烧伤患者中性粒细胞趋化因子变化分析

何永胜

（河南长垣市人民医院，烧伤科，河南 长垣 453400）

感染是烧伤患者常见的一种并发症，其发病率及死亡率均很高，是导致烧伤患者休克或死亡的一个主要原因 [1]。中性粒细作为机体防御反应的第一道防线，在机体感染时有重要的免疫应答功能，而趋化因子则能诱导中性粒细胞迁移至感染灶。本研究选取烧伤患者和健康者为研究对象，来探讨烧伤患者外周血中性粒细胞趋化因子的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取56例2018年2月至2020年5月来我院救治的烧伤患者为研究组，其中30例患者为男性，26例患者为女性；平均年龄35.67±6.12岁。入选标准：⑴均为烧伤患者；⑵均是成年患者；⑶患者的意识均清晰，可以进行语言的交流；⑷患者均有签署知情同意书。同时选取同时期所招募的健康志愿者60例为对照组，男性33例，女性27例，平均年龄35.81±6.01岁。排除标准：⑴肝肾功能不全的患者；⑵合并心、肝、肾等重要器官并发症的患者；⑶凝血功能障碍的患者；⑷有免疫功能疾病的患者；⑸合并意识障碍的患者。本研究通过了我院医学伦理委员会的审核。

1.2 方法与观察指标

试验做3次，取平均值。

1.2.1 中性粒细胞的趋化距离

①将0.55g琼脂糖加入由美国Gibco公司提供的含1.6mL热灭活胎牛血清的18.4mL RPMI 1640培养基中，然后与由美国Gibco公司提供的2.3mL含镁、钙离子的Hank平衡盐溶液轻微振荡混匀。② 将上述配置溶液放入70℃的热水浴中静置20s后加入无包被直径35mm的培养皿中，室温冷却凝固后使用空心管打3个孔（3.5mm孔径），孔间距均为2.4mm。负压吸取孔内的琼脂糖后室温静置后备用。③取两组患者外周血的中性粒细胞（两组患者均在入院后1d、3d、5d取外周静脉血，然后用流式细胞仪来检测中性粒细胞的纯度＞95%[6]，用于后续的实验），调整细胞浓度至1×107个•mL-1。在两边的孔中均加入10μL的调整好的中性粒细胞，在中间孔加入10μL的物质量的趋化物IL-8（浓度10μmol/L）。然后将培养皿放入37℃培养箱（二氧化碳的体积分数为5%）中进行2h的培养，然后将培养皿放于40倍倒置的显微镜下进行观察中性粒细胞趋化到中间趋化物的距离。

1.2.2 CXCR1与CXCR2受体阳性率

入院3d时取上述两组患者外周血的中性粒细胞，调整细胞浓度到1×106个•mL-1 ，然后在4℃下离心10min（400×g），接着用预冷的PBS重新悬浮细胞，3次后弃上清液用100μL结合缓冲液重新悬浮细胞。然后向悬浮细胞加入依次加入藻红蛋白标记及别藻蓝蛋白标记的鼠抗人CXCR1及CXCR2流失抗体（由美国BD公司提供）进行孵育30min，然后离心弃去上清液，用500μL的结合缓冲液重新悬浮细胞，然后用流式细胞仪来检测CXCR1与CXCR2的阳性率。

1.2.3 炎性细胞因子的水平

采取两组研究对象的静脉血，静置30min后离心（400×g ）10min取血清按ELISA检测试剂盒来检检测两组患者血清中IL-6、IL-10水平。

1.4 统计学方法

本研究使用SPSS 24.0处理数据。采用均数±标准差（±SD）来描述计量资料，组间比较为t检验，计数资料以率表示，采用卡方检验。

2 结果

2.1 两组患者中性粒细胞的趋化距离

研究组患者入院1d、3d、5d时中性粒细胞的趋化距离均明显短于对照组（p＜0.05），详见表1。

表1 两组患者中性粒细胞的趋化距离对比（X± SD）

2.2 两组患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较

研究组患者入院3d时中性粒细胞趋化因子受体CXCR1与CXCR2受体阳性率均明显低于对照组（p＜0.05），详见表2。

表2 两组患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较（±SD）

表2 两组患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较（±SD）

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2.3 研究组患者不同烧伤程度患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较

依据1970年全国烧伤会议讨论所通过的烧伤程度分为轻度烧伤组、中度烧伤组和重度烧伤组。重度烧伤组患者的入院3d时中性粒细胞趋化因子受体CXCR1与CXCR2受体阳性率明显低于轻度烧伤组与中度烧伤组，中度烧伤组入院3d时中性粒细胞趋化因子受体CXCR1与CXCR2受体阳性率明显低于轻度烧伤组，详见表3。

2.4 炎性细胞因子水平的比较

研究组患者IL-6、IL-10及TNF-α的水平想高于对照组，性能见表4。

表 3研究组患者不同烧伤程度患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较（±SD）

表 3研究组患者不同烧伤程度患者中性粒细胞趋化因子受体阳性表达的比较（±SD）

注：与轻度烧伤组比较，#P＜0.05；与中度烧伤组比较，*P＜0.05。

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表4 两组研究 对象炎性细胞因子的比较（±SD）

表4 两组研究 对象炎性细胞因子的比较（±SD）

注：与对照组相比，*P＜0.05。

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3 讨论

严重烧伤患者不仅要遭受身体的痛苦，而且还会遭受精神上的痛苦，这是由于患者的身体在严重烧伤后对温度的敏感性及耐受度都有所降低，其患处会有增生、瘙痒等症状，降低患者的免疫力，进而会引发各种并发症。

感染是烧伤患者最常见的严重并发症之一，是造成患者死亡的主要因素之一[2]。控制感染是临床工作治疗烧伤患者的一个极其重要难题，有效地控制烧伤患者的感染是降低烧伤患者病死率的关键[3]。

本研究结果显示烧伤患者外周血中CXCR1的阳性表达率及CXCR2的阳性表达率均明显降低，这一结果提示在烧伤患者感染期间，外周血中性粒细胞的趋化功能受到损害，因此感染部位发挥抗感染、吞噬病原微生物的功能有一定障碍，其原因可能是与趋化因子受体（CXCY1及CXCR2）的阳性表达减少相关。本研究结果还显示重度烧伤患者的外周血中CXCR1的阳性表达率及CXCR2的阳性表达率明显低于中度及轻度烧伤组患者；中度烧伤组患者外周血中CXCR1的阳性表达率及CXCR2的阳性表达率明显低于低度烧伤组患者[4-5]。这是对上述结果的进一步证实。此外本研究显示研究组患者的炎性细胞因子水平明显高于对照组，这说明烧伤患者的炎性反应明显高于健康人群。

综上所述，烧伤患者早期外周血中性粒细胞的趋化功能存在着障碍，可能与中性粒细胞趋化因子（CXCY1及CXCR2）的阳性表达率减少相关。