郏县红牛同期发情与超数排卵研究

秦锐峰

（河南省平顶山市农业农村局，河南 平顶山 467000）

郏县红牛是中国八大地方优良黄牛品种之一，同时也是我国培育肉牛新品种的核心地方品种。

建立牛胚胎基因库是目前牛保种最经济、最有效的方法之一。同期发情、超数排卵技术是建立胚胎基因库的关键技术，该技术已经在奶牛、水牛上得以广泛的应用与推广，应用于肉牛的报道也屡见不鲜，不少地方品种如南阳牛、秦川牛、晋南牛的同期发情与超数排卵也有报道，而郏县红牛至今尚无相关报道。该研究拟探索有效、稳定的郏县红牛同期发情与超排程序，以利于郏县红牛胚胎基因库的建设，同时也为其他地方品种黄牛的同期发情与超数排卵工作提供借鉴和依据。

1 材料与方法

1.1 试验地点、时间

该试验研究于2018 年2 月至5 月在河南省平顶山市郏县红牛繁育中心进行。

1.2 试验材料

1.2.1 试验动物

纯种郏县红牛供体母牛10 头，均为19～27 月龄青年牛，健康，性周期正常，无生殖器官疾病。试验期间，所有参试牛均舍饲，以青粗饲料配合精料饲喂，膘情适中。

郏县红牛特级公牛7头，采自平顶山市郏县红牛繁育中心。

1.2.2 主要仪器、设备

牛非手术采胚器械；胚胎冷冻仪；实体显微镜。

1.2.3 主要试剂、药品

氯前列烯醇（PG）0.2 毫克/支；垂体促卵泡素（FSH）400毫克/支；垂体促卵泡素（FSH）10毫克/支。

促排3号；20微克/支；孕激素阴道栓（CIDR）；牛血清白蛋白（BSA）；胎牛血清（FCS）；冲胚液：含1%胎牛血清（FCS）的PBS液；捡胚液：含10%胎牛血清（FCS）的PBS液。

1.3 试验方法

1.3.1 试验牛同期发情处理

1.3.1.1 肌肉注射PG 法 在发情周期的任一天肌注PG 0.4 毫克/头，记为第1 天，之后观察发情，准确记录发情时间并统计发情率。

1.3.1.2 CIDR+PG 法 在发情周期的任一天放置CIDR栓，记为第1 天，第12 天下午撤栓，撤栓的同时肌肉注射PG 0.4毫克/头，之后观察发情，准确记录发情时间并统计发情率。

1.3.2 试验牛的超排处理

1.3.2.1 在发情周期的任一天放置CIDR栓，记为第1 天，第10天开始递减剂量肌注FSH，每日2次，间隔时间12 h，连续4 d。第5 次注射FSH 的同时，再肌注氯前列烯醇（PG）0.4毫克/头。第12天下午撤栓。发情后输精3次，第1次、第2次之间间隔8 h，第2次、第3次之间间隔16 h，每次输2支细管冻精。

1.3.2.2 不同厂家FSH 的比较 超排方法同上。对郏县红牛10 头供体母牛中的7 头从第10 天开始连续4 d 递减剂量肌肉注射国产FSH（中科院动物所产，规格10 毫克/支），其余3头郏县红牛供体母牛则注射进口FSH（加拿大产，规格400毫克/支）。

1.3.3 冲胚及捡胚

输精后6～7 d 进行冲胚。冲胚前直肠检查供体牛的超排反应情况，同时记录左、右侧黄体数和黄体总数。使用三通式采胚管进行非手术法冲胚，每侧子宫角各用500 ml冲卵液冲洗7～8 次，子宫回流液静置后实体显微镜下捡胚。统计左、右侧黄体数、黄体总数和获胚数，应用SAS8.0软件分析处理实验数据。

2 结果

2.1 不同同期发情处理方法对同期发情效果的影响

不同同期发情处理方法对郏县红牛同期发情效果的影响结果表明，PG法处理的同期发情率为40%，而CIDR+PG法处理的同期发情率为100%，二者差异显著（P<0.05）。

2.2 郏县红牛总体超排效果比较

郏县红牛总体超排效果表明，应用连续4 d递减肌注FSH法对郏县红牛供体牛进行超排处理，获得头均黄体数7.90个，头均获胚数2.80枚。

2.3 进口与国产FSH对超排效果的影响

进口与国产FSH对供体超排效果的比较结果表明，采用加拿大进口和国内中科院动物所生产的FSH进行超排，二者获得的头均黄体数分别为14.00 个和5.29 个，差异显著（P<0.05），头均获胚数分别为2.33 枚和3.00 枚，差异不显著（P>0.05）。

3 讨论

3.1 不同同期发情处理方法对郏县红牛供体母牛同期发情效果的影响

氯前列烯醇是前列腺素（PG）类似物的一种，具有溶解黄体的作用，但它只对母牛发情周期5～18 d 的黄体有溶解作用，而对发情前后3～5 d 则无溶解功能。因此，PG法处理后总有部分母牛无反应。何光中等以关岭黄牛为研究对象采用PG法处理同期发情率为60.0%。赵维等用PG 诱导红安格斯肉牛的同期发情试验中，同期发情率为75.0%。和占星等在对水牛同期发情的研究中PG法处理供体牛的同期发情率为43.33%。权凯等对青海大通牦牛同期发情应用PG法处理的发情率为41.2%。研究结果显示，PG法处理郏县红牛同期发情率为40.0%，这与所选牛群的状态及牛群规模有一定的关系。

孕酮阴道栓（CIDR）在体内持续分泌孕酮，维持血液中孕酮的高水平，抑制卵泡的生长。当同时撤栓后，卵泡生长的抑制因素被解除，为卵泡的生长提供了一个共同的起点，从而达到同期发情的目的，但是，有些个体在撤栓时黄体还未退化，这样在撤栓后黄体继续分泌孕酮，达不到发情同期化的效果。针对这种情况，在撤栓后肌注PG，从而达到溶解黄体的目的，在一定程度上提高了同期发情的效果。据赵永聚等在山羊上做的同期发情试验结果显示，用CIDR 法处理，撤栓后直接观察发情，同期发情率为37.5%，而CIDR撤栓后再肌注PG，同期发情率为93.75%，显著高于第一种方法。很多试验证明，CIDR 结合PG，可获得理想的同期发情效果。郭志勤等用CIDR+PG法处理荷斯坦牛，撤栓后同期发情率达95%以上。韦英明等用该方法处理水牛也获得了相似的结果。该试验撤栓后再肌注PG，同期发情率为100%。

应用PG 法和CIDR+PG 法对郏县红牛进行同期发情处理，同期发情率分别为40%和100%，两者差异显著（P<0.05）。该试验CIDR+PG 处理法的同期发情率显著高于PG法，同期发情效果明显且理想。

3.2 郏县红牛超数排卵研究

该试验共有效超排郏县红牛供体牛10 头次，获得头均黄体总数7.90 个，头均获胚数2.80 枚。说明采用的超排方法处理郏县红牛是可行的。前人研究结果发现，晋南牛头均可用胚数3.94枚、温岭高峰黄牛3.04枚、青海黄牛4.00 枚、秦川牛4.20 枚、南阳牛4.28 枚。2.80 枚的头均获胚数与研究结果相比有一定的差距，原因可能是多方面的。其一可能与该试验所用牛的地方品种有关，郏县红牛的超排效果可能不如奶牛、水牛及其他地方黄牛品种；其二，本次超排的供体牛全部为青年牛，个体较小，冲卵困难，有部分供体操作受阻或回收液无法捡胚，这些情况可能直接影响冲卵效果，因此，笔者质疑郏县红牛是继续像其他地方品种黄牛那样选用青年牛进行超排，还是选用体格相对较大的经产郏县红牛进行超排；其三，该研究在河南省平顶山市郏县红牛繁育中心进行，该中心成立于2007 年，由于建成时间短，供体牛多是从散养户购进，背景复杂，而且繁育中心的饲养管理制度尚未规范化，导致供体牛的营养状况不好，可能直接影响超排效果；最后，郏县红牛的超数排卵试验研究在此之前无人做过，没有现成的方案可供参考，所有程序都是在参考奶牛、水牛及其他地方品种黄牛超排程序的基础上所做的探索性试验研究，因此，很多地方都有待商榷和进一步提高。另外，操作人员对冲卵技术的熟练程度也直接影响超排结果。

3.3 国产与进口FSH对超排效果的影响

现阶段国内牛超排常用的FSH 有进口和国产两大类。进口FSH价格高，但效果和稳定性高于国产产品。国产FSH价格低，从成本方面考虑有一定的优势。该试验研究同时选用加拿大进口和国内中科院动物所生产的FSH进行超排，结果表明，在对郏县红牛超排处理后，进口FSH获得的头均黄体总数14.00个与国产FSH5.29个差异显著（P<0.05），而进口FSH的头均获胚总数2.33枚与国产FSH的3.00 枚差异不显著（P>0.05）。提示进口FSH 的超排效果明显高于国产，但在供体牛状态不理想，冲卵技术不熟练等条件下，考虑到成本因素，可以选用国产药进行超数排卵。

4 结论

该研究以郏县红牛为研究对象，对其进行同期发情和超数排卵研究，所得同期发情率为70%；超排处理获得头均黄体数7.90±4.72个，头均获胚数2.80±2.44枚。该研究试图应用同期发情和超数排卵技术建立胚胎基因库保存郏县红牛优秀遗传基因，而这是首次对郏县红牛较大规模的超数排卵研究。研究发现，CIDR+PG法处理比PG法处理供体牛的同期发情效果显著；对郏县红牛应用FSH连续4 d 递减法肌肉注射进行超排是可行的。同时，地方品种的同期发情与超数排卵技术是一项复杂的工作，其有效、稳定的同期发情与超数排卵的方法和程序还有待于进一步探索。□