涂永丽,谭书明,周宏炫,罗继伟
(贵州大学酿酒与食品工程学院,贵州贵阳 550025)
消化不良主要是由消化功能絮乱所引起的胃部及肠道不适应的系统性疾病。发病率约为11%~29.2%[1]。我国约占内科门诊11.5%,占消化科门诊约52.85%[2]。这类消化疾病时间长,会给患者身体身心健康造成严重的影响,且带来了昂贵的医药费用[3,4]。目前临床上主要使用合成药,在消化疾病患者的初步阶段治疗效果较好,但对长期治疗效果却不理想[5]。因此,从天然植物中探索副作用小促消化功能的食品原材料具有较高的市场前景和社会价值。
刺梨(Rose roxburghii Tratt)又名送春归、团糖二等,蔷薇科多年生灌木[6]。目前主要分布在中国西南地区,尤其在贵州龙里、盘州等地[7]。其营养成分丰富,具有滋补开胃健脾的功效[8]。此外,刺梨果实中具有SOD、有机酸、黄酮、多糖、多酚、微量元素及人体所需的氨基酸物质等[9-13]。现代药理学研究,刺梨可以调节机体免疫力和延缓衰老、降血糖、降血脂、解酒、健胃消食等功效[14-18]。刺梨是贵州省特有的经济水果植物,具有明显且重要的营养价值、药用价值、保健价值;为打造现代高效农业、实现精准扶贫和改善生态环境的重点发展品种;并逐步推出大力发展刺梨药膳保健品和刺梨保健饮料[19]。目前产品多为刺梨冻干粉胶囊[20]、复合果酒[21]、果脯[22]、刺梨糕[23]、含片[24]。刺梨口服液也是研究的热点之一,刺梨可以增强胃肠蠕动,使胆汁、胰液流量增加,促进消化的作用[25],经由体外模拟刺梨消化,得出胃蛋白酶、胰酶能增进消化及抗氧化活性[26];陈皮具有理气健脾作用,挥发油能促进胃液分泌,有助于消化[27];茯苓具有利水渗湿健脾,多糖可以促进胃排空和小肠推进的作用[28]。但刺梨口服液促消化的研究报道罕见,所以本研究通过小鼠的动物实验,探讨实验室自制的经科学配方的口服液促消化作用,为研究促消化功能性食品提供理论基础,促进我省刺梨产业及产品提供一定的理论依据。
刺梨原汁:贵州省贵阳市龙里县工业园区;陈皮、茯苓,购于贵州省花溪医药;羧甲基纤维素、奶粉、糖、淀粉、活性炭:阿拉丁试剂(上海)有限公司;复方地酚诺酯片:江苏常州康普药业有限公司;多藩立酮:西安杨森制药有限公司;胃动素(motilin,MTL)、胃泌素(gastrin,GAS)试剂盒:上海桥杜生物科技有限公司。
SP小鼠:18~22 g的KM种雄性小鼠(SCXK(湘)2019-0014):湖南省长沙市天勤生物技术有限公司。
HH-S6型电热恒温水浴锅,北京科伟永兴仪器有限公司;R-201型旋转蒸发仪,上海申胜生物技术有限公司;FA2004电子分析天平,天马衡基(天津)有限公司;LD-Y300A型高压万能粉碎机,上海顶帅电器有限公司;H1-16KR型高速冷冻离心机,湖南可成仪器设备有限公司;SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵,郑州世纪双科实验仪器有限公司。
1.3.1 样品的配制
刺梨口服液:将原材料陈皮、茯苓采用高速万能粉碎机进行粉碎,过 80目筛得粉,75%乙醇料水比1:20浸泡30 min,50 ℃水浴提取30 min,60 ℃旋转蒸发得滤液,于4 ℃冰箱冻存备用。
复方地芬诺酯:取复方地酚诺酯片0.05 g,用研钵研碎呈粉末后加水至 0.1 L,配制成浓度为 0.5 mg/mL的混悬液,当天配制。
碳末半固体糊:5 g羧甲基纤维素,8 g奶粉,4 g糖,4 g淀粉,1 g活性炭加120 mL水,配成150 mL约150 g糊状物。
多藩立酮:用研钵研磨成细粉,用水制成 0.136 g/mL的混悬液,当天配制。
1.3.2 动物分组及喂养
将小鼠造模15 d之后,分成5组(n=10),分别为正常组、模型组、阳性组、刺梨口服液低剂量、刺梨口服液高剂量每天分别为0.3、1.2 g/kg。每天称取小鼠饮食量,5 d称一次体重,实验结束,摘小鼠眼球取血,检测血清MTL,GAS含量,解剖取胃,称重,测定小肠的运动评价其促胃肠动力的作用。
表1 各组小鼠的分组及喂养Table 1 Grouping and feeding of mice in each group
1.4.1 小鼠饮食量的测定
在小鼠造模前15 d及给药后15 d,7 d称取体重一次,并算出各组小鼠的饮食量。
1.4.2 小鼠体质量的测定
在小鼠造模前15 d及给药后15 d,每5 d称取体重一次,并算出各组小鼠的体质量。
1.4.3 胃残留率的测定
小鼠末次给药,禁食不禁水20 h,碳末半固体糊每只0.5 g,30 min之后,解剖小鼠并结扎胃贲门和幽门,取胃,用滤纸擦干后称全重,之后用剪刀沿胃大弯剪开胃体,用生理盐水冲洗干净胃内容物后擦干,称胃的净重,计算胃内容物残留率。
胃内容物残留率/%=[(胃全重-胃净重)/固体糊状物重]×100%
1.4.4 小肠运动的测定
小鼠末次给药,禁食不禁水20 h,碳末半固体糊每只0.5 g,30 min之后,解剖小鼠取胃部幽门切迹至回盲部,拿出完整小肠,并平放在解剖台上,量取幽门切迹至炭糊最前端的间距和幽门至回盲部全长,计算小肠推动率。
小肠推进率/%=(炭糊移动距离/幽盲全长)×100%
1.4.5 小鼠血清MTL的测定
血清按照ELISA试剂盒说明操作,测定MTL的含量。
1.4.6 小鼠血清GAS的测定
血清按照ELISA试剂盒说明操作,测定GAS的含量。
所有数据采用 SPSS 21.0软件进行方差分析,p<0.05或p<0.01为具有统计学意义。
图1 刺梨口服液对小鼠饮食量的影响Fig.1 Effect of Rose roxburghii Tratt oral liquid on the diet of mice (S±, n=10)
消化不良导致食欲减退、摄食量明显减少,由此导致体重减轻、食物利用率下降;反之,消化功能越好则摄食量、体重增重越大、食物利用率越高[29]。刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠的饮食量如图1所示,造模至15 d时,NC小鼠饮食量一直呈现上升趋势,与NC相比,其余的造模小鼠的饮食量表现下降,具有统计学意义(p<0.01)。给药至30 d时,与MC相比,PC,DF,HF的小鼠饮食量均有上升,具有显著性差异(p<0.05),分别上升了10.00%、4.42%、10.38%,HF与PC相比,差异不显著(p>0.05),DF与HF相比,HF具备显著性(p<0.05),表明DF,HF对模型小鼠的饮食量具有促进作用。
刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠的体重如2图所示,造模至15 d时,NC小鼠体质量一直呈现上长趋势,与NC相比,其余的造模小鼠的体重表现增长缓慢,具有统计学意义(p<0.01)。给药至 30 d时,与MC相比,PC,DF,HF的小鼠体质量均有上升,具有显著性差异(p<0.05),分别上升了9.77%、5.87%、7.08%,HF与 PC相比,差异不显著(p>0.05),DF与HF相比,HF具备显著性(p<0.05),表明DF,HF对模型小鼠的体质量具有增进作用。
图2 刺梨口服液对小鼠体质量的影响Fig.2 Effects of Rose roxburghii Tratt oral liquid on body mass in mice (S±, n=10)
图3 刺梨口服液对小鼠胃残留率的影响Fig.3 Effect of Rose roxburghii Tratt oral liquid on gastric residual rate in mice (S±, n=10)
刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠的胃残留率如 3图所示,给药至30 d时,与NC相比,MC的胃残留率上升了54.03%,具有显著性差异(p<0.05),与MC相比,PC、DF、HF的小鼠胃残留率均有降低,具备显著性差异(p<0.05),分别下降了38.14%、45.15%、36.90%,HF与PC相比,差异不显著(p>0.05),DF与HF相比,HF具备显著性(p<0.05),表明DF,HF对模型小鼠的胃残留率具备降低作用。龚彦溶[30]等研究陈皮、枳壳降低小鼠的胃残留率分别为 26.84%和14.30%。
消化不良主要与小肠的蠕动有关[31]。复方地芬诺酯是一种治疗功能性腹泻的药物,配以抗胆碱药阿托品,协同加强对肠管蠕动的抑制,采用其诱导小鼠模型已经成为检验促消化效果试验方法[32]。刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠的小肠运动如4图所示,给药至30 d时,与NC相比,MC的小肠运动率下降了13.43%,具有显著性差异(p<0.05),与MC相比,PC,DF,HF的小鼠小肠运动率均有提高,具有显著性差异(p<0.05),分别提高了 46.44%、39.28%、45.11%,HF与PC相比,差异不显著(p>0.05),DF与HF相比,HF具备显著性(p<0.05)表明DF,HF对模型小鼠的小肠运动率具有推动作用。王振奋等[33]研究得出20 mg/kg、40 mg/kg厚朴酚组的小肠推进率明显提高(p>0.05);储春霞等[34]证明了辣木茎木质部和韧皮部水相部位具有明显促进小鼠小肠运动的作用,小肠推进率分别达到 48.89%和49.69%,具有良好的促进作用。
图4 刺梨口服液对小鼠小肠运动的影响Fig.4 Effect of Rose roxburghii Tratt oral liquid on small intestine movement in mice (S±, n=10)
MTL于兴奋型胃肠激素与特异性受体结合后,在消化期Ⅲ相时可提高胃肠道平滑肌、胆道以及小肠的收缩力,促进胃排空[35]。刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠实验结束时,测定各组小鼠血清 MTL含量结果如5图所示,与NC相比,MC的MTL含量减少了31.95%,具有显著性差异(p<0.05),与 MC相比,PC,DF,HF的小鼠MTL含量均有提升,具备显著性差异(p<0.05),分别提高了 41.48%、35.94%、39.05%,HF与PC相比,差异不明显(p>0.05),DF与HF相比,HF具备显著性(p<0.05),表明DF,HF对模型小鼠的MTL含量具有提高作用。郭军鹏等[36]等研究得出黄芪组、党参组小鼠血清胃动素(MTL)水平明显增加(p<0.05);吴洋等[37]得出胃元宁高、中剂量组对小鼠血清中 MTL含量均显著高于模型组,增进56.48%、51.24%(p<0.05,p<0.01)。
图5 刺梨口服液对小鼠血清MTL的影响Fig.5 Effect of Rose roxburghii Tratt liquid on serum MTL in mice (S±, n=10)
图6 刺梨口服液对小鼠血清GAS的影响Fig.6 Effects of Rose roxburghii Tratt oral liquid on serum GAS in mice (S±, n=10)
GAS是最重要的胃肠激素,由胃窦产生,并在胃中的肽和氨基酸的刺激下释放出来,增强小肠和结肠的蠕动而改善胃肠的消化功能[38]。刺梨口服液不同剂量组灌胃小鼠实验结束时,测定各组小鼠血清 GAS含量结果如6图所示,与NC相比,MC的GAS含量减少了 24.30%,具有显著性差异(p<0.05),与 MC相比,PC、DF、HF的小鼠GAS含量均有提高,具备显著性差异(p<0.05),分别提高了38.22%、32.14%、38.45%,HF与PC相比,差异不显著(p>0.05),DF与HF相比,HF具备明显性(p<0.05),表明DF,HF对模型小鼠的 GAS含量具有提高作用。吴洋等[37]得出胃元宁高、中剂量组对小鼠血清中 GAS含量均显著高于模型组,增进38.79%、32.34%(p<0.05,p<0.01)。
已有证实刺梨[25]、陈皮[27]、茯苓[28]均可以促进消化作用,为验证刺梨口服液的促胃肠动力作用,本研究通过测定小鼠饮食量、体质量、胃残留率、小肠推进率及血清 MTL、GAS含量,得出刺梨口服液提高了小鼠饮食量10.38%、体质量7.08%(p<0.05);胃残留率降低了 36.90%,小肠推进率提升 45.11%(p<0.05);血清MTL、GAS含量增长39.05%、38.45%(p<0.05);表明刺梨口服液可以通过胃肠动力运动达到促消化的效果。