血清淀粉样蛋白A、高迁移率族蛋白1、CD64指数在白内障患者术后眼内炎诊断中的应用

林惠军 龚潇 杨倩

白内障是一种致盲性眼病，随着病情的不断发展，患者最终将丧失视力。行白内障手术，植入人工晶状体，是改善患者视力预后的主要手段[1]。但手术存在一定的风险，术后并发眼内炎是白内障术后最为严重的并发症。准确预测并诊断眼内炎，在及时采取治疗措施、改善患者预后中具有重要意义[2]。病原菌感染是眼内炎的直接致病原因，但临床中，眼内炎患者病原菌检测阳性率低，且病菌培养时间长，其在诊断眼内炎中的价值有限[3]。有研究发现，眼内炎患者经规范用药后，病菌培养提示眼内无细菌生长的情况下，患者结膜充血、流泪、视力下降等眼内炎症依旧存在，提示除了病菌感染外，还存在其他致病机制。有研究表明，炎症反应在眼内炎发病中发挥重要作用，并有学者证实，各类炎症因子在诊断眼内炎中具有一定价值[4]。传统炎症因子如白细胞介素1-β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-17(IL-17)是反映炎症反应强度的常见指标，而血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)、高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)及CD64指数均是新型炎症指标[5-7]。目前，国内关于血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断眼内炎中相关研究匮乏，基于此，我们进行了本研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料将我院2015年1月至2019年11月白内障术后并发眼内炎患者纳为感染组(48例48眼)。同时将同期白内障术后无感染者纳为对照组(50例50眼)，对照组患者无病毒、细菌等因素引起的感染，无自身免疫性疾病。感染组患者年龄63～79(71.15±12.37)岁，男28例，女20例，病程 4～12(6.45±1.32)a，其中行晶状体超声乳化术者17例，白内障囊外摘出或晶状体摘出术者31例。对照组患者年龄62～80(72.03±11.37)岁，男23例，女27例，病程3～15(6.62±1.27)a，其中行晶状体超声乳化术者20例，白内障囊外摘出或晶状体摘出术者30例。两组患者年龄、性别比例、病程及手术方式等资料差异均无统计学意义(均为P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，参与者均知情同意。感染组纳入标准：患者均行白内障手术治疗；术后视力出现不同程度的急剧下降；临床有眼球疼痛、分泌物增多、眼睑肿胀、结膜混合充血、角膜水肿、前房渗出或积脓、玻璃体混浊等表现；眼部B超检查提示玻璃体混浊或炎症；房水或玻璃体液细菌学检查阳性；结合患者临床症状、体征及病原学检查结果确诊，其中急性化脓性眼内炎30例，迟发性眼内炎18例。感染组排除标准：排除前房积脓葡萄膜炎；眼前段毒性反应综合征；晶状体皮质残留引起炎症反应者；晶状体过敏性眼内炎。

1.2 方法

1.2.1 标本采集术后3 d，采集患者空腹静脉血5 mL，3000 r·min-1离心8～10 min，分离血清，用于血清IL-1β、IL-17、TNF-α及SAA、HMGB1水平检测；采集外周血2 mL，用于检测CD64指数。

1.2.2 检测方法(1)炎症因子检测：采用ELISA试剂盒检测患者血清中IL-1β、IL-17及TNF-α水平(试剂盒均购于上海信裕生物科技有限公司)，检测严格按照试剂盒说明书步骤进行。(2)血清SAA水平检测：采用胶体金免疫层析法检测患者血清SAA水平，检测仪器为PMDT8000胶体金免疫层析分析仪(试剂盒由普迈德科技有限公司提供)，检测步骤：吸取10 μL EDTA-K2抗凝全血与1 mL样品缓冲液充分混匀，吸取70 μL于检测板条加样孔中，待其反应5 min后，将检测板条放入分析仪读取结果。(3)血清HMGB1水平检测：采用双抗体夹心ELISA法检测血清HMGB1水平(试剂盒由厦门慧佳生物科技有限公司提供)，检测严格按照试剂盒说明书步骤进行：取出ELISA试剂盒，常温下平衡30 min，准备好实验血清，将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水稀释为标准浓度，标准品酶标板内HMGB1单抗浓度为135.0 μg·L-1，按照标准操作稀释浓度分别为90.0 μg·L-1、60.0 μg·L-1、15.0 μg·L-1、7.5 μg·L-1后，分别进行加样、温育、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色等处理，最终以标志物浓度为横坐标，光密度(D)值为纵坐标，计算样本HMGB1浓度。(4)CD64指数检测：采用 FACS Calibur流式细胞仪(Becton-Dickinson公司，美国)检测多形核白细胞(PMN)表面CD64水平[8]。颠倒混匀二胺四乙酸二酸钾抗凝血，取流式专用管，依次加入CD64-PE、CD45-PerCP抗体及全血，将试剂混合均匀，室温避光孵育40 min，每管加入500 μL溶血剂，混合均匀后室温避光静置10 min，离心5 min后弃上清液;加用磷酸盐缓冲液(PBS)1 mL，离心5 min后弃上清液;加用PBS 300 μL重悬，上流式细胞仪检测;并计算CD64指数[8]。

1.3 观察指标(1)统计感染组与对照组患者血清IL-1β、IL-17及TNF-α水平，并绘制ROC曲线，分析患者血清IL-1β、IL-17及TNF-α在诊断眼内炎中的价值。(2)比较感染组与对照组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数，并根据感染组患者临床是否出现前房积脓症状，将其分为前房积脓组与非前房积脓组，比较两组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数。(3)绘制ROC曲线，分析患者血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断眼内炎中的价值。

2 结果

2.1 两组患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α水平比较感染组患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α水平均显著高于对照组(均为P<0.05)(见表1)。

表1 两组患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α水平比较

2.2 患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α水平在诊断眼内炎中的价值分析绘制ROC曲线提示，患者血清IL-1β、IL-17及TNF-α在诊断眼内炎中的效能均不高，其AUC均<0.750(见表2、图1)。

表2 患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α水平在诊断眼内炎中的价值分析

图1 患者血清IL-1β、IL-17、TNF-α在诊断眼内炎中的ROC曲线

2.3 两组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数比较感染组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数均显著高于对照组(均为P<0.05)(见表3)。

表3 两组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数比较

2.3.1 不同类型眼内炎患者血清SAA、HMGB1及CD64指数比较感染组患者中出现前房积脓者血清SAA、HMGB1及CD64指数均显著高于未出现前房积脓者(均为P<0.05)(见表4)。

表4 前房积脓患者与非前房积脓患者血清SAA、HMGB1及CD64指数比较

2.3.2 感染组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数与IL-1β、IL-17、TNF-α间的相关性感染组患者血清SAA与其IL-1β及TNF-α均呈明显正相关，HMGB1与TNF-α呈明显正相关，CD64指数与IL-1β、IL-17、TNF-α均呈明显正相关(均为P<0.05)(见表5)。

表5 感染组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数与其IL-1β、IL-17、TNF-α间的相关性

2.4 患者血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断眼内炎中的价值绘制ROC曲线提示，患者血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断白内障术后眼内炎中均具有良好的效能：各指标单独应用时，以CD64指数诊断效能最高；三者联合应用能有效提高各项指标单独应用效果，其诊断效能最高(见表6、图2)。

表6 患者血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断眼内炎中的价值分析

图2 患者血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断眼内炎中的ROC曲线

3 讨论

病原菌培养耗时长，且阳性率低，其在诊断眼内炎中的价值有限，炎症反应是眼内炎发病过程的重要部分，故筛选灵敏的血清炎症因子，监测白内障术后患者血清炎症因子水平，以及时预测眼内炎发病，在积极采取治疗措施，改善患者预后中有重要价值。

本研究发现，白内障术后感染组患者血清中常见炎症因子IL-1β、IL-17及TNF-α水平均较对照组明显升高，其中IL-1β是炎症反应的重要介质，在细胞增殖、分化、凋亡等生理过程中发挥作用，可能引起炎症反应，此外，其还能诱导TNF-α表达，进而刺激基质细胞及免疫细胞产生更多IL-1β，加剧炎症反应[9]。TNF-α能促进中性粒细胞吞噬，发生抗感染功效，是重要的炎症因子[10]。绘制ROC曲线发现，血清IL-1β、IL-17及TNF-α在诊断眼内炎中的价值均不高(其AUC均低于0.750) ，寻找新型炎症指标，以提高眼内炎预测效果，是目前临床研究重点。

SAA是由肝脏组织合成的急性反应蛋白，SAA是组织淀粉蛋白A前体，急性炎症反应发生时，其血清浓度急剧上升，是目前反映机体炎症反应的敏感指标[11]。张坦等[12]研究发现，急性缺血性脑卒中患者血清SAA水平异常升高，且随着脑梗死面积的增大，患者病情程度的加重，血清SAA均呈上升趋势，并提出血清SAA联合脂蛋白磷脂酶A2与同型半胱氨酸在诊断早期脑卒中中具有良好效应，提示血清SAA在反映机体炎症反应中具有良好效应。HMGB1是参与机械性损伤、细胞感染及自身免疫性疾病相关炎症反应的重要调节因子，是一种较大量的非组蛋白性核蛋白，当有外来生物造成感染时，HMGB1可作为应激信号与炎症因子一起被释放至细胞外，细胞外HMGB1可直接以炎症因子身份参与固有免疫应答，还可作为内源性危险信号，激活适应性免疫应答。此外，HMGB1可刺激TNF-α、IL-1等炎症因子的释放，加重炎症反应程度。王丹[13]研究发现，HMGB1能有效预测冠心病患者经皮冠状动脉介入术后心力衰竭，提示HMGB1可能通过炎症反应促进心力衰竭进程。

郭连峰等[14]研究发现，多型核白细胞CD64指数联合常见炎症因子CRP及IL-6在诊断新生儿早期感染性疾病中具有良好价值。本研究发现，与对照组患者相比，感染组患者CD64指数明显更高。CD64是一种跨膜糖蛋白，正常情况下，CD64在巨噬细胞、树突状细胞表面的表达量高，而在PMN表面的表达量低，但当机体发生感染时，CD64在PMN表面的表达量将大幅度上升，参与抗体依赖性细胞所介导的细胞毒性反应，加速靶细胞死亡[15]。

血清SAA、HMGB1均是新型炎症因子，CD64指数在反映机体感染中具有较高的敏感性，本研究发现，感染组患者血清SAA、HMGB1及CD64指数均明显高于对照组，且临床具有前房积脓的眼内炎患者血清SAA、HMGB1及CD64指数均明显高于无前房积脓者。此外，相关性分析提示，感染组患者血清SAA与其IL-1β及TNF-α均呈明显正相关，HMGB1与TNF-α呈明显正相关，CD64指数与IL-1β、IL-17、TNF-α均呈明显正相关。说明血清SAA、HMGB1及CD64指数在提示眼内炎、反映其病情严重程度中均具有一定的价值。绘制ROC曲线提示，血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断白内障术后眼内炎中均具有良好的效能，各指标单独应用时，以CD64指数诊断效能最高，三者联合应用能有效提高各项指标单独应用效果，其诊断效能最高。

综上所述，血清SAA、HMGB1及CD64指数在诊断白内障术后眼内炎、反映眼内炎严重程度中具有一定的价值，有望成为临床预测眼内炎的新型指标。