GC-ECD-MS法检测刺五加、板蓝根中有机氯农药残留量

陈 祺，王梓煊，田国新，赵寒雪，缪文丽

(哈尔滨商业大学 药学院，哈尔滨 150076)

刺五加，多年生木本植物，具镇静安神，补益脾气之功[1-2]；板蓝根，草本植物，具解毒辟疫、凉血消肿之功[3-4].二者均为东北道地药材，具有悠久的历史，广阔的应用前景.有机氯农药作为杀虫剂，对多种虫害均有显著作用，曾普遍应用于中药材种植，虽然已经明令禁止使用，但是因为半衰期长、难分解，残留物仍可通过食物链传递至人体[5-6]，极易引起“三致效应”和遗传毒性[7-8].因此，有必要对有机氯农药在中药材中的残留量进行检测.本实验通过超声提取、气相色谱-电子捕获-质谱检测法对刺五加、板蓝根中残留有机氯农药进行测定，以期为研究更快速、高效、安全的中药有机氯农药残留检测方法提供科学依据.

1 实验仪器及材料

1.1 实验仪器

质谱检测器(MSD，美国Agilent)；鼓风干燥箱(DHG-9140A型电热恒温)；多用真空泵(SHB-Ⅲ型循环水式)；气相色谱仪(6890N，美国Agilent).

1.2 实验药品与试剂

色谱纯：正己烷；优级纯：浓硫酸；分析纯：无水硫酸钠、丙酮、二氯甲烷、正己烷和氯化钠.

标准品：六氯苯、γ-六六六、七氯、艾氏剂、p’,p-DDT质量浓度均为100 μg/mL、反式氯丹质量浓度为20 μg/mL，以上标准品购于国家标准物质研究中心.

药材：刺五加、板蓝根鲜药材均购自东北种植基地.

2 实验方法与结果

2.1 对照品储备液制备

将6种标准品原液分别取1 mL，置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，得10 μg/mL对照品储备液.

2.2 供试品溶液制备

取2.0 g供试粉末与10 g无水硫酸钠于250 mL量瓶，取丙酮-二氯甲烷1∶1混合，60 mL浸泡12 h，超声提取20 min.静置过滤，固相加30 mL丙酮，反复操作3次，归并滤液.在40 ℃水浴条件下，使易挥发组分分离，至近干，滴入5 mL正己烷，多次进行如上操作，到最终除净萃取剂.加正己烷定容至5 mL.滴加优级纯(浓硫酸)约1 mL，振摇1 min，3 000 r/min，离心10 min.将上层清液移出，即得.

2.3 色谱条件选择

进样口温度：290 ℃；升温程序：最初温度维持1 min，然后以10 ℃/min的速度由100 ℃升至200 ℃，保持2 min，再以8 ℃/min的速度升至280 ℃，维持同等时间；检测器：300 ℃；载气：氮气(高纯度)，1.5 mL/min；外标法定量；采用不分流的方式进样1.0 μL.上述混合对照品色谱图如图1所示.

1-六氯苯; 2-γ-六六六; 3-七氯;4-艾氏剂;5-反式氯丹; 6-p′,p-DDT

2.4 质谱条件

EI电离源液质；以70 eV作为电子的能量；以0.2 mA作为发射的电流；以350 V作为光电倍增器电压；以200 ℃作为离子源温度；以285 ℃作为接口温度；以1sec/scan作为扫描的速度；扫描的质量处于50～450 amu之间；溶剂延迟的时间为4 min.

2.5 建立标准曲线

取对照品混合液，用正己烷稀释至5个不同的质量浓度(六氯苯、七氯、反式氯丹、p′,p-DDT：5、50、100、200、1 000 μg/mL；γ-六六六、艾氏剂：5、50、100、200、250 μg/mL)，依“2.3”分析，进样量：1.0 μL，把得到的峰面积值与已知物质的质量浓度进行线性回归，相关系数r>0.993,符合线性关系.

2.6 重现性实验

取供试品5份，2.0 g/份，制得供试品溶液，按“2.3”测定，检测出刺五加中六氯苯、七氯、p′,p-DDT的RSD值分别为1.1%、3.8%、2.1%，其他三种均未检测出；板蓝根中七氯、p′,p-DDT的RSD值分别为0.3%、2.0%，其他四种均未检测出.

2.7 精密度实验

取已知质量浓度对照品的混合溶液，于1日内分别不间断进5次样品，按“2.3”测定，检测出六氯苯、γ-六六六、七氯、艾氏剂、反式氯丹、p′,p-DDT的RSD值分别为0.51%、0.55%、0.57%、1.3%、0.86%、1.4%.该方法的精密度良好.

2.8 回收率试验

取供试品9份，2.0 g/份，按3个标准(15、30、60 μg/kg)添加已知质量浓度混合对照品溶液，平行样品3份，制作的供试品溶液，按“2.3”测定，考察回收率，回收率>90%，1.7%

2.9 样品测定

取等量供试品3份，制供试品溶液，按“2.3”测定，1 μg /mL的对照品混合液作随机对照，进样量1.0 μL，平行3次，取均值.外标法确定含量，得供试品中农药的残留含量，结果如下.见图2、3，表1、2.

1-六氯苯;2-七氯；3-p′,p-DDT

1-七氯；2-p′,p-DDT2

表1 刺五加样品质谱检测报告

表2 板蓝根样品质谱报告

3 讨 论

提取是农残分析的重要步骤.目前，国内外主要采用加速溶剂萃取(ASE)、固相萃取(SPE)、微波辅助萃取(MAE)、分散液液微萃取(DLLME)等技术对样品进行前处理[9-12].本实验采用超声波提取法，与其他方法相比具有稳定性好、操作简单、提取效率高且清洁的特点.文献报道[13]超声提取气相色谱测定，正己烷提取有机氯农药的方法，加标回收率可达72.2%～125.3%之间.对于检测方法，气相色谱法与其他方法相比，具有高度的敏感性、高度的准确性.本实验通过气相色谱-电子捕获(ECD)-质谱(MS)联用的检测手段，经过方法学考察，所测物质的加标回收率大于90%，回收率RSD均小于10%，六氯苯、七氯、反式氯丹及p′,p-DDT在5～1 000 μg/L呈线性关系；γ-六六六和艾氏剂在5～250 μg/L呈线性关系.仪器精密度RSD在0.51%～1.4%之间，满足实验要求.实验检测出刺五加中含的六氯苯量为610.73 μg/kg、p′,p-DDT 290.96 μg/kg、七氯80.32 μg/kg；板蓝根中含的七氯量为431.38 μg/kg、p′,p-DDT 50.86 μg/kg.据2020年版中国药典[14-15]农药残留限量标准：DDT0.1 mg/kg,六六六0.1 mg/kg, 艾氏剂0.05 mg/kg.表明本实验刺五加DDT残留量超标，其他有机氯农药还需进一步完善标准.

4 结 语

由上述分析可知气相色谱-电子捕获(ECD)-质谱(MS)联用(GC-ECD-MS)的检测方法具有简单、速率高、分离效率好、灵敏度较高及分析结果可靠的特点，该方法检测出刺五加中六氯苯残留量610.73 μg/kg、DDT 320.15 μg/kg、七氯80.32 μg/kg；板蓝根中七氯残留量431.38 μg/kg、DDT50.86 μg/kg，故这两种药材受到有机氯农药的污染，且刺五加中DDT的污染水平超过2020年版中国药典对农药残留限量的标准.