脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6表达及临床意义

杜秀民，陈 卫

脑梗死是临床常见的、一种由于脑动脉粥样硬化引起的脑血管性疾病，病人常有言语不清、眼歪口斜、上下肢麻木无力等临床表现[1]。近年来脑梗死研究取得了较大进步，但急性发作期仍有死亡的危险。因此，寻求新型危险标志物有助于鉴别诊断及诊断脑梗死并提供个性化治疗，并为揭示脑梗死的发病机制提供理论基础。动脉粥样硬化是脑梗死的发病机制之一，斑块生长过程中常伴随新生血管生成，且新生血管具有渗透性高、脆弱等特性，炎性因子易侵袭加重斑块炎性反应。血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)属于免疫球蛋白超家族，主要表达于血管内皮细胞，参与炎症反应、免疫应答[2]，推测其可能在脑梗死进程中发挥作用。有研究发现，肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)在调控细胞分化、细胞功能等方面发挥重要作用，且TRAF6与下游分子在细胞内作用后引起核因子(NF)-κB活化进而诱导免疫与炎症反应[3-4]。目前，关于VCAM-1、TRAF6在脑梗死中的作用报道较少，本研究分析脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6表达水平，探讨二者对脑梗死发病的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年6月—2019年6月我院收治的脑梗死病人94例为脑梗死组，根据卒中量表(CCS)对神经功能缺损进行评分，CCS评分0～15分为轻度组(29例)，CCS评分16～30分为中度组(34例)，CCS评分31～45分为重度组(31例)。参照全国第4次脑血管病学术会议修订的诊断标准，脑梗死诊断标准：安静状态下发病；多数病人无明显呕吐和头痛；发病较缓慢，呈逐渐发展或阶段性进行，多与脑动脉粥样硬化有关，也可见于动脉炎、血液病等；病人在发病1～2周内意识清楚或轻度障碍；存在颈内动脉系统和椎基底动脉系统症状和体征；腰椎穿刺脑脊液一般不含血；CT、MRI或血管造影检查可见脑梗死栓塞部位[5]。纳入标准：确诊为脑梗死病人；年龄50～80岁；病程<48 h；同意参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：合并心、肝、肾等脏器疾病；合并恶性肿瘤；合并甲状腺功能异常；合并自身免疫性疾病；近1个月内服用过维生素、叶酸、他汀类药物及抗癫痫类药物。另选取同期的体检健康者89名为对照组。本研究经医院道德伦理委员会批准通过，且取得病人及家属知情同意并签字，符合世界医学协会《赫尔辛基宣言》。

1.2 主要试剂与仪器 人血管内皮细胞黏附分子1(sVCAM-1/CD106)酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(货号：EK-H11897)购自上海酶研生物科技有限公司；人TRAF6 ELISA试剂盒(货号：BH7679)购自上海博耀生物科技有限公司；酶标仪(型号：MODEL550)购自美国Bio-Rad公司。

1.3 研究方法

1.3.1 样品采集及保存 采集所有研究对象晨起空腹外周静脉血5 mL，以4 000 r/min离心10 min，取上层血清置入EP管中，置于-20 ℃冰箱中备用。

1.3.2 血清VCAM-1、TRAF6水平 采用ELISA法检测各组研究对象血清VCAM-1、TRAF6水平，检测步骤严格按试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 对照组和脑梗死组一般资料比较 脑梗死组与对照组性别、年龄、身高及体质指数比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 对照组和脑梗死组一般资料比较

2.2 对照组和脑梗死组血清VCAM-1、TRAF6水平比较 与对照组比较，脑梗死组血清VCAM-1、TRAF6水平均升高，差异有统计学意义(P<0.01)。详见表2。

表2 对照组和脑梗死组血清VCAM-1、TRAF6水平比较(±s) 单位：μg/mL

2.3 轻度组、中度组、重度组脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平比较 重度组脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平高于中度组和轻度组，差异有统计学意义(P<0.05)；中度组脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6水平高于轻度组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 轻度组、中度组、重度组血清VCAM-1、TRAF6水平比较(±s) 单位：μg/mL

2.4 血清VCAM-1、TRAF6水平预测脑梗死的临床价值 ROC曲线分析结果显示：血清VCAM-1水平预测

脑梗死临床价值的曲线下面积(area under curve，AUC)为0.834[95%CI(0.774，0.893)]，截断值为13.439 μg/mL，灵敏度为67.0%，特异度为89.9%；血清TRAF6水平预测脑梗死临床价值的AUC为0.862[95%CI(0.802，0.921)]，截断值为4.060 μg/mL，灵敏度为71.3%，特异度为98.9%。详见图1。

图1 血清VCAM-1、TRAF6预测脑梗死的ROC曲线图

2.5 血清VCAM-1联合TRAF6预测脑梗死的临床价值 ROC曲线分析结果显示：血清VCAM-1与TRAF6联合诊断脑梗死的AUC为0.906[95%CI(0.859，0.953)]，灵敏度85.1%，特异度为91.0%，联合截断值有待进一步研究。详见图2。

图2 血清VCAM-1联合TRAF6预测脑梗死的ROC曲线图

3 讨 论

脑动脉主干或皮质主动脉粥样硬化导致血管增厚、管腔狭窄闭塞和微血栓形成，从而诱发脑梗死[6]。脑梗死是多种因素共同作用的结果，多数表现为四肢无力、头晕、头痛等[7]。

VCAM-1是位于细胞膜上的糖蛋白，又称CD106，受致炎因子刺激其表达量增加，可介导淋巴细胞、单核细胞与内皮细胞黏附，在炎症反应、细胞分化、动脉粥样硬化等多种疾病中发挥重要作用[8]。有研究表明，VCAM-1可能通过与单核细胞、淋巴细胞等炎性细胞的配体VLA-4结合，从而介导炎性细胞黏附，引发炎症反应，促进动脉粥样硬化形成[9]。王爱岳[9]研究发现，缺血性脑卒中病人外周血VCAM-1水平明显高于健康对照组，VCAM-1水平与缺血性脑卒中进展密切相关。曹晓雨等[10]研究发现，缺血性脑卒中组sVCAM-1水平高于非缺血性脑卒中组，sVCAM-1单独预测短暂性脑缺血发作后短期发生缺血性脑卒中的AUC为0.875，截断值为682.7 μmol/L，灵敏度、特异度分别为84.0%、87.3%，表明缺血性脑卒中病人外周血sVCAM-1高表达，且具有较好的诊断价值。吴岩等[11]研究发现，脑梗死病人发病24 h时外周血sVCAM-1水平明显高于健康对照组。本研究结果与吴岩等[11]研究结果一致，脑梗死组病人血清VCAM-1水平显著高于对照组，重度组脑梗死病人血清VCAM-1水平高于中度组和轻度组，中度组脑梗死病人血清VCAM-1水平高于轻度组，表明脑梗死病人血清VCAM-1呈高表达，且疾病越严重其表达量越高，提示VCAM-1可能在脑梗死发生、发展中发挥重要作用。进一步分析发现，血清VCAM-1水平预测脑梗死的诊断价值AUC为0.834，截断值为13.439 μg/mL，灵敏度、特异度分别为67.0%、89.9%，提示血清VCAM-1水平对预测脑梗死有一定的诊断价值。

TRAF6是1996年Ishida等[12]研究CD40信号转导时发现，由530个氨基酸组成。有研究表明，TRAF6作为TNFR超家族、白细胞介素-1受体/Toll样受体(interleukin-1 receptor/toll like receptor，IL-1R/TLR)超家族的信号通路转导蛋白，参与多条炎症反应和凋亡信号通路[13]。TRAF6参与多种肿瘤及恶性疾病的发生。章国良等[14]研究发现，胃癌病人血清TRAF6蛋白的相对表达量高于腹腔良性疾病病人。姜华[15]研究发现，与对照组兔相比，动脉粥样硬化模型组兔血清TLR4、TRAF6水平升高，使用血府逐瘀汤含药干预后可显著抑制血清TLR4、TRAF6蛋白表达，改善损伤程度，提示抑制Toll样受体4及TRAF6表达，可能减轻动脉粥样硬化损伤。袁平等[16]研究发现，与假手术组大鼠相比，缺血组和缺血再灌注组TRAF6表达明显升高，大鼠缺血再灌注损伤时TRAF6可能参与脑细胞死亡。本研究结果显示，脑梗死组病人血清TRAF6水平较对照组升高；轻度组、中度组、重度组脑梗死病人血清TRAF6水平逐渐升高。提示脑梗死病人血清TRAF6呈高表达，与脑梗死严重程度有关，提示TRAF6可能参与脑梗死发生。本研究结果发现，血清TRAF6水平预测脑梗死诊断的AUC为0.862，截断值为4.060 μg/mL，灵敏度、特异度分别为71.3%、98.9%，提示血清TRAF6水平对预测脑梗死有一定的诊断价值。本研究进一步分析发现，VCAM-1、TRAF6二者联合对脑梗死诊断的AUC为0.906，灵敏度、特异度分别为85.1%、91.0%，提示二者联合较单独预测有较高的诊断价值。

综上所述，脑梗死病人血清VCAM-1、TRAF6呈高表达，可能参与脑梗死疾病发展过程，二者联合对脑梗死有一定的诊断价值，可能成为预测脑梗死的重要指标。由于本研究样本量有限，今后将扩大样本量进行深入研究。