王丹晖,杨又兵*,雷 莹,马彦博,王丁丁,娄 然
(1.河南科技大学动物科技学院,河南 洛阳 471023;2.河南省动物福利与健康养殖国际联合实验室,河南 洛阳 471023)
天然植物活性多糖具有广阔的应用前景[1]。甘草是一种常用中药材,甘草多糖具有免疫调节[2-3]、提高生长性能[4]、抗肿瘤[5]、抗病毒[6]、抗氧化[7]等功效,且无细胞毒作用[8],可作为饲料添加剂。黄文清[9]研究发现,饲喂甘草颗粒可提高乌骨鸡的平均日增重和平均日采食量。衣蕾等[10]研究发现,添加甘草多糖组的罗曼鸡平均体重显著高于空白对照组。
本试验研究甘草多糖对爱拔益加肉鸡生长性能、体尺以及IGF-1基因相对表达量的影响,旨在为甘草多糖在肉鸡养殖中的应用提供参考。
甘草多糖购自洛阳蓝斯利科技有限公司。
PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser反转录试剂包、RNAiso Plus、氯仿、无水乙醇、异丙醇、DEPC 水、TB Green Premix Ex Taq Ⅱ试剂包,均购自赛沃生物科技有限公司。
选用1 日龄的健康爱拔益加肉鸡240 只,购自洛阳市偃师市佃庄镇种鸡场,随机分为4 组,每组6 个重复,每个重复10只鸡。组1为对照组,肉鸡饲喂基础日粮;组2、组3和组4 分别在基础日粮中添加300、600 和900 mg/kg 的甘草多糖。试验期为42 d。
每日人工饲喂3次(9:00、15:00、20:00)。温度设定为32~35 ℃,第1 周 起 每2 d 下 降1 ℃;第3 周 起 温 度24~26 ℃,湿度控制60%~70%。
试验日粮为颗粒料,购自洛阳六和饲料有限责任公司。基础日粮组成及营养水平见表1。
表1 基础日粮组成及营养水平Tab.1 Composition and nutrient levels of the basal diet
根据NCBI 库中收录的IGF1 mRNA 序列设计基因特异性引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成引物,引物信息见表2。
表2 引物序列信息Tab.2 Primer sequence information
1.4.1 生长性能
分别称肉鸡的试验初重、试验末重,计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。
1.4.2 体尺指标
第6 周龄末每个重复随机抽取5 只鸡,分别测定鸡体斜长、龙骨长、胸宽、胫长。
1.4.3IGF-1基因相对表达量
采用TRIzol法提取爱拔益加肉鸡胸肌组织的RNA,使用反转录试剂盒将提取的RNA反转录为cDNA。
PCR 反应体系20 μL:cDNA 1 μL、TB Green Premix Ex TaqⅡ(2×) 10 μL、IGF1上下游引物(10 μmol/L)各0.7 μL、RNase-free ddH2O 7.6 μL。
PCR 扩增条件为95 ℃预变性30 s;95 ℃变性5 s,60 ℃退火30 s,循环40次;95 ℃延伸10 s,扩增结束后分析熔解曲线。
采用2-△△Ct 法计算IGF-1基因相对表达量,使用Prism 8.0软件制图。
试验数据采用Excel进行整理,采用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析。结果以“平均值±标准差”表示,P<0.05表示差异显著。
由表3 可知,与对照组相比,各试验组末重和ADG 均显著提高(P<0.05),各试验组的F/G 显著降低(P<0.05)。组4的ADFI显著低于对照组(P>0.05)。
表3 不同添加水平的甘草多糖对肉鸡生长性能的影响Tab.3 Effect of different levels of Glycyrrhiza polysaccharide on growth performance of broilers
表4 不同添加水平的甘草多糖对肉鸡体尺的影响Tab.4 Effectofdifferentlevels of Glycyrrhiza polysaccharideon body sizeof broilers
由表4可知,与对照组相比,组3、组4的胸宽显著升高(P<0.05);各试验组的体斜长均显著升高(P<0.05),随着添加量增加有上升趋势,但组间差异不显著(P>0.05)。
图1 不同添加水平的甘草多糖对肉鸡IGF-1基因相对表达量的影响Fig.1 Effect of different levels of Glycyrrhiza polysaccharide on IGF-1 gene relative expression of broilers
由图1 可知,组3、组4 肉鸡IGF-1基因的相对表达量均极显著高于对照组(P<0.01)。
植物多糖可提高动物的生长性能,改善健康状况[1]。本试验中,与对照组相比,各试验组肉鸡ADG均显著提高(P<0.05),组3 肉鸡的F/G 显著降低(P<0.05)。研究表明,枸杞多糖和大蒜多糖可显著提高肉鸡的平均日增重(P<0.05),日采食量显著降低(P<0.05)[11-12]。日粮中添加不同浓度的甘草多糖显著提高22~42日龄时肉鸡的平均日增重[13]。饲喂甘草多糖可降低平均日采食量,提高小鼠的平均日增重[14]。衣蕾等[10]研究发现,肌肉注射4 g/L甘草多糖能够有效提高蛋鸡的生长性能。董永军等[15]研究发现,饲喂不同浓度的甘草多糖可提高肉仔鸡体重。
体尺性状是衡量动物机体是否健康的指标[16]。本试验中,饲喂添加甘草多糖的试验组肉鸡与对照组的胫长、胸骨长均无显著差异(P>0.05),但随着添加甘草多糖浓度增加,肉鸡的胫长、胸骨长均有提高。与对照组相比,各试验组胸宽均有增加,其中甘草多糖添加量为600、900 mg/kg的试验组均显著升高(P<0.05);各试验组的体斜长均显著高于对照组(P<0.05),且随着添加量增加有上升趋势,但组间差异不显著(P>0.05)。曹向阳[17]研究发现,在日粮中添加松针粉可显著提高固始公鸡的胫围(P<0.05)。代航等[18]研究发现,在日粮中添加稻壳粉对雏火鸡的各项体尺指标均无显著差异(P>0.05),表明不同动物对不同日粮添加剂的耐受力不同。
IGF-1 是一种生物活性肽物质[19],能够影响动物机体生长发育以及营养物质的代谢活性[20]。动物IGF-1的合成与日粮的营养水平密切相关[21]。万秋蓓等[22]研究表明,动物的生长发育水平与IGF-l相关度极高。吕建敏等[23]研究表明,IGF-1基因的相对表达量与日粮粗蛋白水平密切相关。本试验中,各水平甘草多糖添加组肉鸡IGF-1基因的相对表达量均有所提高,组3 和组4 肉鸡IGF-1基因的相对表达量均极显著高于对照组(P<0.01)。由此可见,日粮中添加甘草多糖对可提高肉鸡生长相关基因IGF-1的相对表达量。
本试验结果表明,日粮中添加甘草多糖可以改善肉鸡生长性能、体尺以及IGF-1基因的相对表达量。