金芩蓝口服液对鸡风热犯肺证的疗效研究

邓锐涵，周紫冲，杨艳艳，吴雪旖，冯静，张露萍，李亦奇，冉蓉，陈洪亮，徐美荣，王林*

(1.济南亿民动物药业有限公司，济南 250105；2.莱州市畜牧兽医站，山东烟台 261400)

鸡风热犯肺证属温热病范畴，是因气温骤变、季节交替，再加之流感、低致病性新城疫、传支、传喉等病毒混合感染细菌、支原体或寄生虫等复杂因素所造成的病证[1-3]。证见发热、咳嗽、甩鼻、咽喉肿胀、眼睛变形结膜充血、腹泻、精神沉郁、食欲减退、扎堆、口渴等；本证在三焦辨证中属上焦病证，在卫气营血辨证中则属卫分证；本证为肺失宣清所致，因此治疗原则为清热解毒、凉血利咽。

金芩蓝口服液是以金银花、连翘这经典药对共为君药，有加强清热解毒、疏散风热之功效[4-5]；黄芩、板蓝根二者共为臣药：黄芩常作清热解毒之用，有泻肺火、解肌热之功[6-7]，板蓝根清热降火、凉血利咽，善于治疗风热上攻所致咽喉肿痛、口舌生疮[6,9-10]，二者既能起到凉血泻火、消肿止痛的功效，又能加强君药透热降温的效果；诸药共奏清热解毒、凉血利咽之功效，用于治疗和预防风热之毒侵袭机体引起的鸡风热犯肺证。本研究旨在考察金芩蓝口服液对鸡风热犯肺证的疗效，为本品临床用药推广提供有效依据，为因此证造成的养禽业产肉率和产蛋率下降提供新的解决方案。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 1日龄白羽肉鸡，饲养于控温控湿半封闭动物房中，专人饲养管理至14日龄，饲喂小鸡全价粮。山东某蛋鸡场中自然发病的蛋鸡，本场标准免疫程序及饲养管理，饲喂产蛋期鸡饲料，200日龄相继发病。

1.1.2 受试药物 金芩蓝口服液，批号：20051001，由济南亿民动物药业有限公司提供；双黄连口服液，批号：20052801，由济南亿民动物药业有限公司提供。

1.1.3 主要试剂和毒株 H9N2AIV(EID=10E-6.5,0.1 mL)，编号：HNAU0037，购自中国兽医药品监察所；脂多糖(LPS标准品)，编号：L8880，购于SOLARBIO 公司。

1.2 方法

1.2.1 金芩蓝口服液对人工鸡感染风热犯肺证的治疗试验

1.2.1.1 动物模型的建立 将60只14日龄的健康鸡随机分为3组，分别为模型A组、模型B组和模型C组；模型A组用0.1 mL H9N2AIV液点眼滴鼻，模型B组腹腔注射80 μg/kg LPS，模型C组采用0.1 mL H9N2AIV点眼滴鼻和腹腔注射80 μg/kg LPS混合感染的方法进行攻毒，将各组一同转移至温度10±2 ℃的密闭房间内，持续冷风吹4 h，随后再转移至42±2 ℃的密闭房间内，持续热风吹4 h，然后移入标准饲养环境中；8 h后按上述步骤重复操作一次后，观察记录发病情况并进行中兽医辨证诊断。

1.2.1.2 药物治疗试验

1.2.1.2.1 病例纳入标准 (1)主症：发热，咳嗽，甩鼻，咽喉肿胀。(2)次症：眼睛变形结膜充血，腹泻，精神沉郁，食欲减退，扎堆，口渴。(3)符合2～3项主症，1～2项次症的病鸡，可用于进行鸡风热犯肺证疗效试验的评价。

1.2.1.2.2 分组及给药方案 选取建模成功的病鸡100只，随机分为5组，分别为金芩蓝高剂量组、金芩蓝中剂量组、金芩蓝低剂量组、药物对照组、模型对照组；再随机选取20只健康鸡设立健康对照组，单独专人饲养。具体给药方案见表1；试验期给药5 d，停药观察7 d，共12 d；每天测定肛温并观察记录鸡只情况，试验结束后计算治愈率、有效率和无效率。

表1 分组及给药方案

1.2.1.2.3 疗效评价 (1)治愈：用药后主症、次症消失，且不复发判为治愈，计算治愈率。(2)有效：用药后主要症状有所改善，精神食欲明显改善，判为有效计算有效率。总有效率 = 治愈率 + 有效率。(3)无效：在用药后病证无改善或加重、死亡或在停药观察期内复发，判为无效。

1.2.2 金芩蓝口服液对自然发病的鸡风热犯肺证的临床治疗试验

1.2.2.1 病例确诊 山东某蛋鸡养殖场蛋鸡群于200日龄左右开始陆续出现发热、咳嗽、甩鼻、咽喉肿胀、眼睛变形结膜充血、腹泻、精神沉郁、食欲减退、被毛粗乱、口渴等症状；剖检可见喉头弥漫性出血，气管环状出血，气管内黄色干酪样分泌物或黄红色粘稠分泌物；治疗前死亡率达到5%，整体产蛋率下降18%左右。经中兽医辨证为风热之毒引起的的风热犯肺证，故采用金芩蓝口服液进行临床治疗试验。

1.2.2.2 病例纳入标准 同本文“1.2.1.2.1”。

1.2.2.3 分组及处理方案 根据“1.2.2.2”中的纳入标准，选取600只病鸡单独饲养于另一消毒后的鸡舍，随机分为两组，每组300只，金芩蓝口服液组和双黄连口服液组。根据推荐剂量，金芩蓝口服液组用量按2 mL/L水，混饮，连用5 d；双黄连口服液组用量按2.5 mL/L水，混饮，连用5 d。试验期给药5 d，用药结束后观察7 d；试验期内观察记录病程发展及死亡情况，试验结束后统计治愈率、有效率和无效率。

1.2.2.4 疗效评价 同本文“1.2.1.2.3”。

1.2.3 数据分析 利用spss22.0软件进行显著性分析。

2 结果与分析

2.1 金芩蓝口服液对人工感染鸡风热犯肺证的治疗试验

2.1.1 鸡风热犯肺证模型的建立

2.1.1.1 临床发病情况及剖检变化 由表2可知，模型A组试验期发病率为50%，无死亡情况；模型B组试验期发病率为70%，死亡率为5%；模型C组试验期内发病率为85%，死亡率为10%。病鸡主要表现为发热、咳嗽、甩鼻、咽喉肿胀、眼睛变形结膜充血、腹泻、精神沉郁、食欲减退、扎堆、口渴等症状，具体见表3。试验结束后剖检处死病鸡及病死鸡均可见喉头弥漫性出血，气管环状出血，气管内黄色干酪样分泌物或黄红色粘稠分泌物，如图1所示。

表2 发病率、死亡率情况

表3 临床发病症状

A 喉头弥漫性出血；B 气管环状出血；C1 黄色干酪样分泌物；C2 黄红色粘稠分泌物。

2.1.1.2 中兽医辨证及模型的确立 在《兽药研究技术指导原则汇编》的指导下，确定以模型C组的方法建立模型，并根据剖检变化和其主要症状(表3)经中兽医辨证符合风热犯肺证症状，此方法建立模型可供评价金芩蓝口服液药效试验用。

2.1.2 药物治疗试验 由图2可知，给药期间，金芩蓝高、中剂量组解热效果优于金芩蓝低剂量组和药物对照组；观察期内，金芩蓝高、中、低剂量组和药物对照组解热效果皆为良好。

图2 试验期间鸡肛温变化情况折线图(n=20)

由表4可知，金芩蓝高剂量组治愈率为90%；金芩蓝中剂量组治愈率为85%；金芩蓝低剂量组治愈率为75%；药物对照组治愈率为80%。金芩蓝高、中、低剂量组和药物对照组与模型对照组相比，治愈率差异极显著(P<0.01)；金芩蓝高、中剂量组与模型对照组相比，总有效率差异极显著(P<0.01)；金芩蓝低剂量组和药物对照组与模型对照组相比，总有效率差异显著(P<0.05)。结果表明，金芩蓝高剂量组治愈率最高；金芩蓝高、中剂量组总体疗效要优于金芩蓝低剂量组和药物对照组。

表4 药物对鸡风热犯肺证的治疗效果

2.2 金芩蓝口服液对自然发病的鸡风热犯肺证的治疗试验 由图3可知，经过治疗，金芩蓝口服液组的食欲恢复情况要优于双黄连口服液组。由图4可知，给药期内，金芩蓝口服液组与双黄连口服液组的产蛋率都在稳定恢复；观察期内，金芩蓝口服液组产蛋能力恢复优于双黄连口服液组。

图3 试验期间两组鸡日均采食量情况折线图(n=300)

图4 试验期间两组鸡日产蛋率情况折线图(n=300)

由表5、表6可知，金芩蓝口服液组治愈率为89%，总有效率为96.3%，死亡率为3%；双黄连口服液组治愈率为86.7%，总有效率为94.4%，死亡率为5%。结果表明，金芩蓝口服液与双黄连口服液相比，具有更好的治疗效果。

表5 药物对自然感染鸡风热犯肺证的治疗效果

3 讨论与结论

3.1 鸡风热犯肺证模型的建立 中兽医认为，新城疫病毒、流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒等为“疫气”，也就是古文资料中所指的“瘟疫”，其皆属于“热毒”范畴；风热之毒可侵犯各日龄的肉鸡、蛋鸡，造成鸡的风热犯肺证；多发于季节交替和温度骤变期，而相关的研究报道多是理论研究或人用中药研究[1-2]，或者采用自然发病鸡只进行试验[11]，尚未见鸡风热犯肺证模型的有关报道；因此，本研究旨在建立鸡风热犯肺证模型，以期可评价药物疗效。

周萌等人[12]发现，采用低致病性的H9亚型AIV对SPF鸡攻毒时，发病症状非常轻微，临床上表现不出明显的症状；采用高致病性H5亚型AIV攻毒时，由于毒力过强，发病鸡几乎100%死亡。郭群等人[13]发现，利用LPS诱导可稳定建立鸡发热模型。因此，本研究采用人工模拟热应激环境配合病毒以及内毒素感染，综合考察鸡风热犯肺证模型。

根据《兽药研究技术指导原则汇编》的指导，人工建立病理动物模型的标准是发病率80%以上，有一定死亡率，病鸡具有一定采食和饮水能力，能保证给药的正常进行。据此，本试验发现当采用AI H9V与LPS混合感染配合热应激的方式进行建模时，试验鸡发病率为85%、死亡率为10%且病鸡发病期可进行采食饮水，符合《兽药研究技术指导原则汇编》相关要求。因此，研究成功建立鸡风热犯肺证的动物模型。

3.2 金芩蓝口服液对人工感染鸡风热犯肺证的治疗试验 金芩蓝口服液具有清热解毒、凉血利咽之功效，金银花、连翘二者配合具有良好的清表热作用[4-5]；加之黄芩、板蓝根二味药材组方而成，亦具有良好的清里热作用[6-10]；因此，金芩蓝口服液对于风热犯肺证具有良好的治疗效果。

试验结果表明，金芩蓝高、中、低剂量组以及药物对照组对于人工诱导的鸡风热犯肺证具有良好的疗效，且治愈率与模型对照组相比，均具有极显著的统计学意义；而金芩蓝高、中剂量组的综合疗效均优于双黄连口服液且具有良好的解热作用。

因此，金芩蓝口服液可临床上用于鸡的风热犯肺证，其推荐用量为2 mL/L水，混饮，连用5 d。

3.2 金芩蓝口服液对自然发病的鸡风热犯肺证的临床疗效试验 在自然发病的鸡风热犯肺证治疗试验中，通过《兽药研究指导原则汇编》、《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》的指导，经中兽医辨证，选取符合纳入标准的病鸡进行试验；结果表明，金芩蓝口服液可有效的恢复病鸡日采食量和日产蛋率，并且可有效的控制死亡率，其总有效率达到96.3%；因此，金芩蓝口服液在推荐剂量下可有效的控制鸡风热犯肺证。

3.3 结论 中兽医辨证鸡风热犯肺证制约着养禽业的发展，如不加以控制，发展到温热病营、血分证，将会给养殖户造成重大经济损失。研究通过人工建立动物模型以及自然发病病例考察了金芩蓝口服液的治疗效果，结果显示，金芩蓝口服液可有效的治疗鸡风热犯肺证，推荐使用剂量为2 mL/L水，混饮，连用5 d。