头孢曲松钠药物抗体影响临床抗感染治疗效果的临床研究

吴昌松，岑荣飞，李俊艳，罗普荣，罗庆艳，朱廷伦，周美春

(黔南民族医学高等专科学校附属医院，贵州 都匀 558000)

头孢曲松钠(C18H16N8Na2O7S3·3.5H2O，分子量661.59)为孢菌素类第三代药物，对G+、G-菌厌氧菌等具有广光谱抗菌活性，是临床抗菌一线药物。长期用药后临床效果治疗不佳，取患者分泌物在体外作细菌培养加细菌药敏试验呈敏感或中度敏感结果。但临床用药疗效治疗不佳的病例，常规考虑细菌菌株变异产生临床耐药[1]，没有从免疫学角度考虑患者长期使用该类药物后刺激机体是否产生该类药物的免疫性药物抗体。当该类药物再次进入机体后被相应的免疫性药物抗体结合，形成抗原-抗体免疫复合物IC，改变药物的理化结构，影响药物的生物学活性，导致临床抗感染效果不佳。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2017年8月至2019年7月在本院住院期间使用头孢曲松钠静脉滴注抗感染治疗，48～72 h治疗无效的患者100例为实验组[2]，男58例，女42例；年龄35～70岁，平均(47.38±9.05)岁。同期在住院期间无头孢曲松钠用药史，临床使用头孢曲松钠静脉滴注抗感染治疗疗效显著的患者100例为对照组，男63例，女37例；年龄28～72岁，平均(45.72±12.26)岁。

1.2 仪器与试剂 仪器 ence湘仪L-500-A离心机，TD-2Y医用离心机，源博生科LB-3000医用离心机，FYQ型免疫微柱凝胶附育器，二氧化碳培养箱SANYO型号(MCO-20AIC)。

试剂 微柱凝胶抗人球蛋白卡(江阴力博医药生物技术股份有限公司，批号：201706020)，标准红细胞(上海血液生物，201709015-201806017)，头孢曲松钠药敏纸片(Oxoid Limited/奥克欧德有限公司：批号235550)；MH琼脂平板(郑州图安生物：批号20170608B)。

1.3 方法 采集患者全血或抗凝血(EDTA-Na2)5 ml，分离血清或血浆，用患者住院期间的同批号药物和正常人O型红细胞，备致敏指示细胞。用间接抗人球蛋白方法，采用微柱凝胶免疫抗人球蛋白试剂卡，检测患者血液中药物抗体。致敏指示红细胞制备。用正常3人份O型红细胞，洗涤后配制成2～2.5%悬液，同批号头孢曲松钠，用生理盐水配制成10～30 mg/ml，各取1 000 μl置37℃孵育1 h后，配制成0.5%红细胞悬液。指示红细胞II(抗人球蛋白包被的红细胞)。

1.4 检测方法 按微柱凝胶间接抗人球蛋白试验SOP文件操作(微柱凝胶免疫抗人球蛋白试剂卡(IgG+C3d)：(1)头孢曲松钠免疫性抗体检测。取被检测血清、指示红细胞I、指示红细胞II各50 μl加入微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡孔内，混匀37℃孵育1 h，置LB-3000医用离心机离心5 min(900 r/min×2 min,1 500 r/min×3 min)30 min内观察结果。指示红细胞悬浮于凝胶表面或凝胶中呈阳性反应，指示细胞沉于反应孔底部为阴性反应结果。(2)免疫性药物抗体效价测定。按倍比稀释，按SOP文件步骤程序操作。通过血型血清学专用离心机重力离心，指示红细胞悬浮在反应孔凝胶表面或凝胶中，判读为阳性结果，指示细胞沉于反应孔底部则为阴性反应结果。免疫性药物抗体效价测定结果判读，最后一管凝集强度1+，判为最高抗体效价。(3)细菌药敏试验：①在MH琼脂平板培养基上接种细菌菌株；②将头孢曲松钠药敏纸片覆盖于种菌株琼脂平板表面，置37℃二氧化碳培养箱恒温培养箱培养24 h。③药物抗体(IgG)抑菌药敏试验。将实验组和对照组浸泡处理的药敏纸片覆盖于接种菌株表面[3]，置37℃二氧化碳培养箱恒温培养箱培养24 h，抑菌环大于15 mm以上为药物抑菌敏感(S)，抑菌环在10～14 mm之间为药物抑菌中度敏感(I)，抑菌环小于10 mm以下为细菌耐药(R)。

1.5 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件包统计处理数据，计数资料行χ2检验，以P<0.05为显著性水平。

2 结果

2.1 药物抗体(IgG)检测 实验组和对照组患者血清中头孢曲松钠药物抗体(IgG)检测结果见表1。实验组的阳性率高于对照组(χ2=56.638，P<0.01)。

表1 两组药物抗体(IgG)检测结果比较

2.2 药物抗体效价测定 实验组和对照组头孢曲松免疫性药物抗体滴度检测结果见表2。

表2 两组免疫性药物抗体效价检测

2.3 细菌药敏试验 将实验组和对照组分别用患者药物抗体阳性血清(IgG)和患者药物抗体(IgG)阴性血清浸泡处理的药敏纸片进行孢曲松钠药敏试验，结果见表3。实验组的中度敏感率和耐药率分别为38.0%和62.0%，对照组的敏感率为100.0%，两组孢曲松钠药敏实验结果差异具有显著性(χ2=89.86，P<0.01)，实验组具有一定耐药性。

表3 两组用血清浸泡处理孢曲松钠药敏纸片试验结果

3 讨论

头孢曲松钠为半合成的第三代头孢菌素类药物，分子量小，进入机体不能刺激机体免疫系统产生相应的免疫性药物抗体(IgG)。但通过静脉滴注进入患者体内，与血液中载体蛋白结合，形成药物-载体蛋白复合物后，形成大分子物质，而具有免疫原性，刺激机体免疫系统中的浆细胞，则分泌相应的药物抗体[4]。产生的免疫性药物抗体与血液中的药物-载脂蛋白复合物结合，形成药物抗体(IgG)-药物-载脂蛋白(抗原)复合物[5]。使药物的物理结构、化学性质、生物学活性、半衰期等发生变化，影响头孢曲松钠的临床治疗效果。

头孢曲松钠对革兰阳性菌、阴性菌、厌氧菌显示广谱抗菌活性，常用于呼吸道、尿路、皮肤软组织感染等治疗。临床使用头孢曲松钠药物抗感染治疗过程中，部分患者感染症状得不到有效控制或48～72 治疗无效。当临床使用同一药物治疗患者感染得不到有效控制，而细菌药敏试验结果呈中度以上敏感，与临床治疗效果不一致时，常规考虑为细菌菌株的变异而产生耐药[6]。临床常规采集患者相应的标本作细菌培养加药敏试验查明原因，为临床正确选择药物治疗提供科学的理论依据。

表1结果显示，实验组患者有长期使药史，其药物抗体阳性率为(72.00%)明显高于对照组(19.00%)，说明药物抗体产生与用药史具有一定关联性。表2药物抗体效价检测结果显示，实验组药物抗体效价最高凝集强度1+，效价滴度为64，对照组最高凝集强度1+，效价滴度为2。从测定结果分析，实验组患者有使用头孢曲松钠用药史，机体的免疫系统曾经受头孢曲松钠免疫刺激，患者曾经产生免疫性抗体药物抗体。患者停止使用该药物后，抗体效价会降低。当患者再次使用该药物治疗，药物与载体蛋白结合获得免疫原性，刺激机体的浆细胞产生抗-头孢曲松钠(IgG),1周内抗体迅速上升，2周后上升到最高峰。从实验组检测结果分析，符合“记忆免疫应答抗体产生的规律”。

在MH琼脂平板培养基上模拟体内条件的药敏试验(表3)结果显示，实验组用药物抗体阳性血清浸泡处理的药敏纸片不能有效抑制细菌生长，耐药率高达62.00%，对照组能够有效抑制细菌生长，从而证实实验组药敏试验结果受血清中药物抗体的影响，呈现抑菌耐药现象[7]。

综上所述，影响头孢曲松钠等小分子药物抗感染治疗的原因与其用药史、药物抗体、药物抗体效价等因素有关。患者长期使用某种小分子药物，可能会导致机体产生免疫性药物抗体，影响其临床抗感染疗效。当临床药敏实验结果不支持临床治疗诊断时，应结合患者是否有该类药物的用药史等综合分析，检测药物抗体水平，为临床合理用药提供实证依据。