江西省粉末牛肝菌属真菌一新记录种——红鳞粉末牛肝菌*

方洁钰，张复茂，赵 宽

（江西科技师范大学生命科学学院，江西 南昌 330013）

粉末牛肝菌属（Pulveroboletus Murrill）在分类上隶属于牛肝菌目 （Boletale） 牛肝菌科 （Boletaceae），是Murrill于1909年基于黄粉末牛肝菌（P.ravenelii）菌盖有粉末这一特征，并以P.ravenelii为模式种建立的[1]。该属主要鉴别特征为子实体较小，菌盖扁平，表面有一层粉末，易脱落，湿润时稍粘，盖缘一般稍内卷；菌肉为白色；菌柄近圆柱形，实心，菌环生柄上部，网状，受伤后缓慢变成蓝色；孢子呈浅黄褐色，牛肝菌型；担子呈棒状；侧生囊状体较长，上部短尖，中部凸出。该属真菌具有重要的食（药）用价值，如黄粉末牛肝菌有治疗腰腿疼痛之功效[2-3]，网柄粉末牛肝菌（P.retipes）含有7种人体必需氨基酸[2]。而该属中红管粉末牛肝菌（P.amarellus）、褐点粉末牛肝菌（P.brunneopunctatus）等则被列入毒菇名录，成为牛肝菌研究中的“明星类群”[2-4]。

通过形态解剖学与分子系统发育分析相结合的研究，发现江西省粉末牛肝菌属1个新记录种——红鳞粉末牛肝菌（Pulveroboletus rubroscabrosus），并对其进行描述和报道，为该属真菌的物种多样性研究提供参考。

1 研究材料与方法

1.1 供试标本

2份标本分别于2017年、2018年采集于中国科学院庐山植物园，经干燥处理后，保存于中国科学院昆明植物研究所隐花植物标本馆（HKAS 105244；HKAS 105245），同时保存与之配套的硅胶干燥材料用于分子实验。

1.2 形态学研究

1.2.1 宏观特征观察

野外采集子实体并拍照，记录采集地点、采集日期、采集人员以及子实体各部位结构等特征。特征主要包括菌盖大小、形状和颜色，光滑或粘；菌肉的厚度、颜色；菌褶的厚度、颜色；菌柄的颜色、形状、尺寸和着生方式；受伤后是否变色、变色的深浅程度和快慢等。

1.2.2 内部显微观察

使用5%的氢氧化钾溶液对标本组织进行显微制片后，观察、记录担孢子、担子和囊状体的形态、大小等数据，并与模式标本（红鳞粉末牛肝菌，HKAS 75537）的相关数据进行比较。显微特征均在显微镜下放大100倍（油镜）观察得到。统计数据中n/m/p表示测量p份标本的m个子实体上的n个担孢子，Q值表示担孢子的长宽比，Qm则表示担孢子长宽比 （±s）。

1.3 分子系统学研究

1.3.1 DNA 提取

采用生工生物工程（上海）股份有限公司Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒，对硅胶干燥的分子材料进行总DNA提取。

1.3.2 PCR 扩增与系统发育分析

根据所查阅的文献资料和预试验，最终选取的基因片段共5个，分别为核糖体大亚基编码基因（nrLSU）[5]、翻译延长因子编码基因 （tef1-α）[6]、RNA聚合酶II第一大亚基编码基因（rpb1）[7]、RNA聚合酶II第二大亚基编码基因（rpb2）[8]以及核糖体内转录间隔区（ITS）[9]，并使用NCBI数据库中数据较为丰富的ITS序列构建系统发育树。

扩增体系总体积为25 μL，包括 10×Buffer 2.5 μl，正反向引物各 0.5 μL，模板 DNA 1.0 μL，Taq酶 0.5 μL，ddH2O 20.0 μL。扩增反应程序的热循环参数为94℃预变性3 min，然后进入连续35个循环，94℃变性40 s，退火 40 s（退火温度：ITS 50℃、nrLSU 52℃、tef1-α、rpb1和 rpb2为 56℃），72℃延伸50 s，循环结束后于72℃延伸8 min，终止温度为10℃。

PCR扩增产物经凝胶电泳检测条带后，送往生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。所得序列采用BioEdit v7.0.9[10]打开，检查序列峰形图并仔细核对碱基读取是否正确。同时，所得序列采用NCBI在线软件blast与GenBank[11]数据库中的序列进行比对，以确保所得序列与研究对象相对应，避免污染。对序列进行整理后利用最大似然法构建系统发育树，以确定物种的系统发育位置及其与属内其他物种的亲缘关系[12]。

2 研究结果

2.1 形态特征

红鳞粉末牛肝菌子实体生境照片见图1。

由图1所示，红鳞粉末牛肝菌菌盖凸镜形，成熟后逐渐平展，直径2 cm～3 cm，湿润时稍粘，表面有一层橘红色、平伏的絮状鳞片，盖缘稍内卷；菌肉厚3 mm～4 mm，浅黄、略带粉色，伤后变为浅蓝色。子实体表面淡黄色至暗黄色，受伤后迅速变为蓝黑色，幼时被柠檬黄色菌幕包裹；管口近圆形，直径约2 mm；菌管浅柠檬黄色，高4 mm～5 mm，伤后缓慢变浅蓝色。菌柄柠檬黄色，近圆柱形，（30～50）mm ×（4～6）mm，菌环生于菌柄中上部，菌环以下部位有与菌盖上相同的鳞片；菌柄菌肉浅黄，基部金黄，菌丝近白色，受伤后局部缓慢变浅蓝。其与模式标本红鳞粉末牛肝菌显微特征比较见表1。

由表1所示，所研究标本担孢子为100/2/2，大小为 （7.5） 8 μm ～ 10 （11） μm × 4.5 μm ～ 5 （6）μm，Q ＝ （1.50） 1.70 ～ 2.20 （2.75），Qm ＝ 1.91 ±0.23，呈黄褐色，表面光滑无纹饰，牛肝菌形；担子 （15～30） μm × （6～10） μm，在氢氧化钾中近无色，短棒状，内部具油状圆形小颗粒，整体呈栅栏状排列，成熟担子顶端多具4个小梗；褶缘囊状体（40～75） μm× （7～13） μm，散生，无色，近纺锤状或长披针形，顶端短尖，中部凸出。

表1 所研究标本与模式标本显微特征比较Tab.1 Microscopic characteristics comparison between studied specimens and type specimen of P.rubroscabrosus

2.2 分子系统学研究结果

通过对研究标本ITS序列进行扩增与测序，将所得结果与GenBank和UNITE等数据库中可靠的序列进行匹配和对比，结合GenBank中的其他序列资料，选择双色薄瓤牛肝菌（B.bicolor） 和红孔牛肝菌（R.sinicus）作为外类群，采用褐糙粉末牛肝菌（P.brunneoscabrosus）、中华粉末牛肝菌（P.sinensis）、雷德粉末牛肝菌（P.ridleyi）、淡红粉末牛肝菌（P.subrufus）、褐点粉末牛肝菌 （P.brunneopunctatus）、大孢粉末牛肝菌（P.macrosporus）、黄鳞粉末牛肝菌（P.flaviscabrosus）、红鳞粉末牛肝菌（P.rubroscabrosus）、网盖粉末牛肝菌 （P.reticulopileus）、东方兰茂牛肝菌（L.asiatica） 共10种牛肝菌序列组建基因矩阵后用RAxML软件（最大似然法）构建的系统发育树见图2。

由图2可知，所用的2条序列（加粗显示） 与红鳞粉末牛肝菌P.rubroscabrosus（HKAS 75537） 聚为一支。后续试验所得的nrLSU、tef1-α、rpb1、rpb2序列，与GenBank中可靠的序列进行匹配和对比，与红鳞粉末牛肝菌序列同源性均达98%以上。

3 结论

综合形态特征分析和分子系统学研究，鉴定出采集自江西省的2份标本均为粉末牛肝菌属中的红鳞粉末牛肝菌。与产自湖北神农架的该物种的模式标本（HKAS 75537） 相比[13]，形态上略存在差异，如受伤后的变色情况、孢子和担子大小等，从而丰富了对于该物种的认识，为物种精准鉴定提供了更全面的信息。

目前，针对江西省牛肝菌资源开展的研究还相对较少[14-16]。本次新记录种的发现，为认识江西省大型真菌资源多样性提供了基础数据。牛肝菌科真菌多为外生菌根菌，包含食（药）用菌和毒菌，具有重要的生态和经济价值，在资源开发和应用领域逐渐引起重视[17-18]。粉末牛肝菌属的部分物种能祛风散热、活络筋骨，具有重要的药用价值[2，17]；同时，该属的毒菌被误食可引起胃肠不适或致幻[13]。因此，红鳞粉末牛肝菌在江西省的首次报道，对于充分认识该区食（药）用真菌资源、预防毒菌中毒也有重要意义。