规模猪场副猪嗜血杆菌病防控免疫试验研究

杨国丽，王克才，王 军，陈 峰，董素凤，郝运河，李晓娥，张继一

（1．辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳110000；2．山东省动物疫病预防与控制中心，山东 济南250000；3．阜新市现代农业发展服务中心，辽宁 阜新123000）

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起的一种猪的传染病，临床以体温升高、关节脓肿、呼吸困难、多发性浆膜炎和高死亡率为特征[1]，严重危害仔猪和青年猪的健康。断奶仔猪和保育阶段的5～8周龄的猪易患病[2]，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达50%。此外，HPS还可引起败血症，在急性感染后可能留下后遗症，即母猪流产、公猪慢性跛行。HPS属革兰氏阴性短小杆菌，其形态多变，有15个以上血清型[3]，其中血清型4、5、13最为常见（占70%以上）。该菌生长时严格需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），不需要X因子（血红素或其他卟啉类物质），在血液培养基和巧克力培养基上生长，菌落小而透明，在血液培养基上无溶血现象；在葡萄球菌菌苔周围生长良好，形成卫星现象。据报道，副猪嗜血杆菌病的真实发病率可能为实际确诊的10倍之多[4]。

副猪嗜血杆菌与其他病毒，如猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒、猪流感和猪呼吸道冠状病毒[5-6]或细菌协同时比较容易引发动物一些疾病[7-8]。近年来，从患肺炎的猪中分离出HPS的概率越来越高，与支原体肺炎的日趋流行有关，也与病毒性肺炎的日趋流行有关[9-10]。研究表明，副猪嗜血杆菌病在支原体感染猪肺中的检出率可达51.2%[5]。针对副猪嗜血杆菌病防控通常的做法是采用药物预防、治疗及进行免疫[11]。而针对该病的免疫目前面临的主要问题是HPS对诱发疾病的免疫效果不清，诱发疾病免疫不佳。因此，文章进行HPS防控中的免疫试验研究。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验在沈阳博睿农牧科技有限公司进行。选取21日龄临床健康保育仔猪共300头，分成3组，每组100头，分别为试验组、对照组和空白组。使用Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，对采集的临床样品进行核酸提取，用核酸检测方法和测序分析，分离到该场的主要HPS血清型是1型和5型。

1.2 试验疫苗

针对性免疫疫苗使用嗜净诺（副猪嗜血杆菌病二价灭活疫苗1型LC株+5型LZ株）购自浙江诺倍威生物技术有限公司（No.2017010）。肌肉注射3 mL/头，3周后加强免疫1次。

副猪嗜血杆菌病灭活疫苗（4型JS株+5型ZJ株）疫苗购自普莱柯生物工程股份有限公司（No.171009）。肌肉注射2 mL/头，3周后加强免疫1次，试验结束后统计HPS的发病率。

1.3 测定指标

1.3.1 生长性能

记录3组试验猪的初始窝重（21日龄）计算个体均重，记录3组试验猪在试验结束时（70日龄）的窝重，计算总增重和个体平均增重情况。记录3组试验猪试验初始至试验结束总消耗饲料情况，计算料重比。具体计算公式如下：

1.3.2 细菌分离培养

无菌采集临床发病试验猪的肝、肺、脾、淋巴结等脏器样品，接种于TSA培养基，37℃培养24～48 h，观察菌落形态，镜检。将纯化的细菌接种于生化反应鉴定管中，37℃过夜培养，观察结果并记录。

1.4 数据统计与分析

利用生物学卡方检验和t检验统计法，比较试验组、对照组和空白组在发病率、成活率、个体均重和饲料转化方面的差异性，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 副猪嗜血杆菌病针对性免疫同期对比试验结果（见表1）

由表1可知，试验组的猪出现四肢肿胀、气喘、咳嗽等症状的数量显著少于对照组和空白组（P＜0.05）；保育结束后（70日龄），试验组的仔猪成活率及个体均重均显著高于对照组和空白组（P＜0.05）；试验组的仔猪料重比显著低于对照组和空白组（P＜0.05）；其他试验指标未产生显著影响（P＞0.05）。

表1 副猪嗜血杆菌病针对性免疫同期对比试验Tab.1 Comparison of correspondingimmunizationschedulesfor Haemophilus parasuis

2.2 细菌分离鉴定结果（见图1、图2、表2）

由图1可知，菌落呈圆形、针尖状、表面光滑透明隆起。由图2可知，挑选形态较好的单一的菌落用革兰氏染色法染色，镜检呈略弯曲短杆状。

由表2可知，根据阴、阳性结果结合细菌培养结果，可初步综合判定分离的细菌为副猪嗜血杆菌。

图1 细菌培养Fig.1 Bacterial culture

图2 染色镜检Fig.2 Gram staining microscopic examination

表2 生化试验结果tab.2 Results of biochemical tests

2.3 免疫保护结果

同期免疫对比试验场，试验组的猪发病率5%，仔猪成活率94%，发病率比对照组和空白组分别降低9%和12%，成活率比对照组和空白组分别提高10%和13%。对照组和空白组的发病率和成活率差别很小。

3 讨论

保证猪健康也是减少该病发生的基本前提。在开展本病针对性免疫试验过程中，还对其他引起呼吸道损伤的混合或继发性常见疫病进行了综合防控，常见疫病造成的呼吸道损伤极易对HPS的继发感染创造机会，从而加重HPS的流行[12]。因为HPS是猪场常在菌，我国80%以上的规模猪场都存在该菌[13]。日常饲养管理中应该防止其他疫病发生继发感染HPS。因此，在HPS流行猪场，做好猪蓝耳病、猪气喘病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、猪链球菌病及各种寄生虫等疾病的免疫和综合防控是重中之重，合理防控可有效降低规模猪场养殖过程中的HPS感染和流行的风险[14-15]。

4 结论

开展针对性同期对比试验具有显著的防控效果，可减轻HPS病的发生率，提高生产性能。本研究使猪群的HPS发病率控制在6%以下，减少规模场HPS病的发生，提高保育仔猪的生长性能和饲料转化率，从而节省养殖成本。