妊娠期糖尿病孕妇VEGF和SFRP⁃5与胰岛素抵抗的相关性分析

杨敏 杨艳 叶佳

若孕妇在妊娠前糖代谢正常，仅在妊娠期间才出现的空腹血糖、糖耐量的异常和糖尿病则称为妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus，GDM），妊娠期糖尿病患者若长期未予以控制或治疗将对母体及胎儿造成无法挽回的影响［1］。在妊娠早中期，随孕周数的增加，胎儿对营养物质的需求量不断增加，而其主要的能量来源就是通过胎盘从母体获取葡萄糖，此时孕妇血浆葡萄糖水平将随妊娠时间的延长而降低，致使孕妇空腹血糖降低约10%［2］。到达妊娠中晚期，孕妇体内胎盘分泌的抗胰岛素样物质将大量增加，导致降低孕妇对胰岛素的敏感性，从而使孕妇胰岛素分泌受限引起血糖升高，引发孕妇GDM 或加重其病情［3］。临床上认为，糖代谢异常是引起GDM 的主要病因之一，而胰岛细胞功能失常和胰岛素抵抗（Insulin Resistance，IR）与该疾病的发生有重要联系［4］。近年来有大量研究显示，孕妇体内的异常的脂肪因子表达也将引发妊娠期糖尿病的产生，其中分泌型卷曲相关蛋白5（Secretory Crimp⁃Associated Pro⁃tein 5，SFRP5）在GDM 的发病过程中具有重要作用［5］。而关于探讨GDM 孕妇孕期血清血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）水平变化的相关研究较少［6］。本研究通过分析本院确诊的妊娠期糖尿病孕妇孕期的VEGF、SFRP5 及IR 表达变化情况，探讨其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至10月于本院就诊的3 004例妊娠期妇女，经口服糖耐量（Oral glucose toler⁃ance test，OGTT）实验确诊妊娠期糖尿病孕妇279例，并作为研究组；再选取同时间段进行孕检，各项结果均正常的孕妇作为对照组。

纳入标准：①孕妇均否认孕前患有糖尿病，且无糖尿病家族史；②年龄处于20～34 岁间；③孕前体重指数（Body mass index，BMI）指数均小于24 kg/m2。排除标准：①合并有其他内科疾病或感染性疾病患者；②孕前就患有高血压、糖尿病、甲亢等慢性疾病或合并有其他系统疾病患者；③妊娠期间有激素等药物服用或治疗史；④临床资料不完整者。对照组和研究组年龄及孕周比较，差异无统计学意义（P＞0.05），研究组BMI 指数明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组孕妇一般资料情况比较（±s）Table 1 Comparison of general information between the 2 groups（±s）

表1 两组孕妇一般资料情况比较（±s）Table 1 Comparison of general information between the 2 groups（±s）

组别对照组研究组t 值P 值n 63 279--年龄（岁）28.48±7.18 28.03±7.27 0.446 0.657孕周（周）26.64±1.57 26.29±1.63 1.550 0.122 BMI（kg/m2）26.38±1.84 27.05±2.04 2.396＜0.05

1.2 仪器与试剂

全自动酶标仪（美国BIO⁃TEK）、酶联免疫吸附法试剂盒（南京建成生物工程研究所）、全自动生化分析仪（日立7170A）、全自动生化分析仪检测试剂盒（上海申能生物科技有限公司）、Trizol 试剂盒（上海名劲生物科技有限公司）。

1.3 检测方法

1.3.1 BMI 指数检测

对患者的身高、体重进行测量，并根据计算公式BMI=体重（kg）/［身高（m）］2计算出患者体重指数BMI。

1.3.2 VEGF、SFRP5 水平及SFRP5mRNA 检测

抽取所有孕妇5 mL 清晨空腹静脉血，肝素抗凝，离心后取上清置于⁃80℃超低温冰箱中待检。采用双抗夹心酶联免疫吸附法对已分离保存的孕妇血清VEGF、SFRP5 蛋白水平进行检测；患者分娩或剖宫产时取患者皮下脂肪组织，提取脂肪细胞，加入Trizol 试剂盒提取总RNA，RNA 浓度利用分光光度法进行测定以及凝胶电泳实验测定其完整性，测定完成后进行逆转录⁃聚合酶链反应，反应结束后取10 μL 予以电泳检测并对SFRP5 及内参条带灰度值进行分析。其中SFRP5mRNA 表达检测时条件为：反转录反应：37℃、15 min；反转录酶的失活、5 s；反应结束后：-20℃保存。并以机体脂肪、肌肉作模板，以⁃actin 为内参照物，予以RT⁃PCR检测，其上游引物序列：5′⁃CTGGGACAAGAAGAAT AA⁃3′；下游：5′⁃AAGAAAGGGTAGTAGGGGA⁃3′。⁃actin 上游引物序列：5′⁃CCCTGAACCCTAAGGC⁃CAACCGTGAAAA⁃3′；下游：5′⁃TCTCCGGAGTC⁃CATCACAATGCCTGTG⁃3′。

1.3.3 胰岛素抵抗指数（Homeostatic Model As⁃sessment for Insulin Resistance，HOMA⁃IR）检测

采用化学发光免疫分析法对空腹胰岛素水平进行测定，使用日立7170A 型全自动生化分析仪并采用上海申能生物科技有限公司生产的试剂盒对患者空腹血糖（Fasting plasma glucose，FPG）进行测定。并根据公式（胰岛素×FPG）/22.5 对患者胰岛素抵抗指数（HOMA⁃IR）进行计算。

1.4 观察指标

①对比两组孕妇血清VEGF蛋白、SFRP5蛋白及SFRP5mRNA 水平情况；②对比两组孕妇胰岛素抵抗相关指数（FPG、空腹胰岛素、HOMA⁃IR）情况；③结合两组各指标表达情况，对比分析妊娠期糖尿病孕妇孕期血清VEGF 和SFRP5 的表达与IR的相关性。

1.5 统计学方法

应用SPSS 18.0 软件进行数据分析。计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验，运用Spearman进行相关分析，以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇血清VEGF、SFRP5 水平情况比较

对照组VEGF 水平显著低于研究组，血清SFRP5 蛋白、SFRP5mRNA 水平表达，显著高于对研究组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组孕妇血清VEGF、SFRP5 水平情况比较（±s）Table 2 Comparison of serum VEGF and SFRP5 levels between the 2 groups（±s）

组别对照组研究组t 值P 值n 63 279--VEGF（ng/L）45.28±4.61 90.54±6.44 52.785＜0.001 SFRP5（pg/mL）14.41±1.30 10.75±0.52 36.066＜0.001 SFRP5 mRNA 0.25±0.05 0.20±0.03 10.383＜0.001

2.2 对比两组孕妇胰岛素抵抗相关指数情况

对照组FPG、空腹胰岛素、HOMA⁃IR 等指标水平含量均明显低于研究组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组孕妇胰岛素抵抗情况比较（±s）Table 3 Comparison of insulin resistance between the 2 groups（±s）

表3 两组孕妇胰岛素抵抗情况比较（±s）Table 3 Comparison of insulin resistance between the 2 groups（±s）

组别对照组研究组t 值P 值n 63 279 FPG 4.19±0.52 5.80±0.93 13.270＜0.001空腹胰岛素（mmol/L）3.73±0.42 5.67±0.38 35.882＜0.001 HOMA⁃IR（mmol/L）0.83±0.19 1.57±0.23 23.764＜0.001

2.3 妊娠期糖尿病孕妇孕期血清VEGF 和SFRP5的表达与IR 的相关性分析

经Spearman 相关分析，妊娠期糖尿病孕妇的BMI 指数与VEGF、SFRP5 的表达无关，FPG、空腹胰岛素、HOMA⁃IR 与VEGF 的表达呈正相关，FPG、空腹胰岛素、HOMA⁃IR 与SFRP5 的表达呈负相关关系，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 妊娠期糖尿病孕妇孕期血清VEGF 和SFRP⁃5 的表达与IR 的相关性分析Table 4 Correlation between expression of VEGF and SFRP⁃5 and IR in pregnant women with gestational diabetes mellitus

3 讨论

随着我国生活水平的不断上升，人们的生活条件也不断提高，而大部分女性处于孕期时均认为多吃富含营养的食物对胎儿发育有好处，缺失了食物的均衡调配，从而导致妊娠期糖尿病的发生，目前我国孕妇妊娠糖尿病的患病几率正逐年上升［7］。

妊娠可使无糖尿病的孕妇发生GDM，也使原有糖尿病前期患者的病情加重［8］。有相关研究显示，孕妇长期处于高血糖状态可使胚胎发育产生异常甚至死亡，据调查，高血糖所致的流产发生率高达15%～30%［9］。同时也有学者认为，由于妊娠期糖尿病孕妇存在严重的胰岛素抵抗和高胰岛素血症等情况将加倍诱导患者并发妊娠期高血压疾病、妊娠期感染、巨大儿等严重后果，且对胎儿及胎儿出生后的都影响深远［10⁃11］。

目前对于妊娠期糖尿病的发病机制及原因仍存在争议，但大部分学者均认为该疾病与孕妇的胰岛素抵抗具有重要联系［12］。由于胰岛素可促进人体脂类、蛋白质、糖类的代谢，而妊娠期孕妇由于雌激素分泌增加将导致胰岛素的敏感性降低从而引起胰岛素抵抗［13］。而妊娠期糖尿病孕妇的糖耐量的失衡将增加胰岛素抵抗作用［14］。在本研究中也发现，较体检正常的孕妇来说，妊娠期糖尿病孕妇的FPG、空腹胰岛素、HOMA⁃IR 等指标水平均明显偏高，这也进一步验证了上述说法，说明了患有妊娠期糖尿病的孕妇与健康孕妇相比具有更严重的胰岛素抵抗现象。

妊娠期孕妇的体重均会随孕期的延长而增加，脂肪也一样。而有大量医学研究发现，脂肪组织中存在大量的可调节人体器官活动的脂肪因子，其中SFRP5 就是众多脂肪因子中的一种，对机体糖、脂的代谢以及胰岛素抵抗具有重要意义［15⁃16］。有小鼠实验发现，将SFRP5 注入小鼠体内将加速小鼠脂肪的氧化及葡萄糖的摄取，从而改善胰岛素的敏感程度［17］。而VEGF 是一种促进血管内皮细胞的增殖和迁移的促血管生长因子，对妊娠期胎盘血管的形成具有重要意义，若机体处于缺血、缺氧以及炎症反应时将大量分泌［18］。本研究中，妊娠期糖尿病的孕妇VEGF 水平远远高于健康孕妇，而SFRP5 水平偏低，这进一步证明了VEGF、SFRP5 的表达与妊娠期胰岛素抵抗作用有紧密联系。

综上所述，妊娠期糖尿病孕妇孕期的血清VEGF 和SFRP5 蛋白表达及与IR 具有相关性，可能是孕妇的VEGF 的升高和SFRP5 的降低加强了对胰岛素的抵抗作用。可根据孕妇血清VEGF、SFRP5 的水平对孕妇的胰岛素抵抗情况进行评估，临床上将其作为妊娠期糖尿病孕妇的预防及诊断的重要依据。