布鲁氏菌经血传播的潜在风险研究*

李美霖，李琳琳，王 侠，李天君，王 鹏，张会颖，张燕华△

(1.北京市通州区中心血站，北京 101100；2.河北省张家口市中心血站 075300；3.国家卫生健康委员会科学技术研究所，北京 101100)

布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患慢性传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病[1]。布鲁氏杆菌是革兰阴性兼性细胞内寄生细菌，可通过消化道、呼吸道和接触传播等多种途径侵入人体淋巴结并在其内寄生繁殖形成病灶，细胞破裂入血，经血播散，血液中的细菌留在淋巴结、肝、脾和骨髓等处，继而出现多发性病灶，常累及多个器官，病程较长，反复发作，不易愈合，严重者丧失劳动和生活能力[2-3]。近年来随着布鲁氏菌病的增多，出现多例输血传播感染布鲁氏菌病的病例[4]，使其成为输血传播疾病中一个潜在的危险源。北京献血者多为周边地区外来人口，山西、内蒙古、河北是我国布鲁氏菌病发病的重点疫区，密云、平谷、昌平、怀柔等区布鲁氏病感染率也呈增加趋势[5]。为调查北京部分地区健康献血人群布鲁氏菌病感染情况，了解布鲁氏菌病经血传播的潜在风险，本研究对2 657份健康献血者血液标本布鲁氏菌病感染情况进行了调查和分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1标本来源

选择2019年4-12月北京市通州区中心血站采集的大兴、平谷、顺义、通州、朝阳5个区2 657份健康献血者血液标本为研究对象，留取乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血浆1 mL，4 ℃保存后于第2天进行布鲁氏菌抗体检测。

1.1.2试剂与仪器

虎红平板试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)抗原、阴阳性对照血清(均由赛诺利康生物技术有限公司提供，所有试剂均在有效期内)，凝血酶时间(TT)测定试剂盒(上海太阳生物技术有限公司，批号121167)，人布鲁氏菌抗体IgG酶联免疫分析试剂盒(森贝伽生物科技有限公司，批号201810)，0.5%苯酚(西陇科学股份有限公司，批号190614)，0.9%生理盐水(石家庄四药有限公司，批号1905243201)。全自动酶标仪(奥地利，型号Zenyth340)，37 ℃恒温水浴箱(北京市医疗设备厂，型号BHW-Ⅳ)。

1.2 方法

1.2.1血清学检查

参照WS269-2007《布鲁氏菌病诊断标准》进行试验操作和结果判断。

1.2.2RBPT

检出的抗体是IgG类，RBPT必须使用人血清进行检测，为消除EDTA-K2抗凝剂对试验结果的干扰，参照文献[6]在血浆标本中1∶1加入TT测定试剂，(37±1)℃孵育1 h，待血浆凝固去除Fg后，用微量加样器枪头挤压凝块后3 000 r/min离心5 min，吸出上清液30 μL进行RBPT。结果判定：用“+”表示凝集程度，即++++、+++、++、+。

1.2.3SAT

主要用于检测布鲁氏菌IgM类抗体。效价：以产生50%凝集的(凝集程度++)血清最高稀释倍数为受检血清的效价；确认标准：≥1∶100(+++)为阳性，≥1∶50(++)为可疑。

1.2.4ELISA

RBPT和SAT两种方法阳性的标本采用双抗原夹心法测定标本中布鲁氏菌IgG抗体水平，严格按照试剂盒说明书操作，使用酶标仪在450 nm波长下测定光密度(A)值，通过标准曲线计算标本中人布鲁氏菌IgG抗体浓度。Cut-off值为0.990。正常人浓度为100～398 ng/L。

1.3 统计学处理

采用SPSS21.0软件进行数据分析，计数资料以频数或百分率表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 RBPT检测结果

RBPT阳性4例(0.15%)，凝集程度均为“++”。

2.2 SAT检测结果

SAT阳性标本中女性比男性多，牧区比其他地区多，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。SAT阳性4例(0.15%)，3例血清效价大于或等于1∶100(+++)，1例血清效价大于或等于1∶200(++++)，其中SAT及RBPT双阳2例。SAT另检出22例可疑标本，血清效价大于或等于1∶50(++)。

表1 26例SAT阳性及可疑标本献血者资料统计

续表1 26例SAT阳性及可疑标本献血者资料统计

2.3 ELISA检测结果

检测出阳性标本1例(0.04%)，A值为120.0，浓度为470.875 ng/L。标准品浓度及A值见表2，标准曲线见图1。

表2 标准品浓度及A值

图1 ELISA标准曲线

2.4 3种方法检出阳性标本结果比较

2 657份健康献血者血液标本中，RBPT检出IgG类抗体阳性4例，SAT检出IgM抗体阳性4例，其中IgM及IgG双阳2例，SAT效价均大于或等于1∶100(+++)。ELISA检测出IgG抗体阳性标本1例，浓度为470.875 ng/L，此例标本SAT效价大于或等于1∶200(++++)，RBPT结果为阴性，见表3。

表3 3种方法检出阳性标本结果比较

3 讨 论

布鲁氏菌病主要通过食用未经高温消毒的牛奶和奶制品的消费者传播，有研究报道高浓度布鲁氏菌感染菌血症具有较高的输血传播风险。1994-1995年墨西哥血站的18 490名献血者中，有317名(1.71%)布鲁氏菌阳性。ANTONIO等在1999年提出布鲁氏菌抗体阳性及无症状者均不应参加献血。2014年，MOHAMMED等[7]报道苏丹献血者中布鲁氏菌阳性占15.3%，而苏丹血液中心的献血者健康检查中并未包括布鲁氏杆菌感染的风险。美国食品药品监督管理局(FDA)为减低输血风险，强调应对潜在感染布鲁氏病者进行献血前健康征询。我国《献血者健康检查要求》(GB18467-2011)规定布鲁氏菌病病愈未满两年暂时不能献血，但尚未将布鲁氏菌检测列入献血者血液筛查项目。

自20世纪50年代中期以来，中国人布鲁氏菌病疫情经历了多次高低起伏，给国民健康带来了危害，而且影响畜牧业的发展。国内关于献血人群布鲁氏菌病筛查的报道较少，WANG等[8]对来自新疆喀什地区的3 896名献血者进行布鲁氏菌病筛查，RBPT检测出135例(3.5%)阳性标本，经PCR基因测序15例为确认阳性，同时对来自深圳地区的399名献血者进行布鲁氏菌病筛查，未筛查出阳性病例。本研究结果显示，北京部分地区健康献血者经献血前征询均无流行病史及临床表现，SAT阳性及可疑标本女性比例多于男性，牧区比例多于其他地区，差异有统计学意义(P<0.05)。在北京大兴、平谷、顺义、通州、朝阳5个区2 657份健康献血者血液标本中，RBPT检出IgG类抗体阳性4例，SAT检出IgM抗体阳性4例，其中IgM及IgG双阳性2例，SAT效价均大于或等于1∶100(+++)。ELISA检测出IgG抗体阳性标本1例，浓度为470.875 ng/L，此例标本SAT效价大于或等于1∶200(++++)，RBPT结果为阴性。本次血清学检测结果显示，IgM抗体阳性提示为急性感染期，IgG阳性者多提示慢性感染或既往感染，血液进行保密性弃血处理。由于布鲁氏菌病的发生、发展和转归比较复杂，临床表现多种多样，因此对人布鲁氏菌病的诊断还应结合患者流行病学接触史、临床表现和实验室检查。如果布鲁氏菌抗体阳性献血者隐瞒流行病史或临床表现不明显，很容易造成输血感染布鲁氏菌病的风险。

近年来，由于新发人畜共患病如疯牛病、寨卡病毒等出现人因输血感染的病例，世界卫生组织和FDA均制订了血液行业相关病毒检测法规和推荐意见。我国政府于2016年3月发布重新修订的《血站技术操作规程(2015版)》明确了国家和省级卫生计生行政部门规定的地方性、时限性输血相关传染病标志物可纳入血液检测的范围。目前，布鲁氏菌病已在我国25个省(直辖市)流行，在牧区尤为严重[9-11]。血清学诊断是布鲁氏菌病诊断最常用的手段，RBPT为初筛试验，阳性者采用SAT确诊[12-13]。本研究使用的3种方法检出率分别为0.15%、0.15%、0.04%。RBPT和SAT灵敏度相同，高于ELISA。RBPT和SAT操作简单，费用较少，但均为手工法，不适合献血人群大规模初筛。ELISA更符合采供血机构实际工作需要，但仍需综合采用多种检测方法对布病进行鉴定，这样才能提高诊断的准确性[14-15]。

综上所述，为降低输血性传播疾病的风险，应对潜在感染布鲁氏菌病的献血者进行严格的健康征询，并于布鲁氏菌病流行区域开展布鲁氏菌的血液筛查，对保障血液安全有重要意义。