SARS-CoV-2抗体不同方法学检测结果的差异分析

潘 婧， 梁 芸， 梁翠娟， 赵东兰， 冯 苏， 万玲玲， 宋国威， 李立新

（石家庄市人民医院检验科，河北 石家庄 050000）

新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）感染引起的新发传染病。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》将血清SARS-CoV-2特异性IgM和IgG抗体阳性作为确诊依据之一[1]。目前，已有多种方法的商品化SARS-CoV-2抗体检测试剂。本研究拟采用胶体金法和化学发光法对发热患者血清SARS-CoV-2抗体进行检测，并对2种方法检测不一致的结果进行分析。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2020年2—3月石家庄市人民医院住院及隔离观察病区168例发热患者，其中4例确诊为COVID-19。本研究经石家庄市人民医院伦理审查委员会审核通过（伦理号：2020046），并批准予以豁免患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 采用无抗凝剂的真空采血管采集所有对象空腹静脉血5 mL，室温静置30 min，离心分离血清，备用。

1.2.2 化学发光法检测SARS-CoV-2抗体 采用MAGLUMI 4000 Plus全自动化学发光免疫分析仪（深圳新产业公司）及配套SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测试剂盒（化学发光法）进行检测，IgM抗体采用捕获法{以抗人IgM单克隆抗体包被磁性微球，N-（4-氨丁基）-N-乙基异鲁米诺[N-（4-Aminobutyl）-N-ethyl isoluminol，ABEI]标记 SARS-CoV-2重组抗原}，IgG抗体采用间接法（SARS-CoV-2重组抗原包被磁性微球，ABEI标记抗人IgG单克隆抗体），结果以相对光强度（relative light unit，RLU）表示，样本中SARS-CoV-2 IgM或IgG抗体的量与RLU呈正相关，根据RLU及内置校准曲线自动计算出抗体浓度（AU/mL），以≥1.10 AU/mL为阳性。

1.2.3 胶体金法检测SARS-CoV-2抗体 胶体金法采用免疫层析技术，以捕获法为原理。胶体金法1检测血清SARS-CoV-2总抗体，试剂盒购自广州万孚生物技术股份有限公司。胶体金法2分别检测血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体，试剂盒购自英诺特（唐山）生物技术有限公司。2种方法的结果均以T线和C线位置出现紫红色条带判为阳性。

2 结果

采用化学发光法和2种胶体金法检测164例发热患者的血清SARS-CoV-2抗体，结果均为阴性。4例COVID-19患者的检测结果3种方法之间存在差异，胶体金法1的检测结果均为阳性；胶体金法2 IgM抗体均为阴性，2例IgG抗体为阳性；化学发光法1例IgM抗体阳性，IgG抗体均为阳性。检测结果差异来源于患者A和患者B的原倍血清样本，见表1。

表1 3种方法检测结果不一致的2例COVID-19患者血清SARS-CoV-2抗体的分析

对4例COVID-19患者的原倍血清进行稀释。当稀释倍数为8倍、16倍时，胶体金法2检测患者A的结果为IgM（-）/ IgG（+），患者B的结果为IgM（+）/ IgG（+），均与胶体金法1和化学发光法的检测结果一致。见表2。

表2 胶体金法2检测不同稀释倍数血清SARS-CoV-2抗体的比较

3 讨论

SARS-CoV-2核酸检测是COVID-19的主要诊断方法，但其结果受样本质量、实验条件及人员操作等因素影响较大，不能满足筛查诊断要求[2]。为此，《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》[1]中引入了血清SARS-CoV-2抗体检测。本研究对不同方法学的SARS-CoV-2抗体检测试剂的测定结果进行了分析，结果显示，化学发光法和2种胶体金法检测168例发热患者血清SARS-CoV-2抗体的结果均为阴性，4例COVID-19患者中有2例检测结果存在差异。胶体金法1检测患者A和B的原倍血清SARSCoV-2总抗体，结果均为阳性；采用胶体金法2检测血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体，结果均为阴性。对患者血清进行稀释，当稀释倍数为8倍、16倍时，胶体金法2的检测结果与胶体金法1、化学发光法的检测结果一致。人体感染SARS-CoV-2后，一般会在5～7 d检出IgM抗体，10～15 d可检出IgG抗体，抗体滴度在急性期后期或恢复期早期（约第3周）达到峰值，随后IgM抗体滴度快速下降，而IgG抗体滴度迅速升高[3]。患者A和B在石家庄市人民医院采集样本时，患者A为发病后第25天，患者B为发病后第18天，分别处于恢复期早期和急性期后期，抗体滴度可能会超过试剂检测的阈值，出现由于抗体滴度过高、抗原抗体比例不合适而导致的假阴性现象，即钩状效应。当血清抗体浓度极高时，无法正常与胶体金标记的SARS-CoV-2抗原形成复合物，不能在包被的鼠抗人IgM/IgG抗体处被捕获，此时的抗原抗体反应会产生钩状效应，容易造成临床误诊。因此，针对不同病程、不同病情患者的临床样本进行适当稀释，使抗原抗体比例达到平衡或减少干扰物质含量，可避免假阴性或假阳性反应。此外，血清中类风湿因子及其他非特异IgM抗体的存在也会影响检测的灵敏度。

由于重组抗原的选择、制备等方面的差异可能会影响重组抗原的抗原性，因此即使是同一种方法，不同品牌的SARS-CoV-2抗体试剂的检测结果也会出现一定的差异。此外，不同方法学（双抗原夹心法、间接法、捕获法等）也会对试剂盒的敏感性、特异性产生影响[4]。有研究结果显示，采用化学发光法检测SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体具有较高的敏感性（70.24%、96.20%）和特异性（96.10%、92.41%）[5]。本研究采用化学发光法（捕获法原理和间接法原理）检测血清SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体，检测系统自动化程度较高，可自动稀释高浓度样本，在一定程度上能减少钩状效应的发生。

总之，SARS-CoV-2抗体检测试剂与其他血清学检测试剂一样，存在一定的假阳性或假阴性可能，会影响COVID-19的诊断和防控。虽然抗体检测可以有效弥补核酸检测漏检的风险，但在高度疑似病例中，若抗体检测结果为阴性，建议结合患者发病时间，进行不同稀释度样本的检测。除此之外，各临床实验室应在试剂启用前进行性能验证，避免假阴性或假阳性结果对临床诊断的误导。