老年高血压病人血浆蛋白Z水平变化及蛋白Z内含子FG79A基因多态性的临床意义

王 霞，代红伟，徐 丹

高血压是老年人群的常见症状之一，我国老年高血压发病率高达50%左右[1]。早期研究认为，高血压是人体老龄化的生理现象，但随着研究深入，临床发现老年高血压严重影响病人生活质量，而积极地治疗可降低心血管事件发生率[2]。因此，分析老年高血压发病机制并积极介入治疗极其必要。血浆蛋白Z是抗凝血辅因子的一种，其基因具有14个单核苷酸基因多态性，有研究发现，这些基因位点突变与多种心血管事件密切相关[3]。本研究探讨老年高血压病人血浆蛋白Z水平变化及蛋白Z内含子FG79A基因多态性的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月—2019年1月在我院治疗的老年高血压病人220例作为观察组，其中高血压1级65例，高血压2级110例，高血压3级45例。纳入标准：符合世界卫生组织制定的原发性高血压诊断标准；年龄≥60岁，汉族；病人及家属知情同意。排除标准：合并恶性肿瘤、肝肾功能障碍、甲状腺疾病、自身免疫性疾病等其他基础性疾病；近3个月内有出血史或手术史。选取同期健康体检者220名作为对照组，两组年龄和性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 两组年龄和性别比较

1.2 实验方法 抽取两组研究对象静脉血5mL，采用Promega 全血DNA提取试剂盒进行DNA提取，之后选用赛默飞世尔科技ABI Veriti 梯度PCR仪进行扩增，反应体系：1 μL dNTP，2 μL 10×buffer，0.5 μL Taq酶，1 μL上下游引物(引物由上海桑尼生物科技有限公司提供)，2 μL DNA模板，12 μL 去离子水。反应条件：94 ℃，3 min；94 ℃，30 s；58 ℃，30 s；70 ℃，30 s；共32个循环，70 ℃，延伸5 min，采用2%琼脂糖凝胶电泳PCR产物，之后进行酶切反应。体系如下：10 μL PCR产物，2 μL 10×buffer Tango，7 μL ddH2O，1 μL KspAI酶，将样本置于37 ℃条件下水浴过夜，之后采用EB进行染色并电泳，采用英国马尔文凝胶成像仪读取结果。采用酶联免疫吸附法测定两组研究对象血浆蛋白Z表达水平，试剂盒由法国Stago公司生产。相关操作参照说明书进行。

2 结 果

2.1 蛋白Z内含子FG79A基因型 经KspA1酶酶切结果显示：蛋白Z内含子FG79A基因型包括GG、GA、AA 3种基因型。详见图1。

图1 蛋白Z内含子FG79A位点酶切结果电泳图(M为Marker；1和4为GG型，2为GA型，3为AA型)

2.2 观察组和对照组蛋白Z内含子FG79A基因型及等位基因比较 观察组和对照组蛋白Z内含子FG79A基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05)；观察组和对照组蛋白Z内含子FG79A基因型和等位基因分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表2 两组蛋白Z内含子FG79A基因型及等位基因比较 单位：例(%)

2.3 观察组不同高血压分级病人性别、年龄、基因型比较 观察组不同高血压分级病人性别、年龄、蛋白Z内含子FG79A基因型分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 观察组不同高血压分级病人性别、年龄、基因型比较

2.4 两组血浆蛋白Z水平比较 观察组血浆蛋白Z高于对照组(P<0.01)。详见表4。

表4 两组血浆蛋白Z水平比较(±s) 单位：g/L

2.5 观察组不同高血压分级病人血浆蛋白Z水平比较 高血压分级越高病人血浆蛋白Z水平越高，其中高血压分级3级病人血浆蛋白Z高于高血压1级和2级病人(P<0.05)。详见表5。

表5 观察组不同高血压分级病人血浆蛋白Z水平比较(±s) 单位：g/L

2.6 观察组不同基因型病人血浆蛋白Z水平比较 观察组血浆蛋白Z内含子FG79A不同基因型病人血浆蛋白Z水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表6。

表6 观察组不同基因型病人血浆蛋白Z水平比较(±s) 单位：g/L

3 讨 论

目前临床未明确老年高血压发病机制，相关研究认为，动脉壁内膜、中层变厚，脂质、钙盐沉积，凝血因素及遗传等因素与疾病发生密切相关[4]。蛋白Z是肝脏合成的一种单链糖蛋白，是参与凝血、抗凝的重要因子。蛋白Z基因位于人体染色体13q34，有8个内含子和9个外显子[5]。有研究发现，蛋白Z基因启动子A-13G及内含子FG79A基因多态性与缺血性脑卒中密切相关，且蛋白Z基因FG79A基因具有保护缺血性脑卒中的作用，其机制可能与FG79A等位基因突变导致蛋白Z水平降低有关[6]。相关研究发现，蛋白Z基因FG79A位点频率与蛋白Z蛋白水平降低有关[7]。关于蛋白Z基因FG79A位点多态性与老年高血压之间关系的临床研究较少。

本研究结果发现，观察组和对照组蛋白Z内含子FG79A基因型和等位基因比较，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组不同高血压分级病人蛋白Z内含子FG79A基因型分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明老年高血压病人蛋白Z内含子FG79A基因型和等位基因与健康人群相似，提示蛋白Z内含子FG79A基因型和等位基因与老年高血压关系不显著。有研究发现，高血压病人蛋白Z内含子FG79A基因多态性与健康对照组相似，蛋白Z内含子FG79A基因多态性与高血压无关[8]，与本研究结果一致，提示可从其他基因多态性探讨高血压病机。相关研究发现，不同人种蛋白Z内含子FG79A基因型分布比例不同，欧洲人种蛋白Z内含子FG79A基因G→A突变比例低于汉族人种，表明不同种族蛋白Z基因多态性不同，对某些疾病的易感性可能不一样[9]。

蛋白Z可诱导凝血酶与凝血因子Ⅹ结合并参与止血，促使蛋白Z依赖性蛋白酶抑制物抑制凝血因子Ⅹa活性[10-11]。机体蛋白Z表达不足，减弱蛋白Z对多种凝血因子抑制效应，病人血液处于高凝状态，最终出现动脉粥样硬化、高血压等心脑血管疾病[12]。本研究结果显示，观察组血浆蛋白Z表达水平高于对照组，且高血压分级越高的病人血浆蛋白Z水平越高，表明老年高血压病人存在蛋白Z水平应激性高表达，对病人血液高凝状态调节具有重要意义。蛋白Z高表达对维持机体抗凝平衡具有重要作用，较多研究认为，蛋白Z高表达是心脑血管缺血性疾病的独立危险因素[13-14]。有研究发现，虽然高血压人群蛋白Z表达水平升高，若病人曾发生心肌梗死或脑梗死，蛋白Z表达水平大幅下降，且低于健康人群，分析原因可能为该类病人血浆含有大量炎性因子，而炎性因子具有促蛋白Z低表达的作用[15]。本研究结果发现，观察组蛋白Z内含子FG79A不同基因型病人血浆蛋白Z水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明蛋白Z内含子FG79A基因多态性与血浆蛋白Z表达水平无关，分析心肌梗死或脑梗死病人蛋白Z低表达可能与自身消耗有关。

本研究亚组分析结果显示，血浆蛋白Z水平高表达是老年高血压的影响因素，但与蛋白Z内含子FG79A基因多态性无关，同时蛋白Z内含子FG79A基因多态性与老年高血压无关。蛋白Z基因是以多态性还是联合其他因子参与高血压尚无结论，有待进一步研究。综上所述，蛋白Z内含子FG79A基因多态性与老年高血压疾病进展无关，而血浆蛋白Z水平在老年高血压发病过程中可能发挥一定的作用。