对液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的方法相关分析

范中伟

【摘要】三聚氰胺并非食品添加剂和食品原料，严禁人为添加，如果人体大量摄入三聚氰胺后，将会对人体泌尿、生殖系统产生不同程度的损坏，亦或诱发肾、膀胱结石，因此做好三聚氰胺检测工作至关重要。本文将会对奶粉中三聚氰胺的液相色谱法测定给予全面、系统的分析，以期为食品安全监测提供快速、可靠的分析方法，避免各类安全事故的发生。

【关键词】奶粉;三聚氰胺;液相色谱法

三聚氰胺属于日常生产中比较重要的化工原料，作为涂料、塑料等行业的改性剂。在奶粉等食品检测中，常规全氮测定法无法排除伪蛋白氮的干扰，进而导致测量结果失真。为了提高产品蛋白质含量，商家往往会选择三聚氰胺作为伪蛋白质，并在食品中进行非法添加，虽然三聚氰胺具有轻微的毒性，但是如果长时间服用，将会危及食用者的生命安全，因此做好奶粉中三聚氰胺测定尤为关键，下面对其给予详细介绍。

1.材料与方法

1.1试剂与仪器

本次研究过程中选择了美国Tedia公司生产的庚烷磺酸钠（98%）、Alia Aesar公司生产的三聚氰胺标准品、美国Waters公司生产的阳离子交换固相萃取柱（SCX）以及天津市四友精细化学品有限公司生产的甲醇（分析纯和色谱纯）、乙腈（分析纯和色谱纯）;乙酸铅、三氯乙酸、柠檬酸等均为分析纯;实验用水均选择了超纯化水机制备。

WARIAN液相色谱仪：Prostar 410自动进样器、Prostar 310可变波长紫外检测器、Prostar 420高压泵、4.6mm×250mm的依利特Kromasil C18色譜柱;Branson SB3200超声仪;Heraeus 冷冻高速离心机;KL512型氮吹仪;Sartorius TE612.L电子天平;DZG-303A艾科浦实验室台式超纯化水机以及雷磁PHS-3C精密pH计。

1.2仪器条件

流动相：5%-pH 为7.0的10mmol/L的乙酸铵水溶液和95%乙腈;色谱柱：规格为2.1×50mm，5.0μm的Waters atlantis HILIC Silica色谱柱;进样量：10μL;柱温：35℃;流速：0.5mL/min;弱洗溶剂：V（水） ：V（乙腈）=10：90;强洗溶剂：V（水） ：V（乙腈）=50：50;密封清洗溶剂：V（水） ：V（乙腈）=95：5;检测波长：210nm。

按照要求做好峰纯度、保留时间及光谱特性测定工作，如果测定结果均比阈值低，即为可定性。

1.3标准溶液的配置

准确称取三聚氰胺标准品100mg，按照要求投入到l00ml容量瓶中，选择甲醇：水=1：l的甲醇水溶液进行溶解配置成标准储备液浓度为lmg/ml，将其放置在4℃避光条件下进行保存。

1.4标准曲线的绘制

将三聚氰胺标准储备液稀释成标准工作液，浓度依次为0.8、2、20、40、80ug/ml，随后采用0.45μm的水系滤膜来对标准工作液进行过滤处理，以确保后续液相色谱分析的顺利进行，该过程按照浓度由低到高依次进行，从而获取纵坐标为峰面积，横坐标为浓度的标准曲线，如图1所示。

1.5奶粉样品的测定

称取2.0g奶粉样品放置到100ml的具塞离心管中，同时将l%三氯乙酸提取液50ml混合其中，并添加2%乙酸铅溶液2ml，随后进行超声提取20min后静置2min候，就可以提取大概上层液30ml转移至10ml离心管中，并给予10000r/min离心5min处理后，选择上清液进行抽滤处理。基于上述处理后，取6m1滤液依次通过甲醇3ml和l%三氯乙酸3ml活化过的SCX小柱，抽干后按照要求选择6ml氨化甲醇实施洗脱处理，并在50℃氮气下对洗脱液进行吹干处理。

2.结果与分析

2.1色谱条件优化

2.1.1缓冲离子对试剂pH值优化

将10mmol庚烷磺酸钠和lOmmol柠檬酸按照一定比例配制成缓冲离子对试剂，此时所对应的pH值一般小于3。此时，按照国标GB/T 22388-2008中的相关要求，用lmmol的氢氧化钠溶液将缓冲离子对试剂pH值调节至3.0，并保留48.152min，由此可以发现，将缓冲离子对试剂的pH值可以起到提高的作用。

2.1.2流动相比例优化

如果pH值为3.0时，在50min内虽然缓冲离子可以确保试剂出峰，然而需要花费的时间比较长，在一定程度上使乙腈比例提高。当乙腈缓冲离子对试剂的比例为32：68时，将会提前保留时间至4.776min。实际上，对于加标样品而言，其对应的后面小杂峰与目标峰无法彻底分开，这样将会导致乙腈比例降低，直至乙腈缓冲离子对试剂的比例为28：72时，将会实现目标峰和杂质峰的有效分离，该时间段2μg/ml标准液所对应的保留时间为8.285min。

2.2线性范围和检出限

按照给定色谱条件实验，将配制的系列标准溶液，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制成回归方程，方程如图l所示，其所对应的相关系数为0.9997。实际上，最好采用以3倍信噪比来计算最低检测浓度，并且在仪器信噪比的3倍下，能够获取检测限最低为0.15mg/kg。

2.3加标回收率和精密度

本次试验过程中，选择2.Og阴性对照奶粉，并结合实际来对三聚氰胺标准贮备液进行添加，并分成5个不同浓度的样品，同时设置3个平行试验，随后就可以开展液相色谱测定工作。所得到的加标回收率和精密度结果如表1所示。

3.结论

综上所述，奶粉中三聚氰胺测定的方法比较多，而不同检测机构所采用的液相色谱仪具备差异，此时就需要结合实际情况来对其进行选择，以此来区别检测结果的真实性、准确性。

参考文献：

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