火焰原子吸收光谱法测定那屈肝素钙中的钠

（北京赛升药业股份有限公司，北京 100176）

那屈肝素钙是以猪肠黏膜来源的肝素为原料，采用亚硝酸解聚后，精制而得的硫酸氨基葡聚糖的钙盐，是低分子肝素的一种。低分子肝素经几十年的发展，已成为抗凝市场中举足轻重的药物，具有生物利用度高、半衰期长、抗凝效果好和出血倾向小等特点，在临床上表现出极大的优势，已广泛用于血栓栓塞性疾病的防治[1-3]。而那屈肝素钙作为一种新型的抗血栓形成药物，相比低分子肝素有明显的活性，抗栓效果突出、出血风险低于肝素、对血小板几乎无影响，在临床上发挥着重要作用。

那屈肝素钙结构复杂，生产过程中引入及产生的杂质是影响药品安全的重要因素。那屈肝素钙在其制备工艺中需经过氯化钙的转盐后去除多余的钠盐，终产品会有痕量的钠残留。为了控制那屈肝素钙中钠的残留量，同时避免人体摄入钠过多及保证原料药中钠含量的批间一致性，开发那屈肝素钙原料药中钠含量的残留检测方法尤为重要。火焰原子吸收光谱法是测定痕量钠含量的最佳技术手段之一[4]，是一种操作快速简便、准确度高、分析周期短、重复性好的分析方法。本文通过大量的研究工作，以氯化铯为消电离剂，首次建立了测定那屈肝素钙中痕量钠离子残留的检测方法，该方法结果稳定，准确可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器

WFX 120型火焰原子吸收分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；钠空心阴极灯（国家有色金属及电子材料分析测试中心）；燃气为高纯乙炔；BP211D型电子天平（德国赛多利斯股份有限公司，感量：0.01 mg）。

1.2 试药

那屈肝素钙原料药（本公司自制，批号：20190717，20190719，20190722）；钠单元素溶液标准物质[中国计量科学研究院，批号GBW（E）080127 19052]；盐酸，氯化铯（分析纯，天津市光复精细化工研究所）。

2 方法与结果

2.1 光谱条件

光源：钠空心阴极灯；波长：589.0 nm；灯电流：3.0 mA；狭缝：0.2 nm；燃烧器高度：7 mm；乙炔流量：1.2 L/min；空气流量：7.0 L/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白溶液的制备 取氯化铯约0.635 g，精密称定，置于500 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸（量取盐酸4.2 ml，用水稀释至500 ml）溶解并稀释至刻度（每1 ml中含氯化铯1.27 mg）。

2.2.2 钠标准贮备液的制备 精密量取钠单元素溶液标准物质（1000 μg/ml）1 ml，置100 ml量瓶中，加氯化铯的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得10 μg/ml的钠单元素标准物质贮备液。

2.2.3 供试品溶液的制备 称取供试品溶液约30 mg，置于100 ml量瓶中，加氯化铯的盐酸溶液定容至刻度，摇匀。

2.3 检测条件的优化

2.3.1 狭缝宽度 火焰原子吸收光谱法测定钠含量的主要干扰因素有：光谱干扰、化学干扰、物理干扰和电离干扰，而光谱干扰主要是由光源和原子化器中的谱线重叠、光散射和分子吸收引起的，可通过调节狭缝宽度来改变或消除[5-7]。狭缝宽度直接影响分析谱线的光谱带宽，与信噪比相关。因此试验了狭缝宽度对0.6 μg/ml钠标准溶液的影响，结果见表1。由表1可知，当狭缝宽度由0.2 nm变为0.4 nm时，钠标准溶液的吸光度降低，故选择狭缝宽度为0.2 nm。

表1 狭缝宽度对钠吸收的影响

2.3.2 灯电流 取2.2.2项下钠标准贮备液，稀释至0.6 μg/ml，按2.1项下光谱条件，只改变灯的电流大小，测定钠标准溶液的吸光度。结果见图1。由图1可见，灯电流对钠吸光度有着显著影响，钠的吸光度随灯电流增大而降低，因此选择灯电流为3 mA。

图1 灯电流对钠（0.6 μg/ml）吸收的影响

2.3.3 消电离剂的选择 钠离子在空气-乙炔火焰中易电离，使得参与能级跃迁的基态原子减少，加入比其更容易电离的铯作电离抑制剂，可提供足够的电子使电离平衡向生成基态原子的方向移动[8-10]。本文选择氯化铯作为电离抑制剂，配制浓度为0.5，0.75，1.0，1.27，1.5 mg/ml的系列氯化铯盐酸溶液，分别用上述含有不同浓度氯化铯的盐酸溶液配制0.6 μg/ml的钠标准溶液进行测定，结果显示，盐酸溶液中含1.27 mg/ml氯化铯时，吸光度最高，因此选用含1.27 mg/ml氯化铯的盐酸溶液为电离抑制剂。

2.4 方法学验证

2.4.1 专属性 分别取去离子水、空白稀释剂（含氯化铯的盐酸溶液）、0.6 μg/ml钠标准溶液及那屈肝素钙供试品溶液，在589.0 nm处测定吸光度，比较三者的响应值，结果见表2。由表2可见，去离子水和空白溶剂不干扰样品溶液的测定，说明该方法的专属性良好。

表2 专属性实验结果

2.4.2 标准曲线的绘制 精密量取钠单元素标准物质贮备液（10 μg/ml）0.2，0.6，0.9，1.2、1.5 ml，分别置于5个10 ml量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀，制得0.2，0.6，0.9，1.2，1.5 μg/ml的系列钠标准溶液，依法测定。结果表明，钠离子在0.2～1.5 μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为：A=0.4533C+0.0304，r=0.9999。

2.4.3 方法的检出限及定量限 按照试验方法制备试剂空白溶液20份，测定，求其标准偏差（SD），以3倍的SD对应的浓度值作为该方法的检出限（LOD），以10倍的SD为定量限（LOQ）[11-12]。测得LOD和LOQ分别为0.006，0.020 μg/ml。

2.4.4 仪器精密度 取浓度为0.6 μg/ml的钠标准溶液，连续测定6次，计算精密度RSD为0.79 %。结果表明仪器精密度良好。

2.4.5 重复性 取本公司自制的那屈肝素钙原料药（批号：20190717），按2.2.3项下方法制备供试品溶液，平行配制6份，照原子吸收光谱法（标准曲线法），在589.0 nm波长处测定，测得那屈肝素钙中钠的平均含量为0.13 %，RSD为1.22 %（n=6），说明方法的重复性良好。

2.4.6 稳定性实验 按2.2.3项下方法制备供试品溶液，分别于第0，2，4，6，8，12 h，照原子吸收光谱法（标准曲线法），在589.0 nm波长处测定钠的吸光度，考察其稳定性。结果显示，在12 h内的钠吸光度变化的RSD为1.20 %（n=6），说明那屈肝素钙供试液在12 h内稳定。

2.4.7 回收率实验 采用标准加样法测定回收率。精密称取同一批号的那屈肝素钙供试品9份，每份约30 mg，置100 ml量瓶中，分成3组，每组分别加入10 μg/ml钠标准贮备液4.8，6.0，7.2 ml，再加入氯化铯盐酸溶液定容至刻度，摇匀，制备低、中、高浓度的供试品溶液，结果见表3。钠离子的平均回收率为100.72 %，RSD为1.24 %。

表3 那屈肝素钙中钠测定的回收率

2.4.8 样品测定 按2.4.2和2.2.3项下方法制备标准曲线和供试品溶液，并进行测定，结果见表4。

表4 3批样品测定结果

3 讨论

本文建立了火焰原子吸收光谱法测定那屈肝素钙中钠元素含量的方法。钠在乙炔火焰中易电离，因此本实验中以氯化铯作为电离抑制剂，提高了方法的准确度和灵敏度。该方法操作简便，分析时间短、干扰少，将在那屈肝素钙原料药质量控制中发挥重要的作用。