HCV相关肝细胞癌组织内HCV RNA及核心蛋白水平表达研究

张波 张余芬

HCV RNA日益受到临床重视。HCV相关肝细胞癌因其缺乏特异性表现，具有一定的误诊率[1-2]，失去最佳治疗时机，导致不良预后的发生。近年来HCV相关肝细胞癌逐渐引起临床重视，本研究探讨HCV在HCV相关肝细胞癌中的意义。

资料与方法

一、 临床资料

54例全部经肝穿刺活检证实为HCV相关肝细胞癌[3]。排除伴有酒精性肝炎、HBV感染、自身免疫性肝炎者。

二、检测方法

(一)荧光定量PCR ①标本组织DNA提取：取手术病理标本，制成1 cm×1 cm大小标本，参照Trizol法提取肝癌病灶组织与癌旁组织总DNA，试剂盒为德国Qiagen Gentra Puregene Tissue Kit-组织DNA提取试剂盒。②逆转录合成cDNA：将提取的DNA解冻，震荡混匀，离心后再进行逆转录与PCR扩增，记录HCV RNA阳性率[4]。

(二) 免疫组化法 以PBS洗片，修复抗原，封闭内源性过氧化物酶0.5 h，再次洗涤后滴入正常牛血清100 mL/L，封闭15 min后吸干，加抗HCV核心蛋白、生物素化羊抗鼠IgG、SABC复合物，均-4 ℃下冷冻过夜，复温后进行洗涤，以DAB显色10 min，再次洗涤后以苏木素脱水封固。记录检测结果[5]。

三、数据处理

记录54例患者HCV相关肝细胞癌患者荧光定量PCR与免疫组化测定结果，比较癌组织及癌旁组织HCV RNA含量、HCV RNA阳性率及HCV核心蛋白阳性率。分析荧光定量PCR与免疫组化结果的一致性，记录并比较HCV相关肝细胞癌患者癌组织HCV RNA和HCV核心蛋白表达情况。

结 果

一、HCV RNA相关结果比较

癌组织HCV RNA含量≥500拷贝数/mL者41例，阳性率75.93%，整体平均(640.78±185.64)拷贝数/mL，癌旁组织HCV RNA含量≥500拷贝数/mL者17例，阳性率31.48%，整体平均(512.78±124.52)拷贝数/mL，HCV RNA阳性率差异显著(χ2=21.451，P=0.000)。

二、HCV核心蛋白结果

HCV核心蛋白表达结果见表1。癌组织、癌旁组织免疫组化结果差异显著(P<0.05)。

表1 免疫组化检测结果[n(%)]

三、不同检查方法结果比较

两种检查结果见表2。PCR与免疫组化一致性良好(Kappa值=0.951，P=0.000)。

表2 荧光定量RCP与免疫组化结果比较

四、不同病理特点癌组织HCV RNA阳性率比较

HCV RNA阳性、阴性结果见表3-4。可见病理分期、分化程度表现出显著差异(P<0.05)。

表3 不同病理特点癌组织HCV RNA阳性率比较

表4 不同病理特点患者癌组织免疫组化结果

讨 论

既往临床多认为HCV相关肝细胞癌是肝细胞癌主要诱因，近年来有学者发现对于早期孤立性肝癌患者，亦可因HCV感染引起[6]。但对于HCV相关肝细胞癌与其他病灶不同，胆管无粘连[7]，而目前有关HCV相关肝细胞癌的具体机制尚未完全阐明。HCV感染被认为是肝细胞肝癌的高危因素，HCV感染后诱发和加重肝损伤，还可使肝组织细胞发生异型增生，成为癌变的诱因。Ng等[8]还认为HCV中NS3蛋白结构可通过调控基因和信号传导，使肝细胞正常增殖机制被打破，并获得免疫逃逸，使机体长期处于HCV感染状态，进而导致肝细胞变性坏死。HCC发生后逐渐侵袭门静脉血管，而HCV感染的持续存在使患者免疫力降低，癌细胞更易透过淋巴管累及胆管壁，穿过胆管上皮，侵袭胆管组织[9]，导致癌症进展。

另外，HCV核心蛋白可通过Ras/Raf通路、Jak/Stat信号传导，参与癌变[10]。HCV核心蛋白阳性引起肝细胞结构异常改变，进而对HCV相关肝细胞癌病理进程和肿瘤生物学行为能力产生影响[11]。本文显示HCV相关肝细胞癌组织HCV RNA含量与核心蛋白表达一致，也说明HCV参与HCV相关肝细胞癌病理过程，HCV感染可能是HCV相关肝细胞癌的诱发和促进因素，这将为HCV相关肝细胞癌早期防治提供依据。