云南省昆明市2014—2019年猪伪狂犬病感染情况调查

杜 敏 ， 金卫华 ， 吴海兴 ， 黄文忠 ， 夏春香 , 曹 睿

(昆明市动物疫病预防控制中心 ， 云南 昆明 650000)

猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorables virus,PRV)引起的一种急性传染病。多种动物都可感染PRV，其中猪最为敏感，病猪、带毒猪为本病重要传染源。PRV主要通过口鼻、精液、胎盘等方式传播，可引起仔猪出现神经系统症状和急性死亡、育肥猪呼吸障碍和生长缓慢以及种猪繁殖障碍等[1-2]。猪感染PRV后可终生带毒并且不断排毒，该病毒会破坏机体免疫系统，引起机体免疫抑制，容易继发感染其他疫病[2-3]。近年来，昆明市养猪业发展迅速，2014—2017年生猪饲养量基本维持在700万头以上，分别为704万头、733万头、743万头和720万头，2018年、2019年有所下降，生猪饲养量分别为369万头和345万头。自2011年以来，我国多个地区发生猪PR的流行，其病毒的致病力明显增强，发病率和死亡率也明显上升，给养猪业造成了严重的经济损失[4-5]。为掌握昆明市PR流行情况，评估免疫效果和暴发风险，本中心兽医实验室连续对昆明市猪PR开展血清学抗体检测和病毒核酸检测，以期为昆明市猪PR的防控与净化提供有效的数据支撑和科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品采集 按照各年度昆明市动物疫病监测与流行病学调查计划，春季、秋季各开展1次集中监测，样品从定点监测猪场及定点监测乡镇采集，每年的抽检数量大致依据猪养殖量分配，群体数量按不同规模进行随机采样，即存栏10只及以下的养殖场(户)全部采样，存栏10只以上的按10%的比例进行采样。2014—2019年对规模场和散养户，共249场次的2 948份猪血清样品进行了PRV gE抗体检测；对规模场、散养户和屠宰场，共174场次的1 487份猪组织样品和442份公猪精液进行了PRV病原检测。

1.2 主要仪器 生化培养箱(上海跃进医疗器械有限公司)、酶标仪(Anthos 2010)、组织研磨仪(北京鼎浩源科技有限公司TL 2020)、Ⅱ级生物安全柜(Thermo 1300 SERIES A2)、核酸提取仪(西安天隆科技有限公司NP 968)、PCR仪(ABI PTC-200)、凝胶成像系统(BIO-RAD)。

1.3 主要试剂 PRV gE抗体检测试剂盒(武汉科前生物股份有限公司)、核酸提取试剂盒(西安天隆科技有限公司)、PRV PCR检测试剂(TaKaRa PremixTaqTM)。

1.4 方法

1.4.1 抗体检测 采用gE-ELISA方法，严格按照试剂盒说明书进行检测和结果判定。

1.4.2 病原检测 猪组织样品经研磨处理成匀浆液，然后离心取上清液提取核酸进行PCR检测。核酸提取、PCR检测和结果判定均按照试剂盒说明书进行。

1.4.3 数据统计分析 使用Excel对检测数据按不同年度、不同场点类别、不同区域进行统计分析，利用统计学软件SPSS对数据进行差异显著性分析。

2 结果

2.1 血清学检测

2.1.1 时间分布 2014—2019年采用ELISA方法，对全市162个乡(镇)、210个村委会共计249个监测场点的2 948份猪血清样品进行PRV感染抗体(gE抗体)检测，检出阳性样品609份，个体阳性率为20.66%；检出阳性场点49个，场点阳性率为19.68%。2014—2019年PRV感染抗体个体阳性率呈逐渐上升趋势，从15.13%上升到35.18%，差异显著(95%CI,P<0.05)；场点阳性率也逐年上升，从20.00%上升到29.41%，差异不显著(95%CI,P>0.05)。检测结果见表1。

表1 2014—2019年昆明市猪PRV感染的血清学检测结果

2.1.2 群间分布 共集中检测249个监测场点，包括规模场134个、散养户115个。规模场和散养户的个体感染抗体阳性率分别为22.23%和14.01%，但差异不显著(95%CI,P>0.05)。规模场和散养户的场点感染抗体阳性率分别为26.12%和12.17%，规模场的场点感染抗体阳性率显著高于散养户(95%CI,P<0.05)，感染情况较散养户更为严重。检测结果见表2。

表2 2014—2019年昆明市不同场点类型猪PRV感染的血清学检测结果

2.1.3 地区分布 对昆明市不同地区进行猪PR感染抗体检测，结果显示：昆明市各地区都有PRV感染情况，感染抗体个体阳性率介于13.86%～51.39%，主城区显著高于北部、南部地区(95%CI,P<0.05);场点感染抗体阳性率介于13.95%～30.00%，地区间差异不显著(95%CI,P>0.05)。其中昆明主城区感染情况较为严重，感染抗体个体阳性率达到了51.39%，其防控形势比较严峻。检测结果见表3。

表3 2014—2019年昆明市不同地区猪PRV感染的血清学检测结果

2.2 病原学检测 2014—2019年采用PCR方法，对全市130个乡(镇)、128个村委会、42个规模场、22户散养户、109个屠宰场，共174个监测场点的1 929份样品进行猪PRV病原学检测，其中猪组织样品1 487份，公猪精液样品442份，检测结果全部为阴性，检测结果见表4。

表4 2014—2019年昆明市猪组织、精液样品PRV感染的病原学检测结果

3 讨论

血清学检测结果显示：2019年猪PRV感染抗体(gE抗体)个体阳性率和场点阳性率最高，分别为35.18%和29.41%。近几年来猪PR感染抗体(gE抗体)阳性率有逐渐升高的趋势，同时对照其他几个省份监测结果[6,8-10]发现其变化趋势一致，都有不同程度的增幅，仍处于较高水平，说明昆明市猪PR防控工作有待进一步加强。不同场点监测结果显示，规模场感染抗体个体阳性率和场点阳性率均高于散养户，可能与规模场猪群流动性大以及与外界交流相对频繁有关[6-7]。不同地区统计结果表明，昆明市猪PR流行有一定的空间分布特征，其中主城区流行较为严重，可能原因：一是主城区交通四通八达，从地理环境及交通优势及市场流通等因素分析认为易造成疫病的流行；二是与不同区域生猪养殖规模化水平、饲养管理模式和防疫水平等有关。昆明市猪群PRV感染范围较广，部分区域感染程度较为严重，因此，昆明市猪群PR的防控和净化可实行区域化管理，以连续2年PRV感染抗体阳性率低于20%的区域为切入点，根据PR流行情况制订相应的防控和净化措施，反复进行“检测—分群—免疫—检测”，逐步淘汰和缩小阳性猪群。同时加强生猪调运监管，避免从高风险的区域和场群引进生猪。

病原学检测结果显示：近几年来均未检测出PRV核酸阳性，公猪精液也未检出。在监测过程中出现血清学检测感染抗体阳性但病原学检测阴性结果，其原因可能：一是采样的时候血清样品和组织样品没有一一对应；二是采样监测数量较少，覆盖面较窄，下一步应做好采样工作，继续扩大监测范围，增加监测数量。种猪是关系生猪疫病控制的源头，带毒的种猪会成为猪场病毒的存储器[8]，即使实验室检测区分了野毒感染猪，但由于目前生猪价格居高不下，也不可能将阳性猪全部淘汰，所以一旦感染，净化工作非常艰巨。昆明市可首先以种猪场为单位实行猪PR的净化，采用基因缺失疫苗和gB-ELISA、gE-ELISA相结合，通过疫苗免疫、检测和淘汰相结合的方式，逐步建立高gB抗体和gE抗体为阴性的猪群，逐步达到净化该病的目标。

猪PR作为主要动物疫病净化要求的病种之一，做好猪PR的控制至关重要。昆明市猪群PRV感染范围较广，部分区域感染程度较为严重，防控工作有待进一步加强，建议扩大监测范围，增加监测数量，继续做好PR监测，掌握PR感染动态，分区域、按场点，逐步推进PR防控与净化工作，最终达到净化该病的目的。