梅公散的抗炎作用及其对小鼠血液和组织中PGE2含量的影响

宋 晨，樊宏亮，2，王 琪，徐文琦，麻海澜，吕向聪，王晓凯，赵红霞*

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古 呼和浩特 010010；2.内蒙古伊利实业集团股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010010）

梅公散以乌梅、蒲公英、金银花、连翘为主，并配以其他辅药、矫正药组合而成，具有较强的体外抗菌作用。为进一步系统研究该中药复方的抗炎作用及其抗炎作用机制，本试验展开针对梅公散对小鼠血液和组织中PGE2含量影响的研究，旨在为梅公散复方的临床药效评价奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物

纯昆明种小鼠96 只，体重（20±2）g，雌、雄兼用，购自内蒙古大学实验动物中心。

1.2 试验材料

本实验室加工的梅公散，由乌梅、蒲公英、金银花、连翘等中药煎制而成；地塞米松磷酸钠注射液（批号为08051211）购自天津药业焦作有限公司。

1.3 试剂与仪器

小鼠SE-selectin测定试剂盒，购自江苏酶标生物科技有限公司；二甲苯、甲醛，均购自天津市风船化学试剂科技有限公司；蛋清。

Acculab ACL电子天平，购自德国赛多科斯股份公司；低速离心机，购自安徽中科中佳科学仪器有限公司；三用恒温水箱，购自金坛市杰瑞尔电器有限公司；高压灭菌锅，购自日本HIRAYAMA公司；紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限责任公司；风热高温烘干箱，购自上海福玛实验设备有限公司；多功能酶标仪，购自美国伯腾仪器有限公司。

1.4 试验设计

采用二甲苯致炎法[1-5]，将96 只小鼠随机分为4 组，每组2 个重复，每个重复12 只；每组中选择一个重复的小鼠应用于测定耳廓、足跖肿胀，另一重复小鼠做其他试验用。连续灌喂4 d，1次/d。分组及给药方案见表1。

表1 试验分组及给药方案Tab.1 Experimental groups and administration scheme

1.5 测定指标及方法

1.5.1 耳廓肿胀

第4 d给药30 min后，将致炎剂二甲苯按0.02 mL/10 g两面涂布于每只小鼠左耳前后，右耳作为对照。30 min后脱颈椎处死小鼠，沿耳廓线剪下两耳，使用内径为7 mm的打孔器以对称位置取小鼠左右耳片称重，以每只小鼠的左耳片重减去右耳片重，即为左耳肿胀重量。

1.5.2 足跖肿胀

采用小鼠足跖肿胀法[1-3]。第4 d 给药30 min 后，于每只小鼠左后足跖部皮下注射10%的蛋清0.01 mL，右后足跖部皮下注射2.5%甲醛溶液0.01 mL。分别于致炎前及致炎后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h 测量左右足厚度并记录，4 h后脱颈椎处死小鼠，踝关节处剪取炎症后足称重。计算左右足跖肿胀率。

1.5.3 血清中PGE2含量

第4 d给药30 min后，将致炎剂二甲苯按0.02 mL/10 g的给药剂量涂布于每只小鼠左耳前后，右耳作为对照，30 min 后分别从小鼠左右眼眶取血，并脱颈椎处死小鼠。小鼠血液3 000 r/min 离心15 min，取上清液，参照文献[3]和文献[6]竞争性ELISA方法测定样品中PGE2含量。

1.5.4 肿胀足中PGE2含量

第4 d 给药30 min 后，每只小鼠后肢右足跖皮下注射1%甲醛0.01 mL致炎，左趾注射10%的蛋清0.01 mL。3 h后脱颈椎处死小鼠，剪下致炎后肢，称重剪碎后置于6 mL生理盐水中浸泡1 h，超声提取0.5 h，浸泡液3 000 r/min离心15 min，取上清液0.3 mL 于试管内，加入0.5 mol/L 的KOH-甲醇溶液2 mL，50 ℃水浴中异构化20 min，加甲醇稀释至10 mL，参照文献[3]和文献[6]竞争性ELISA方法测定小鼠肿胀足中PGE2的含量。

1.6 数据统计与分析

数据采用SPSS 19.0 软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），采用LSD 法进行多重比较.结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05 表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 梅公散对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（见表2）

表2 梅公散对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响Tab.2 Effect of Meigong powder on xylene-induced auricle swelling in mice单位：mg

由表2 可知，与阴性对照组相比，高剂量组及阳性对照组均极显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（P＜0.01），低剂量组显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（P＜0.05）。

2.2 梅公散对蛋清和甲醛所致小鼠足趾肿胀率的影响（见表3、表4）

由表3可知，与阴性对照组相比，致炎2 h后，给予高剂量的梅公散可显著抑制蛋清所致小鼠足趾肿胀（P＜0.05）；而在致炎4 h后，给予高、低剂量的梅公散均可极显著抑制蛋清所致小鼠足趾肿胀（P＜0.01）。

表3 梅公散对蛋清所致小鼠足趾肿胀率的影响Tab.3 Effect of Meigong powder on toe swelling rate induced by egg white in mice 单位：%

由表4可知，与阴性对照组相比，致炎2 h后，给予低剂量的梅公散可极显著抑制甲醛所致小鼠足趾肿胀（P＜0.01），给予高剂量的梅公散可显著抑制甲醛所致小鼠足趾肿胀（P＜0.05）；致炎4 h后，低剂量梅公散可极显著抑制甲醇所致小鼠足趾肿胀（P＜0.01），高剂量梅公散可显著抑制甲醇所致小鼠足趾肿胀（P＜0.05）。

表4 梅公散对甲醛所致小鼠足趾肿胀率的影响Tab.4 Effect of Meigong powder on toe swelling rate induced by formaldehyde in mice 单位：%

2.3 梅公散对二甲苯致炎模型小鼠血清中PGE2含量的影响（见表5）

由表5可知，与阴性对照组相比较，高剂量的梅公散可显著降低小鼠血清中PGE2含量（P＜0.05），而低剂量的梅公散则对血清中PGE2含量则无显著作用（P＞0.05）。

表5 梅公散对二甲苯致炎模型小鼠血清中PGE2含量的影响Tab.5 Effect of Meigong powder on the content of PGE2 in serum of mice with xylene-induced inflammation 单位：μg/mL

2.4 梅公散对甲醛和蛋清所致小鼠肿胀足中PGE2含量的影响（见表6、表7）

由表6、表7 可知，与阴性对照组相比较，高剂量的梅公散可显著降低甲醛和蛋清所致小鼠肿胀足中PGE2的含量（P＜0.05），而低剂量的梅公散则无显著作用（P＞0.05）。

表6 梅公散对甲醛所致小鼠肿胀足中PGE2含量的影响Tab.6 Effect of Meigong powder on PGE2 content in mice swollen feet induced by formaldehyde 单位：μg/mL

表7 梅公散对蛋清所致小鼠肿胀足中PGE2含量的影响Tab.7 Effect of Meigong powder on PGE2 content in mice swollen feet induced by egg white 单位：μg/mL

3 讨论

炎症反应严重损害动物机体，甚至导致其死亡[7]。PGE2是一种炎症介质，当动物机体受到某些致炎因素影响时，PGE2大量释放，使血管扩张、通透性升高，引起组织肿胀，产生炎症反应，因此，抑制PGE2合成可减轻炎症反应[8-10]。研究发现，PGE2在急性炎症后期时起极为重要的作用，且作用时间较持久[11]。临床上常应用抗炎药物治疗动物机体的炎症反应，抗炎药物以西药为主，分为甾体类和非甾体类，虽然抗炎效果非常显著，但长期使用化学药物可能会导致中枢神经系统、心血管系统及肝脏、肾脏的损伤，产生毒性反应。有研究表明，许多中药及其有效成分特具有较强的抗炎作用，以副作用小、作用靶点多、作用通路多、高效低毒等优点广泛应用于临床治疗[12-14]。

本研究结果发现，在小鼠耳廓肿胀炎症模型中，高、低剂量的梅公散均可抑制小鼠耳廓肿胀度，且高剂量梅公散对小鼠耳廓肿胀度的抑制效果与地塞米松组相当。张浩等[5]研究发现，荆门上清丸高、中剂量组可抑制二甲苯致的小鼠耳廓肿胀。陈美安等[4]研究发现，兰香草各提取部位高剂量组及乙酸乙酯部位中、高剂量组均可显著抑制小鼠耳廓肿胀。本研究虽与上述研究的药物不同，但高剂量组可抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，说明梅公散、荆门上清丸、兰香草对急性炎症均存在一定抑制作用，且具有剂量依赖性。蛋清和甲醛所致小鼠足趾肿胀试验中，其足趾肿胀度随时间延长均产生一定变化，并在致炎1 h 后达到峰值；随着时间延长，肿胀度逐渐降低，致炎4 h 后高剂量梅公散可显著抑制小鼠足趾肿胀，且均高于阳性对照组，表明梅公散具有较好的抗炎作用。本试验中，高剂量梅公散可显著降低二甲苯、蛋清、甲醛所致小鼠炎症模型中PGE2含量，低剂量梅公散无明显效果，表明梅公散具有一定的抗炎作用，且存在剂量依赖性。

4 结论

高剂量梅公散可较好地抑制急性炎症，其作用机制可能与抑制炎症介质PGE2的合成有关。该组方结构复杂，抗炎机制是否与其他炎症因子有关仍待进一步探讨。