新型冠状病毒核酸检测，方法是：1）采用咽拭子进行取样的方法是：⑴本次研究使用的咽拭子为聚丙烯纤维头可折断塑料杆拭子。⑵将拭子放入无菌生理盐水中浸润，不得将拭子放进病毒保存液中，以免抗菌药引起患者发生过敏反应。⑶让患者用生理盐水漱口后，将头部轻微上仰后张大嘴巴并发出“啊”的声音，以充分显露其两侧的咽扁桃体。将拭子越过患者的舌根部，先在其两侧的咽扁桃体处来回擦拭3 次，再在其咽喉壁处上下擦拭3 次[4]。⑷取样完毕后迅速折断拭子的头部，再将拭子投入含有2 ml等渗盐溶液的离心管中旋闭管盖，将离心管独立包装后放入带有密封条的塑料袋中，在2 h 内送入实验室内进行检测。以上操作均由经过安全培训考核后合格的主治医师进行。2）采用诱导排痰进行取样的方法是：⑴将聚丙烯纤维头可折断塑料杆拭子放入无菌生理盐水中浸润。⑵在诱导排痰前的10 min, 让患者吸入沙丁胺醇气雾剂，随后检测其一秒用力呼气容积（FEV1），当其FEV1＜70% 时，指导其进行自然咳痰后，用拭子蘸取痰液。⑶取样完毕后的操作方法与咽拭子取样法相同。3）对样本进行新型冠状病毒核酸检测的方法是：⑴本次研究使用的仪器为全自动荧光定量RTPCR 仪，新型冠状病毒核酸检测测试盒由仪器生产厂家提供，试剂盒的靶区为新型冠状病毒基因组开放读码框和核壳蛋白。⑵按照试剂盒说明书使用荧光定量RT-PCR 技术对样本进行新型冠状病毒核酸检测。

1.3 观察指标

观察这些患者的检测结果。

1.4 统计学分析

对本次研究中的数据均采用SPSS 22.0 统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，用正态分布检验。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

在这28 例患者中，通过咽拭子取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的患者有26 例（占比为92.9%），通过诱导排痰取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的患者有2 例（占比为7.1%）。在通过咽拭子取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的26 例患者中，首次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有18 例（占比为69.2%），首次取样后新型冠状病毒呈阴性但第二次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有5 例（占比为19.2%），第二次取样后新型冠状病毒呈阴性但第三次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有2 例（占比为7.7%），第三次取样后新型冠状病毒呈阴性但第四次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有1 例（占比为3.8%）。

3 讨论

目前，我国新型冠状病毒疫情已经趋于稳定，但对该病的防控工作仍然不可松懈。核酸检测已经成为临床上诊断新型冠状病毒肺炎的主要手段[5]。新型冠状病毒主要分布在下呼吸道内。鼻咽部和口腔内新型冠状病毒的含量相对较低，故在鼻咽部取样进行核酸检测易出现假阴性的结果。为了提高新型冠状病毒的阳性检出率，在取样的过程中需注意防止样本中新型冠状病毒的RNA 发生降解。注意事项如下：1）尽可能减少受检者唾液的分泌。2）取样时需避免触碰到受检者咽喉壁、扁桃体等取样区以外的部位。3）在采集到样本的2 ～4 h 内，尽快将其送到实验室内。4）样本转运的温度需保持在2℃～8℃。5）从采集样本至进行检测的时间不应超过72 h，如采集样本至进行检测的时间超过72 h，应将其存放在零下70℃的环境中。新型冠状病毒核酸检测阳性率最高的样本为肺泡灌洗液，但对未采取气管插管的患者不主张通过肺泡灌洗进行取样。《新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识》中指出，新型冠状病毒核酸检测的样本可采用多部位取样法进行采集，以保证新型冠状病毒的阳性检出率[6]。因此，采用咽拭子或鼻咽拭子取样法进行核酸检测的结果为阴性但进行痰培养检测的结果为阳性的患者，可采用多部位取样法对其进行核酸检测。相关的研究结果表明，在新型冠状病毒肺炎患者的粪便样本中也可检出新型冠状病毒。有学者认为，采集粪便样本进行新型冠状病毒核酸检测更为方便，而且取样量较大，建议临床上可将粪便作为样本进行新型冠状病毒核酸检测。不同的实验室进行核酸检测的引物、探针等设备不同，其对靶标组织的核酸检测结果存在差异，因此多个实验室同时进行核酸检测，能够有效地防止因检测试剂、检测仪器、操作人员等因素所致的检测结果为假阴性的现象。相关的研究结果证实，新型冠状病毒存在变异的情况，通过不同实验室的核酸测序手段，能够有效地降低新型冠状病毒核酸检测结果为假阴性的现象。有研究表明，以血清为样本检测新型冠状病毒抗体的结果可避免检测结果假阴性的情况[7]。目前，我国虽然普及了新型冠状病毒核酸抗体检测，但随着检测技术的进一步发展，血清学检测同样能够成为确诊新型冠状病毒感染的检测方法。本次研究中被确诊的新型冠状病毒肺炎患者多为中年男性，以轻症为主。这些患者主要有干咳、发热等临床症状，其血白细胞计数正常、血淋巴细胞计数偏低、血乳酸脱氢酶的水平升高、血C- 反应蛋白的水平升高。其肺部CT 的图像以多出现双肺和胸膜下的斑片状、磨玻璃影为主要特征。上述患者的临床表现与湖北省病例报告基本一致。本次研究的结果显示，在这28 例患者中，通过咽拭子取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的患者有26 例，通过诱导排痰取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的患者有2 例。在通过咽拭子取样法进行核酸检测后被检出新型冠状病毒阳性的26 例患者中，首次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有18 例，第二次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有5 例，第三次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有2例，第四次取样后被检出新型冠状病毒阳性的患者有1 例。这说明，采用咽拭子取样法进行新型冠状病毒肺炎核酸检测具有操作简便、容易执行等优点，但经此取样法进行核酸检测的结果呈阴性的患者，仍不能排除其感染新型冠状病毒的可能，需多次为其采集样本进行核酸检测，以提高新型冠状病毒肺炎的确诊率。本次研究的不足之处是：本院的临床病例数较少，且样本采集的方式和部位相对单一，不能明确新型冠状病毒在人体内的分布情况与其病程的相关性，需在今后的研究中结合更多临床实验数据证实本次研究的结论。

综上所述，咽拭子取样法在新型冠状病毒核酸检测中具有较高的应用价值。该取样法在首次取样后进行新型冠状病毒核酸检测的阳性率较高，能够满足对新型冠状病毒肺炎患者的初步分拣需求，可作为医院发热门诊首选的核酸样本取样法。