辣蓼黄酮对小鼠抗炎作用的研究

关静渊，李 璐，于美玲，韦英益，胡庭俊

（广西大学动物科学技术学院，广西 南宁530005）

辣蓼（Polygonum hydropoperL.）又名水蓼、柳蓼、白辣蓼、红辣、蓼牙菜等，广泛存在于我国南北各地，多生于溪边、山坡、湿地，是传统中草药之一。《本草纲目》中记载：“蓼叶，辛、温、无毒”，具有止痢止痛、解毒化瘀等功效。研究发现，辣蓼主要化学成分有黄酮类、挥发油类、三萜类、蒽醌类和蓼酸等，具有抗微生物、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤和杀虫等生物活性，在医药、食品、植物源农药等方面有良好的开发前景[1]。大量研究表明，黄酮类化合物具有生物抗氧化性、清除自由基作用、抗炎、免疫、抗菌、降血脂、降血压、降血糖和镇痛等生理活性[2]。研究发现，辣蓼黄酮的主要成分槲皮素与山柰酚，在RAW264.7细胞中能有效抑制脂多糖（LPS）诱导的NO释放，表明该黄酮具有体外抗炎活性[3]。文章对辣蓼黄酮的体内抗炎活性进行研究，探讨辣蓼黄酮正丁醇部分（FNB）是否具有抗炎作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料

辣蓼黄酮正丁醇部分（FNB）由广西大学动物科学技术学院药理实验室提取。

1.2 试验动物

昆明系SPF级小鼠购自广西医科大学实验动物中心。

1.3 试验仪器设备

EnSpire多功能荧光酶标仪（PerkinElmer）、Direct-Q 5UV纯水系统（MERCK MILLIPORE）、CD-UPT-1纯水仪（成都纯越科技有限公司）、DTDN超声波清洗机（宁波新芝生物科技有限公司）、TYPE1-14微量离心机（SIGMA）、METTLER TOLEDO AB104-L电子分析天平（EL204瑞士）、制冰机（SANYO）、Uvmini1240紫外分光光度仪（日本岛津）。

1.4 试验试剂

地塞米松磷酸钠注射液（16052401A，贵州天地药业公司）、炎症因子用ELISA试剂盒（欣博盛生物科技有限公司）、小鼠环氧合酶（COX-1和COX-2）试剂盒（江苏晶美生物科技有限公司）。

1.5 动物分组及处理

将50只昆明系SPF级小鼠随机分成5组，每组10只，雌、雄各半。空白对照组，每只小鼠给予0.9%生理盐水0.5 mL灌服，连续给药5 d；阳性药物对照组，每只小鼠腹腔注射地塞米松注射液25 mg/kg体重，每天1次，连续5 d；FNB剂量组，每只小鼠给予辣蓼黄酮150、100、50 mg/kg体重灌服给药，每天1次，连续5 d。

上述各个试验组小鼠在给药5 d后，于最后一次给药后1 h，小鼠左耳两面涂抹0.05 mL二甲苯致炎，右耳作为对照。20 min后采样用于各项指标测定。

1.6 测定指标及方法

1.6.1 临床表现

试验期间，每天定时观察并记录小鼠的采食、饮水、精神状况、被毛状况、健康状况及日常活动。观察小鼠是否出现与药物相关的不良反应，如精神状态、呼吸、行为及粪便等情况变化。记录小鼠不良反应出现的时间、程度、持续时间。

1.6.2 炎性因子

1、持续推动对网络安全保护措施的投资。虽然目前核设施运营商已在努力优先考虑网络安全工作，但当前的网络威胁仍在不断上升。因此，需要付出专门努力，将网络安全最佳实践纳入到核设施的文化建设中。

对小鼠进行眼球采血，静置2 h，析出血清。取上层血清，3 000 r/min离心5 min，分装后于-80℃保存，用于小鼠IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1和COX-2水平测定。严格按照ELISA试剂盒（深圳欣博盛生物科技有限公司）的说明书进行测定。

1.6.3 脏器指数、小鼠耳肿胀度及耳肿胀率

然后将小鼠颈椎脱臼处死，分别取出胸腺和脾脏并称重，计算脏器指数；用直径6 mm打孔器在左右两耳的同一部位打下耳片，立即用电子天平称量两耳片重量，计算炎性肿胀度和肿胀抑制率。计算方法如下：

耳肿胀率=（左耳重量-右耳重量）/右耳重量×100%（1）

1.7 数据统计与分析

用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，Duncan法进行多重比较，试验所得数据用“平均值±标准差”表示。P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 小鼠临床表现

各组小鼠饮食正常、精神状态良好，组间差异不明显。

2.2 FNB对小鼠脏器指数的影响（见表1）

由表1可知，FNB处理后，3组小鼠的脏器指数与空白对照组差异不显著（P＞0.05）。与空白对照组相比，阳性药物对照组肝脏指数显著增加（P＜0.05），脾脏指数、胸腺指数显著降低（P＜0.05）。

表1 FNB对小鼠脏器指数的影响Tab.1 Effect of FNB on organ index in mice 单位：mg/g

2.3 FNB对小鼠耳肿胀的影响（见表2）

由表2可知，阳性药物对照组小鼠耳肿胀率极显著降低（P＜0.01）；FNB各剂量组与空白对照组相比较，小鼠耳肿胀率显著或极显著降低（P＜0.05，P＜0.01），说明FNB具有一定的抗炎作用。

表2 FNB对小鼠耳肿胀率的影响Tab.2 Effect of FNB on ear swelling rate in mice

2.4 FNB对小鼠炎性因子的影响（见表3、表4）

由表3可知，与空白对照组相比，阳性药物对照组小鼠血清IL-6、IL-8、IL-1β水平差异显著（P＜0.05），其中阳性药物对照组IL-10差异极显著（P＜0.01）。FNB各剂量组与空白对照组相比较，4种细胞因子均差异不显著。

由表4可知，与空白对照相比，阳性药物对照组小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平差异显著（P＜0.05）。FNB各剂量组与空白对照组相比较，4种炎性因子均差异不显著。

表3 FNB对小鼠血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β水平的影响Tab.3 EffectsofFNB on serum IL-6,IL-8,IL-10,IL-1 levelsin mice 单位：ng/L

表4 FNB对小鼠TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2水平的影响Tab.4 Effects of FNB on levels of TNF-α,McP-1,COX-1 and COX-2 in mice 单位：μg/L

3 讨论

黄酮是植物的一种次级代谢产物，普遍存在于多种植物中，因药理活性多样和来源丰富等特点，一直是研究的热点。近年来，国内外大量的研究表明，黄酮具有显著的抗炎作用。金岩等[4]研究松生等总黄酮提取工艺及镇痛抗炎作用，结果发现，松生等乙醇提取物、正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均具有明显镇痛抗炎作用。刘丽华等[5]对兔儿伞总黄酮抗炎作用研究中，兔儿伞总黄酮各剂量组能显著降低小鼠毛细血管通透性；兔儿伞总黄酮高剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀有抑制作用，兔儿伞总黄酮具有较强的抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性有关。穿心莲中提取的黄酮对炎性因子具有较强的清除能力，鸡蛋清对急性炎症有一定的作用[6]。

黄酮类化合物的抗炎作用与细胞因子及其受体有关。黄酮类化合物可通过抑制炎性细胞因子的产生或通过其他途径发挥抗炎功效，也会影响细胞因子及其受体从而发挥抗炎作用。参与炎症反应的细胞因子种类很多，其中比较重要的是白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子（TNF-α）等。IL-1β、TNF-α能激活NF-κB在炎症反应中使巨噬细胞和其他细胞分泌促炎因子IL-6、IL-8等。赵丹等[7]研究蓝莓叶总黄酮的体外抗炎功效，结果表明，蓝莓叶总黄酮通过影响炎症相关因子表达量的产生，从而减弱促炎症反应，增强抗炎症反应，最终发挥抗炎功效。

黄酮类化合物也可以调节花生四烯酸代谢中参与炎症反应并起关键作用的酶活力，如磷脂酶、环氧合酶等，从而抑制花生四烯酸、前列腺素类的生成，进而抑制炎症产生。环氧合酶（COX）是催化合成各种前列腺素的限速酶，参与动物机体各种生理、病理反应，其具有2种结构亚型，即结构型COX-1和诱导型COX-2。COX-1的作用是参与炎症，并可加重炎症；而COX-2可能是在炎症早期中启动炎症反应，而后期有助于炎症恢复[8]。由于COX-2是炎症关键介质，所以很多新型非甾体抗炎药物把其当作主要作用靶点。Shil等[9]在发酵1、3、6、8、12个月的大豆中，发现发酵12个月的大豆的总黄酮的含量最高，并且能显著性抑制iNOS和COX-2 mRNA的表达，体现最强的抗炎作用。穗花杉黄酮能减轻巴豆油导致的小鼠耳廓肿胀，并且抑制对豚鼠的环氧合酶和Ⅱ型磷脂酶A2活力[10]。

近年来，有学者对辣蓼黄酮的抗炎活性进行探究。赵桂法等[11]把辣蓼与枣树皮联合一起治疗急性肠炎，治疗效果较好。将辣蓼滴眼液用于治疗细菌性角膜炎、病毒性角膜炎、急慢性结膜炎和眼痒病，均获得较好的效果[12-14]。为完备辣蓼黄酮的抗炎作用，本试验建立二甲苯致小鼠耳急性肿胀炎症模型，然后观察蓼黄酮FNB在小鼠体内的抗炎作用。用药后，耳部皮肤毛细血管充血清晰。试验中阳性对照组胸腺指数、脾脏指数低于空白对照组，可见在地塞米松的作用下，小鼠的胸腺、脾脏有很大程度的萎缩。本试验中，阳性药物对照组的炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、MCP-1、COX-1、COX-2与空白对照与相比差异显著，IL-10差异极显著，说明炎症模型建立成功。FNB对小鼠的耳肿胀有抑制作用，表明FNB有一定的抗炎作用。

4 结论

小鼠体内抗炎试验结果表明，不同剂量的辣蓼黄酮正丁醇部分（FNB）对小鼠具有一定的抗炎作用。