结核感染T细胞及结核抗体检测在女性生殖器结核诊断中应用研究

孙秀利 李妘

(1.陕西省结核病防治院(陕西省第五人民医院)，陕西 西安 710100；2.汉中市中心医院妇科，陕西 汉中 723000)

女性生殖器结核的临床诊断，主要依赖于细菌学检验[1]。传统检验方式诊断敏感性难令人满意，诊断结果方面难以区分非结核分歧杆菌、活菌与死菌[2]。现有研究表明，结核抗体检测(TB-Ab)与结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)均可运用于结核病的临床诊断中，提供较佳的诊断效能[3]。本文浅析在女性生殖器结核诊断中采用结核抗体检测(TB-Ab)与结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)的诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2018年01月至2019年12月我院收治疑似生殖器结核的62例女性患者临床病案资料作研究样本，年龄19～41，平均年龄(27.62±4.16)岁；其中无生育史38例，有生育史24例；发热、咳嗽等症状出现至就诊时间7 d～20 d，平均就诊时间(13.43±3.82)d；其中结核病史8例，接触史3例，甲亢史1例，肾积水史1例。研究已上报本单位伦理委员会并获得批准，纳入标准：所有患者经痰涂片、结核菌素试验、影像学检查、实验室检查、子宫内膜诊刮病检或盆腔手术切除标本病检结果支持，最终评估疾病有无，作为金标准[4]；于本院接受检查及后续治疗，临床病案资料保存完整；患者知情同意。排除标准：未接受TB-Ab+T-SPOT.TB检查者；合并其他部位结核者；严重全身性感染者；禁忌症人群。以上基线资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1TB-Ab 经结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(北京健乃喜生物技术有限公司)，采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，严格依照说明书进行操作。取患者血清50μl加入检测卡上的样本孔内，样本中的结核抗体可与胶体金标记的抗原形成结核抗体-金标抗原复合物，因层析作用该复合物沿着试纸条向前移动，经T1检测线时IgM抗体-金标抗原复合物与膜上包被的小鼠抗人IgM结合显色，经T2检测线时IgG抗体-金标抗原复合物与膜上包被的结核抗原结合显色。胶体金标记的新西兰白兔IgG在质控线处与膜上包被的山羊抗兔IgG结合而显色，阴性样本仅在质控线处显色。

1.2.2T-SPOT.TB 使用结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒(酶联免疫吸附法)(海口维瑅瑷生物研究院)，基于γ-干扰素(IFN-γ)释放分析(IGRA)原理，判断是否存在针对结核分枝杆菌的特异性T细胞反应。采集患者5 mL血液，肝素钠抗凝，分装到阴性对照N、阳性对照P与检测T三种含有刺激抗原(通过基因工程技术修饰后表达成为刺激抗原的结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10)的培养管中，混合并孵育后经酶联免疫法检测特异性释放的IFN-γ水平。当N<0.5时，若T-N/P-N≥0.16判为阳性，否则为阴性；当0.5≤N<2.5时，T-N≥1.5判为阳性，否则为阴性；当N≥2.5时，判为无法确定，建议复查。

1.3观察指标 (1)阴/阳性：①真阴性：金标准与检验结果均提示阴性；②真阳性：金标准与检验结果均提示阳性；③假阴性：金标准提示阳性，但检验结果提示阴性；④假阳性：金标准提示阴性，但检验结果提示阳性。(2)准确率=(真阳性+真阴性)÷总例数×100%。(3)特异度=真阴性÷(假阳性+真阴性)×100%。(4)敏感度=真阳性÷(真阳性+假阴性)×100%。

1.4统计学方法 采用SPSS 21.0软件处理所得数据，计数资料以n(%)表示，行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1TB-Ab诊断阴/阳性分布情况 62例受检者中，阳性分布率85.48%(53/62)，阴性分布率14.52%(9/62)。本组真阳性41例，真阴性3例，假阳性6例，假阴性12例。

2.2T-SPOT.TB诊断阴/阳性分布情况 62例受检者中，真阳性46例，真阴性5例，假阳性4例，假阴性7例。

2.3TB-Ab+T-SPOT.TB联合诊断阴/阳性分布情况 62例受检者中，真阳性51例，真阴性8例，假阳性1例，假阴性2例。

2.4不同检测方案的准确率、特异度与敏感度比较 准确率、特异度与敏感度方面，均示TB-Ab+T-SPOT.TB高于T-SPOT.TB，T-SPOT.TB高于TB-Ab，且TB-Ab+T-SPOT.TB与其他两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

3 讨 论

回顾以往结核病诊断，主要在于对痰液的细菌学检测及相关影像学检查[5-6]。痰涂片检验被视作金标准，但其弊端同样存在，即送检时间长，操作较繁琐，不符合临床救治原则[7]。加之结核往往起病隐匿，患者难以自知，因此一定程度加大临床误诊率。

T-SPOT.TB能够在病早期或以往存在感染的患者样本中测得效应T细胞，具备较好的检测敏感度，检测效率高，一般24 h内可出结果。ESAT-6与CFP-10为结核分支杆菌复合群基因RD1区域rv3874与rv3875编码的结核特异性蛋白抗原，只在少部分的致病性分支杆菌及结核分支杆菌复合群基因组中出现，在卡介苗菌株、多数非致病性分支杆菌基因组中缺失，故基于ESAT-6与CFP-10基础之上设计而来的T-SPOT.TB检测技术，其ESAT-6、CFP-10可视为结核分支杆菌特异性抗原，通过体外定量测定全血细胞被结核分支杆菌特异性抗原刺激后释放的γ-干扰素水平，定性判断其是否具有针对结核分支杆菌的特异性T细胞反应。基于上述检测原理，该技术能够有效降低卡介苗与多种环境结核分枝杆菌的交叉反应，故而该检测技术的特异性更佳。两种抗原的多肽制备联用，进一步提升检测的敏感度[8-9]。故该技术在女性生殖器结核疾病的检测中价值高，值得应用。

TB-ab检出效果不及T-SPOT.TB的原因主要是由于IgG抗体多在女性生殖器结核中晚期出现，早期诊断可能会存在漏诊情况[10]，亦不排除与人体对致病菌的免疫应答反应有关。部分患者由于自身免疫功能出现异常，进而致其体内特异性结核抗体表达水平过低，检测的准确性受其影响。活动性女性生殖器结核，患者体内结核抗原与特异性结核抗体结合，生成免疫复合物，加之试剂盒检出效果能够覆盖的抗原表位不全，导致检测效果失准[11]。

考虑到女性生殖器结核病T细胞淋巴因子分型复杂，细胞因子的反应可能受到所处环境的干预发生变化，因此T-SPOT.TB技术诊断疾病同样有其局限性。本次研究结果显示，TB-Ab+T-SPOT.TB联合诊断的阴/阳性、准确率、特异度与敏感度均优于T-SPOT.TB诊断，T-SPOT.TB诊断的上述指标又佳于TB-Ab诊断，提示女性生殖器结核诊断中，TB-Ab+T-SPOT.TB联合诊断效能最高，进一步论证上述观点的正确性。

综上，TB-Ab+T-SPOT.TB联合检测在女性生殖器结核诊断中应用效果更好，其次为T-SPOT.TB诊断，推荐临床使用联合检测。