高效液相色谱法测定米格来宁片的溶出度

解 钰1，李嵘立1，宋 军1，高宏娟

(1.山西省食品药品检验所，山西 太原 030031；2.大连理工大学，辽宁 大连 116024)

米格来宁片又名“安比咖片”，是由安替比林、咖啡因、枸橼酸等组成的复方制剂，为解热镇痛药。目前国内米格来宁片共34家企业获得批准文号，有1种规格：每片含安替比林270 mg，咖啡因27 mg，枸橼酸3 mg[1]。

对于固体制剂而言，溶出度测定能反映主药的晶型、粒度、处方组成、辅料品种和性质、生产工艺的差异等特征，既用于药品一般质量控制，也可用于评价各种制剂生物利用度的体外方法，已成为评价药物制剂质量的内在指标[2-7]。高效液相色谱法具有测定简便、快速、精确的特点，已被广泛使用。米格来宁片现行标准收载于《卫生部药品标准》1963年版，标准中未规定溶出度检查。本试验建立高效液相色谱法测定米格来宁片的溶出度，并绘制溶出曲线。

1 资料与方法

1.1 试剂与仪器

咖啡因对照品(批号171215-201512，含量99.9%)与安替比林对照品(批号100506-201602，含量100%)购自中国药品生物制品检定所；四氢呋喃、乙腈购自北京迪科马科技有限公司，水为实验室自制超纯水。高效液相色谱仪(型号：Agilent 1200)购自美国安捷伦公司；高效液相色谱仪(型号：Ultimate 3000)购自美国戴安公司；全自动溶出仪(型号：Agilent 708+850DS)购自美国安捷伦公司。

共收集米格来宁片103批次，涉及6家生产企业。

1.2 溶液的制备

1.2.1 对照品溶液 取安替比林和咖啡因对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释成含安替比林300 μg/mL、咖啡因30 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液 取待测样品，照溶出度与释放度测定法(《中国药典》2015年版四部通则0931第二法)，以0.1 mol/L盐酸溶液900 mL为溶出介质，转速为50 r/min，依法操作，经30 min时，取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.2.3 空白溶液 按处方量称取空白辅料淀粉、硬脂酸镁、枸橼酸、吐温80等，置100 mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.2.4 对照品储备液 取安替比林和咖啡因对照品适量，精密称定，加溶出介质溶解并稀释成含安替比林1.2 mg/mL、咖啡因0.12 mg/mL的溶液，作为对照品储备液。

1.3 方法学考察

1.3.1 色谱条件与系统适用性试验 采用Agilent-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；以醋酸钠缓冲液(称取0.82 g无水醋酸钠，加水溶解并稀释至1 000 mL，加15 mL四氢呋喃和2 mL三乙胺，用冰醋酸调节pH至6.0)-乙腈(85∶15)；流速为1.0 mL/min；检测波长为275 nm；进样量10 μL。按安替比林计塔板数不低于3 000，分离度应符合规定。

1.3.2 溶出方法的建立

1.3.2.1 溶出方法的选择 米格来宁片属于高溶解高渗透类药物(安替比林与咖啡因均属于高溶解高渗透类药物)(属BCS第Ⅰ类)，试验选用桨法。

1.3.2.2 转速的选择 取待测样品，分别以50 r/min、75 r/min进行转速试验，依法操作，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定，结果表明样品在75 r/min下溶出较快，且在8 min时已达峰值。通常认为50 r/min与中老年人胃肠道蠕动强度基本一致，而且溶出度试验应采用较为缓和的转速，使溶出方法具有更好的区分能力，因此转速选择50 r/min。

1.3.2.3 溶出介质的选择 取待测样品，以pH1.0盐酸溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水各900 mL作为溶出介质，依法操作，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定，结果表明四者之间无显著差异。结合人体胃部环境与溶出行为，选择pH1.0盐酸溶液(0.1 mol/L)作为溶出介质。

1.3.2.4 取样时间点的确定 分别于溶出开始后的第3，8，15，30，45，60 min时，各取样10 mL(同时补充同体积同温度溶出介质)，用0.45 μm微孔滤膜过滤，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定，计算累积释放率。当连续两点溶出率均达85%，且差值在5%以内，可作为采样截点，故选择取样时间点为30 min。

1.3.3 方法学考察

1.3.3.1 专属性试验 取“1.2.3”项下的空白溶液，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定。结果显示空白溶液在与安替比林与咖啡因相对保留时间处无色谱峰出现，不干扰主峰的测定，表明该方法专属性良好，见图1。

图1 专属性试验(吉林省银河制药有限公司，批号：171105)

1.3.3.2 线性关系考察 取“1.2.4”项下的对照品储备液1，3，3.5，5，6.5，7，10 mL，分别置25 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定。以浓度(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得安替比林回归方程Y=0.212 1X+0.237 6(r=0.999 9，n=7)，咖啡因回归方程Y=0.336 7X+0.028 9(r=0.999 9，n=7)。结果表明，安替比林在141.72～307.06 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系；咖啡因在16.72～31.04 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

1.3.3.3 准确度试验 按处方比例分别取相当于样品标示量60%、80%、100%的安替比林和咖啡因原料适量，精密称定，分别置500 mL容量瓶中，加入处方比例空白辅料，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定，见表1，表2。

表1 安替比林准确度试验

表2 咖啡因准确度试验

1.3.3.4 精密度试验 取“1.2.1”项下的对照品溶液，按照“1.3.1”项下的色谱条件测定，重复进样6次，安替比林的RSD为0.08%，咖啡因的RSD为0.17%，表明精密度良好。

2 结果

2.1 参比制剂的选择 在6家企业中选择综合质量较高的样品作为参比制剂。溶出曲线考察表明，A企业在四种介质中的溶出曲线相似程度最高，批间差异小，故选择该企业样品作为参比制剂。

2.2 样品测定 采用f2因子分析其余5家生产企业与参比制剂的差异，其中B、C、D的f2因子大于50.0，溶出行为与A企业相似。

3 讨论

本研究采用高效液相色谱法测定了米格来宁的溶出量，结果表明该方法灵敏简便，专属性强，结果准确，适用于测定该制剂中米格来宁的含量，为建立体外相关性提供了基础数据。