郑 斌 尹志奎 许兵红
(1.新乡医学院寄生虫学教研室,河南新乡 453003; 2. 新乡医学院药理学教研室,河南新乡 453003)
刚地弓形虫Toxoplasmagondii是一种世界性分布的寄生原虫,多种动物和人都可以作为它的宿主,猫既可以作为弓形虫的终末宿主,也可以作为其中间宿主。猫感染弓形虫后不仅影响自身的成长、发育及繁衍,还可以作为传染源,经粪便排出弓形虫卵囊,污染环境,威胁其他动物的健康。人与猫密切接触后,可能导致人的弓形虫感染或弓形虫病。下面就近十年来欧美的猫弓形虫感染情况及影响因素进行综述,以期对后续动物的安全饲养提供帮助。
弓形虫感染的检测方法有病原学、血清学和分子生物学等方法。病原学检查法包括涂片染色法、动物接种分离法或细胞培养法,查到弓形虫虫体即可确诊。该方法特异性较高,但操作复杂,费时、费力,且敏感性较低,易漏诊。
血清学检查是目前进行弓形虫感染调查、临床弓形虫病确诊的常用方法。包括染色试验(Sabin-Feldman dye test, SFDT)、直接凝集试验(Direct agglutination test, DAT)、乳胶凝集试验(Latex agglutination test, LAT)、改良凝集试验(Modified agglutination test, MAT)、间接血凝试验(Indirect haemagglutination test, IHA)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和间接荧光抗体试验(Indirect immunofluorescence antibody test, IFAT)等。SFDT特异性强、敏感性好,但试验需要活虫体,实际应用时不宜操作;DAT、LAT、MAT和IHA操作简便,敏感性和特异性较好,但IHA可以和血吸虫病患者血清产生交叉反应,且有时吸附抗原后的红细胞不稳定,重复性受到影响;ELISA灵敏度高,特异性强,与SFDT符合率高,但稳定性不好。IFAT有较好的敏感性、特异性和重复性,但与类风湿因子、抗核抗体阳性者可出现假阳性反应,试验结果需用荧光显微镜观察,结果判定需有经验的人员,有一定的主观性。
分子生物学方法包括聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)和核酸分子杂交技术等。PCR是一种敏感、高效的检测方法,但由于涉及引物、聚合酶、扩增条件和扩增环境等多个因素,反应结果存在一定的假阴性和假阳性。核酸分子杂交技术具有较高特异性和敏感性,但检测需要特殊设备,且操作复杂、所需时间较长,成本高。
总之,病原学检查操作复杂,但却是弓形虫检测的金标准。血清学检测在区分现症和既往感染方面有缺陷,但由于操作简单,仍然是进行弓形虫检测和流行病学调查的重要手段之一。分子生物学方法虽大大改善了弓形虫感染和弓形虫病的检测,但由于对实验条件要求较高且操作人员需经过严格的训练,因而其在实际应用时受到一定的限制。
爱尔兰的猫弓形虫抗体阳性率为33.7%(ELISA)(Juvetetal., 2010)。苏格兰的猫弓形虫抗体阳性率为19.2%(ELISA)(Bennettetal., 2011)。比利时Ghent 市的猫弓形虫血清阳性率为70.2%(DAT)(Dornyetal., 2002);2008年报道比利时的家猫弓形虫抗体阳性率为25%(IFAT),且随年龄增长而增高(de Craeyeetal., 2008)。荷兰的家猫弓形虫抗体阳性率为18.2%(ELISA),影响因素有狗的存在、流浪及吃未加工的食物等(Opsteeghetal., 2012)。
波兰西南部的猫弓形虫血清阳性率为52.5%(LAT),成猫(>5 y龄)阳性率高于幼猫(Smielewska-Loetal., 2002);波兰Olsztyn 地区的猫弓形虫血清阳性率为64.4%(DAT)(Michalskietal., 2010)。法国Lyon市流浪猫的弓形虫血清阳性率为18.6%(MAT),随年龄增加而增高(Afonsoetal., 2006);该国Kerguelen archipelago地区的野猫弓形虫血清阳性率为51.09%(MAT),不同采样点及食物、性别和年龄均影响猫的阳性率(Afonsoetal., 2007);法国乡村的猫弓形虫血清阳性率为52.7%(MAT),在多雨的年份,猫的发病率增高(Afonsoetal., 2010)。 Berger-Schoch等(2011)采用PCR检测瑞士的猫粪弓形虫卵囊阳性率为0.4%。
意大利Florence的猫弓形虫血清阳性率为44%(MAT),粪标本中弓形虫卵囊阳性率为16%(PCR)(Manciantietal., 2010);该国Lombardy地区的流浪猫弓形虫IgG阳性率为30.5%(IFAT)(Spadaetal., 2012)。匈牙利的猫弓形虫抗体阳性率为47.6%(IFAT),雌猫阳性率(53.3%)高于雄猫(39.3%),阳性率随年龄增长而增高(Hornoketal., 2008)。罗马尼亚的家猫弓形虫抗体阳性率为47%(ELISA),其中10月(m)龄和8 y龄的猫具有较高阳性率;成年、混合膳食、户外活动、乡村地区及罗马尼亚中部、东北部地区的猫弓形虫阳性率明显高于其他(Györkeetal., 2011)。葡萄牙北部的家猫弓形虫血清阳性率为72.4%(MAT),成猫的阳性率高于幼猫,户外猫的阳性率(45.4%)高于室内猫(7.7%)(Lopesetal., 2008);该国Lisbon 地区流浪猫的弓形虫血清阳性率2010年为24.2%(DAT)(Duarteetal., 2010),2012年为44.2%(DAT)(Waapetal., 2012)。西班牙Barcelona地区的猫弓形虫血清阳性率为45%(MAT),成猫(>1 y龄)的阳性率(49.7%)高于幼猫(<1 y龄,34.3%),野猫的阳性率(51.9%)高于家猫(34.8%)(Gaussetal., 2003);2004年西班牙的猫弓形虫抗体阳性率为32.3%(IFAT),成猫(>6 m龄)的阳性率(36.8%)高于幼猫(<6 m龄,13.9%),雄性流浪猫的阳性率(45.3%)高于雌性(32%)(Miróetal., 2004);该国的103个新鲜猫脑组织标本弓形虫DNA阳性率为45.5%(PCR)(Montoyaetal., 2008);该国Majorca地区的猫弓形虫血清阳性率为84.7%(MAT),成猫的阳性率(94.6%)高于幼猫(40%)(Millnetal., 2009)。
加拿大Prince Edward Island地区的猫弓形虫血清阳性率为29.8%(LAT)(Stojanovicetal., 2011)。美国Ohio州乡村的猫弓形虫血清阳性率为48%(MAT),户外活动的猫阳性率较高(62%)(Dubeyetal., 2002);该国诊所就诊的猫弓形虫抗体阳性率为31.6%(ELISA),阳性率随年龄增长而增高,雄猫的阳性率高于雌猫(Vollaireetal., 2005);该国Hawaii岛 Mauna Kea地区的野猫弓形虫抗体阳性率为37.3%(ELISA)(Danneretal., 2007);该国中西部8所动物园的本地猫弓形虫血清阳性率为29.4%(MAT)(de Campsetal., 2008);该国Pennsylvania州的家猫弓形虫血清阳性率为19.5%(MAT),随年龄增长而增高(Dubeyetal., 2009a);该国纽约的猫粪涂片检查弓形虫样卵囊阳性率为0.8%(Lucio-Forsteretal., 2011)。墨西哥Colima地区的家猫弓形虫抗体阳性率为28.8%(ELISA),南部及中部区域阳性率(33.8%)高于北部(6.6%)(García-Mrquezetal., 2007);该国Durango地区的家猫弓形虫血清阳性率为21%(MAT),成猫(>1 y龄)的阳性率(41%)高于幼猫(<0.5 y龄,13.2%)(Alvarado-Esquiveletal., 2007);2009年报道Durango地区猫的弓形虫血清阳性率为9.3%(MAT)(Dubeyetal., 2009d);该国墨西哥城的家猫弓形虫抗体阳性率为21.9%(ELISA),雌猫的阳性率高于雄猫,阳性率随年龄增长而增高,进食粗加工食物的猫阳性率较高(Besné-Méridaetal., 2008)。西印度群岛Grenada地区的家猫弓形虫血清阳性率为35%(MAT)(Asthanaetal., 2006);2009年报道该地区家猫的弓形虫血清阳性率为30.6%(MAT),野猫的阳性率为27.7%(MAT),阳性率随年龄增长而增高(Dubeyetal., 2009b);该群岛St. Kitts地区的家猫弓形虫血清阳性率为84.9%(MAT)(Mouraetal., 2007),野猫的血清阳性率为73.9%(MAT)(Dubeyetal., 2009c)。波多黎各Mona 岛的猫弓形虫血清阳性率为84.2%(MAT)(Dubeyetal., 2007)。
厄瓜多尔Isabela Island的猫弓形虫抗体阳性率为63%(ELISA)(Levyetal., 2008)。哥伦比亚的猫弓形虫血清阳性率为45.2%(MAT)(Dubeyetal., 2006)。巴西Guarulhos州 和 São Paulo州的家猫弓形虫血清阳性率皆为26.3%(MAT),流浪猫的阳性率分别为10%和26.7%(Silvaetal., 2002);该国Paran州Santa Isabel do Ivai地区的家猫弓形虫血清阳性率为84.4%(MAT)(Dubeyetal., 2004);Paran州Curitiba地区的猫弓形虫IgG阳性率为16.3%(IFAT)(Cruzetal., 2011);采用MAT和IFAT检测巴西Rondnia州的家猫弓形虫抗体阳性率皆为87.3%,高于同期检测的猪的阳性率(37.5%)(Cavalcanteetal., 2006);巴西São Paulo州的流浪猫弓形虫血清阳性率为40%(IHA)(Meirelesetal., 2004),家猫的血清阳性率为35.4%(MAT)(Penaetal., 2006);该州Araçatuba地区家猫的弓形虫抗体阳性率为25%(IFAT),随年龄增加而增高(Brescianietal., 2007);该州Andradina地区的猫弓形虫抗体阳性率为15.7%(IFAT),影响因素有上街活动、与老鼠共居、进食自制食物及未加工的奶制品等(Coelhoetal., 2011)。巴西Rio de Janeiro市的流浪猫弓形虫血清阳性率IHA检测结果为92.1%(2002年)、63.8%(2003年)和60.6%(2004年)(Mendes-de-Almeidaetal., 2007)。巴西Lages 地区的猫弓形虫抗体阳性率为14.33%(IFAT),0.5 y龄或以上、上街活动及乡村的猫具有较高的阳性率(Dallaetal., 2010)。
不同国家、不同地区的猫弓形虫感染情况各异。检测方法多采用MAT、IHA、LAT、IFAT和ELISA等血清学方法,少部分的调查研究采用了病原学和分子生物学方法;血清阳性率从6.6%(García-Mrquezetal., 2007)到94.6%(Millnetal., 2009)不等;影响弓形虫感染的因素从猫的年龄、性别、居住区域、活动特性、食物性质到周边环境及气候等不同。因此,各地区应结合本地实际情况,制定相应的措施,预防猫的弓形虫感染及传播。