血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD检测在肺癌诊断中的应用及其与临床病理分期的关系

谢春霞，田可港，徐淑华，张 磊，牟晓峰

青岛市中心医院检验科，山东青岛 266042

肺癌是目前世界上常见的恶性肿瘤之一，起病较隐匿、恶性程度高、病情进展快。早期发现和诊断对肺癌治疗和预后具有重要意义[1-2]，可提高肺癌患者的生活质量，延长其生存期限[3]。肿瘤标志物目前在肿瘤的早期预测与预后监测等方面发挥着越来越突出的作用，因其检测过程对患者创伤较小，已广泛用于临床[4]。寻找新的灵敏度和特异度更高的肺癌诊断标志物，对提高肺癌的临床诊断和治疗水平有重要意义。本研究选取了广泛型线粒体肌酸激酶(uMtCK)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)、胃泌素释放肽前体(Pro-GRP)及乳酸脱氢酶(LD)这几项标志物进行检测，旨在探讨上述指标在肺癌诊断、病理分型及分期判断中的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2018年3月至2019年2月在本院住院治疗且有明确病理诊断的肺癌患者78例纳入研究作为肺癌组；排除合并其他类型肿瘤的患者，排除合并严重心脑血管疾病的患者；其中男47例、女31例，年龄38～70岁。另外，选取同期于本院治疗的良性肺部结节患者20例作为肺部良性结节组，其中男12例、女8例，年龄32～68岁。两组间性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。纳入研究者均对本研究知情同意，并签署知情同意书。

1.2仪器与试剂 罗氏公司Cobas e602型电化学发光分析仪及配套NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP检测试剂盒；日立公司7600型生化分析仪及利德曼公司生产的配套LD检测试剂盒；SEBIA全自动电泳分析仪及配套的肌酸激酶(CK)同工酶电泳试剂盒。

1.3方法 于清晨抽取各组患者空腹静脉血3～5 mL置入分离胶采血管，以3 500 r/min离心5 min，收集血清，使用电化学发光免疫分析法检测NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP水平；使用酶法检测LD水平；采用琼脂糖凝胶电泳法进行CK同工酶电泳分析。正常参考值如下，NSE：0.0～16.3 ng/mL，CYFRA21-1：0.0～3.3 ng/mL，Pro-GRP：0.0～68.3 pg/mL，LD：91～240 U/L，CK同工酶电泳：健康者及非肿瘤患者均无uMtCK的检出。结果大于临界值视为阳性，小于或等于临界值则视为正常。

1.4统计学处理 本次研究的数据均采用统计学软件SPSS18.0进行处理，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组患者5项检测指标阳性率的比较 肺癌组uMtCK、NSE及LD阳性率明显高于肺部良性结节组(P<0.05)；肺癌组CYFRA21-1及Pro-GRP阳性率与肺部良性结节组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组患者5项检测指标的阳性率比较(%)

2.2不同组织类型肺癌患者5项检测指标的阳性率比较 小细胞肺癌组NSE和Pro-GRP阳性率明显高于非小细胞肺癌组(P<0.05)，而uMtCK、CYFRA21-1及LD阳性率在两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 不同组织类型肺癌患者5项检测指标的阳性率比较(%)

2.3不同TNM分期肺癌患者5项检测指标阳性率的比较 Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者uMtCK、NSE、CYFRA21-1、及LD阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，而两组间Pro-GRP阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 5项检测指标在肺癌不同病理分期中的阳性率比较(%)

2.4肺癌组中uMtCK与NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD的相关性分析 血清uMtCK与NSE、CYFRA21-1及LD呈正相关(r=0.424、0.488、0.721，P<0.05)，而uMtCK与Pro-GRP无相关性(r=0.117,P>0.05)。

2.5肺癌患者5项检测指标与临床病理特征的相关性分析 5项检测指标与年龄(分为<55岁和≥55岁，前者秩序更高)无明显相关性(P>0.05)。NSE及Pro-GRP与肺癌病理类型(分为小细胞肺癌、鳞癌、腺癌)相关(r=0.570、0.653，P<0.05)。uMtCK、CYFRA21-1及LD与肺癌病理类型无明显相关性(P>0.05)。uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP、LD均与TNM分期(分为Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期)相关(r=0.419、0.552、0.522、0.356、0.549，P<0.05)。

3 讨 论

CK是由M、B两种不同亚基组成的二聚体，在实际检验过程中，时常出现CK-MB同工酶活性高于CK活性的现象，当CK-MB同工酶活性高于CK活性的30%或50%以上时，除考虑CK-BB同工酶的存在外还要考虑uMtCK的干扰。uMtCK是一种低聚的线粒体CK[5]，存在于细胞线粒体膜上，当线粒体崩解时，线粒体膜的小碎片进入血液，作为巨分子酶的一种，它常常伴随各种肿瘤出现，目前已有uMtCK在乳腺癌、前列腺癌患者血清中过表达的报道[6]。NSE属于糖酵解酶类，存在于恶性肿瘤中。CYFRA21-1属于细胞角蛋白19的一部分，当细胞凋亡时，该片段会释放进入血液循环，特别是在肿瘤细胞中，由于细胞降解水平的提升，会使大量的角蛋白可溶片段进人血液循环，从而造成CYFRA21-1水平升高。Pro-GRP是从胃组织中分离出的一种肽类物质，其在血液中水平稳定，近年来成为一种简单易测的肿瘤标志物[7]。越来越多证据表明，ProGRP表达异常与恶性肿瘤的发生、发展有密切的关系[8-9]。LD是一种糖酵解酶，在恶性肿瘤患者体内，LD水平有升高表现。

本研究表明，肺癌患者中uMtCK、NSE及LD阳性率均高于肺部良性结节组，表明血清uMtCK、NSE及LD的检测对临床筛查和鉴别诊断肺部良恶性疾病具有一定的参考价值，肿瘤患者出现uMtCK的原因可能是肿瘤组织细胞和线粒体膜受到严重破坏，或者细胞快速增殖分解，导致线粒体CK由肿瘤组织漏出，从而使血中uMtCK水平升高，肺癌组中CYFRA21-1及Pro-GRP阳性率与肺部良性结节组比较，差异均无统计学意义，原因可能是本研究的病例数偏少，尤其是肺部良性结节组的病例数较少，影响了统计结果的准确性。

相关研究显示，NSE水平在小细胞肺癌中显著升高，阳性率在90%以上，是小细胞肺癌最为敏感、特异的肿瘤标志物[10-12]。本研究显示，NSE和Pro-GRP在小细胞肺癌中的阳性率高达100.00%，说明这2项指标可能有助于区分小细胞肺癌与非小细胞肺癌[13]。CYFRA21-1在肺鳞癌中呈高表达[14]，本研究中CYFRA21-1阳性率在小细胞肺癌组与非小细胞肺癌组间比较差异无统计学意义，可能与非小细胞肺癌组中鳞癌患者比例较少有关；uMtCK和LD阳性率在两组间比较差异均无统计学意义，原因可能为uMtCK作为新型的肿瘤标志物在良恶性肿瘤鉴别中与LD都有一定的价值，但对于不同病理类型的肿瘤诊断尚缺乏特异性，另一方面，本研究晚期肺癌患者相对较多，肿瘤标志物在不同病理类型中的表达水平均较高，因此差异较小。

血清检测指标对肺癌临床分期有一定价值，研究发现，NSE与肺癌脑转移及预后有关[15]；血清CYFRA21-1水平升高与肿瘤大小、疾病分期有关，本研究结果显示Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1及LD阳性率均高于Ⅰ～Ⅱ期，表明其与肿瘤浸润、转移等病情进展情况有关，与之前的报道结论一致，血清uMtCK与NSE、CYFRA21-1及LD均呈正相关，分析原因可能是uMtCK水平越高，肿瘤细胞能量代谢越活跃，其增殖裂解的速度也就越快，从而使更多的NSE、CYFRA21-1及LD进入血液中。另外肺癌患者NSE与Pro-GRP的检测结果与肺癌病例类型相关。本研究还显示，5项检测指标水平随着肺癌患者TNM分期的升高而异常升高，提示这5项检测指标水平与肺癌的病情严重程度和是否发生转移具有一定的相关性，临床可以通过检测这些血清肿瘤标志物水平从而有助于了解肿瘤的大小、转移情况等。由于本研究纳入的临床病例有限，对uMtCK在肺癌患者预后判断及分子病理机制中的作用未能涉及，这也将是本课题组下一步研究的重点。

综上所述，这5项肿瘤标志物在肺癌筛查中的作用各有侧重，联合检测可辅助肺癌病理类型及TNM分期的判断，为临床诊断和治疗提供依据。