组织miRNA指标在宫颈癌的表达情况及其与病理分型、组织分化的相关性研究*

刘 淼，乌兰娜，张晓晓，李瑞珍

(北京大学深圳医院妇科，广东深圳 518036)

宫颈癌作为女性发病率极高的一类恶性肿瘤，其导致的死亡患者数量较高，是临床中研究较多的一类生殖系统肿瘤。宫颈癌早期正确有效的诊治是预后改善的前提，因此找到对于宫颈癌诊断价值较高的指标，尤其是对于病理分型及组织分化等有较高反映意义的指标是临床研究的热点[1-2]。miRNA指标作为在恶性肿瘤中研究较多的内容，其在宫颈癌患者病灶组织中的表达多见，同时也是研究差异较大的方面，故认为更为全面的探究需求较高。miR-34a及miR-19a作为在宫颈癌患者中研究较多的miRNA指标，其与病理分型及组织分化的关系有待深入探究[3-5]。因此，本研究就组织miRNA指标在宫颈癌患者中的表达情况及其与病理分型、组织分化的相关性进行探究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月至2019年10月本院60例宫颈癌患者作为观察组，选取同时期60例健康同龄女性作为对照组。纳入标准：(1)年龄20岁及以上；(2)对研究知情同意；(3)临床资料完整。排除标准：(1)合并其他生殖系统疾病者；(2)合并代谢性疾病者；(3)合并多系统器官功能不全者；(4)合并神经系统疾病或损伤者。观察组年龄26～72岁，平均(43.9±6.0)岁，其中有生育史51例，无生育史9例；病理分型：鳞癌47例，腺癌13例；组织分化程度：高分化25例，中分化20例，低分化15例；国际妇产科联合会(FIGO)分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期18例，Ⅲ期18例，Ⅳ期12例。对照组年龄27～73岁，平均(43.6±6.1)岁，其中有生育史53例，无生育史7例。两组年龄与生育史比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理学委员会审批通过。

1.2 方法

取对照组健康宫颈组织及观察组宫颈癌标本，对采集的标本进行检测和RNA提取，使用TRIzol Reagent(Invitrogen)试剂，按照试剂说明书操作，采用逆转录(RT)-PCR法进行检测，参照TakaRa SYBR PrimeScript miRNA RT-PCR Kit说明书，将提取的RNA逆转录，由罗氏480Ⅱ荧光定量PCR仪完成。U6作为内参，每个样品设3个复孔，根据同一个标本的CT值(目标基因和内参基因)计算ΔCT值，miRNA相对表达水平采用2-ΔΔCT进行计算，统计及比较指标为组织miR-34a及miR-19a。上述检测均由经验丰富者进行操作检测，然后统计及比较两组miRNA指标(miR-34a及miR-19a)表达水平，同时比较观察组不同病理分型、组织分化程度及FIGO分期的检测结果。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 两组宫颈组织miRNA指标表达水平比较

观察组miR-34a表达明显低于对照组，miR-19a表达明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 两组宫颈组织miRNA指标表达水平比较

2.2 观察组不同病理分型的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

与鳞癌比较，腺癌miR-34a表达水平更低，miR-19a表达水平更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 观察组不同病理分型的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

2.3 观察组不同组织分化程度的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

与高分化比较，低分化miR-34a表达水平更低，miR-19a表达水平更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 观察组不同组织分化程度的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

2.4 观察组不同FIGO分期的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

与FIGO低分期比较，FIGO高分期miR-34a表达水平更低，miR-19a表达水平更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 观察组不同FIGO分期的宫颈组织miRNA指标表达水平比较

2.5 组织miRNA指标与宫颈癌病理分型、组织分化程度及FIGO分期的相关性分析

Pseron相关性分析显示，组织miR-34a及miR-19a均与病理分型明显相关(P<0.05)；Spearman秩相关分析显示，组织miR-34a与组织分化程度呈正相关，与FIGO分期呈负相关，组织miR-19a与组织分化程度呈负相关，与FIGO分期呈正相关(P<0.05)，见表5。

表5 组织miRNA指标与宫颈癌病理分型、组织分化程度及FIGO分期的相关性分析

3 讨 论

宫颈癌作为妇科最为常见的恶性肿瘤，是临床研究较多的一类疾病，早期正确诊治是改善预后及降低病死率的重要前提。临床中与恶性肿瘤相关的诊治研究多见，其中miR相关指标是研究较多且较热的一类指标[6-8]，较多相关指标在宫颈癌中的表达变化研究显示，其对于疾病的分期等多方面具有较高的反映价值。经证实，miR-34a及miR-19a在宫颈癌患者中的表达波动相对较大，其中较多研究认为miR-34a在下调细胞周期基因中具有较强的作用[9]，对于使肿瘤细胞停留于G0/G1期，抑制相关蛋白的表达，其在宫颈癌患者中的表达研究可见，多呈现降低的趋势[10-12]，但是其对于不同宫颈癌病理分型、组织分化程度及FIGO分期者中的具体表达变化研究不足，有待深入探究。miR-19a则对较多抑癌基因具有抑制作用，其可对胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)表达起到较大控制作用，因此其在肿瘤患者中多呈现高表达状态，表现为肿瘤细胞抑制作用的减弱，肿瘤细胞增殖情况增加，同时其对于Bcl-2具有较强的影响作用，因此在肿瘤患者中的监测意义较高[13-16]。另外，临床中关于宫颈癌患者miR-34a及miR-19a的细致变化研究存在一定差异[17-18]，故对其表达的细致作用及对病理分型、组织分化程度及FIGO分期的反映价值研究均极为必要。

本研究就组织miRNA指标在宫颈癌患者中的表达及与病理分型及组织分化的相关性进行探究，结果显示，宫颈癌患者的组织miR-34a表达明显低于健康者，组织miR-19a表达则明显高于健康者，说明其在宫颈癌患者中具有一定的价值。同时，研究显示，不同病理分型、组织分化程度及FIGO分期者的组织miR-34a及miR-19a表达差异明显，Pseron相关性分析显示，组织miR-34a及miR-19a均与病理分型明显相关(P<0.05)；Spearman秩相关分析显示，组织miR-34a与组织分化程度呈正相关，与FIGO分期呈负相关，组织miR-19a与组织分化程度呈负相关，与FIGO分期呈正相关(P<0.05)，因此肯定了组织miR-34a及miR-19a与宫颈癌患者病理分型、组织分化程度及FIGO分期的相关性，进一步提升了上述miR指标在宫颈癌中的检测意义。分析原因，miR-19a对于IGF2R抑癌活性发挥了减弱作用，因此肿瘤细胞活性增强，疾病进展加快，疾病状态相对较差，控制效果也即较差。miR-34a表达降低则导致肿瘤抑制作用减弱，肿瘤细胞集落及侵袭能力增强，因此认为其与宫颈癌的上述方面密切相关[19-21]。

综上所述，组织miRNA指标在宫颈癌患者中呈现异常表达的状态，且与病理分型及组织分化有密切的相关性，其在宫颈癌患者中的应用价值较高。