新支流法四联新型佐剂灭活疫苗临床应用效果评价

王顺山，杨文文，王志龙，唐乃鑫，祝希辉，郭鹏，贺亚奇，李玉保*

（1.北京华夏兴洋生物科技有限公司北京 102600；2.聊城大学农学院山东聊城25205）

新城疫（ND）、传染性支气管炎（IB）、H9 亚型禽流感（H9 AIV）以及传染性法氏囊炎（IBD）是肉鸡常见的病毒性疾病，疫苗免疫是目前有效预防方案。灭活苗具有安全性好、稳定性高、便于运输和保存等优势，使用不同的佐剂能够提高灭活苗免疫效果[1,2]。兽用疫苗生产中广泛使用矿物油佐剂，在免疫应答和免疫持续期方面具有独特的优势，但也存在疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反应大等问题。北京生泰尔生物科技有限公司申请获批含有高分子胶和植物提取物的“新型疫苗佐剂”发明专利[3]，应用该发明专利生产新支流法四联灭活疫苗。为客观评价新型疫苗佐剂新支流法四联疫苗在肉鸡临床应用效果以及1 日龄防疫新支流法对肉鸡后期抗体滴度提升效果，设计开展了临床试验。

1 材料与方法

1.1 疫苗

新支流法四联新型佐剂疫苗（批号2020012），由北京华夏兴洋生物科技有限公司提供；新支流法四联矿物油佐剂疫苗，采购于市场流通商品。

1.2 主要试剂

IBD、IB 抗体检测试剂盒，均购自上海酶联生物科技有限公司；ND、H9 AIV 血凝抑制试验抗原，均购自哈尔滨维科生物技术开发公司。

1.3 试验动物

1 日龄雏鸡62,400 只，平均分为A、B、C、D 共4 栋。A 栋和B栋为新支流法四联新佐剂疫苗试验组，1 日龄颈部皮下注射0.2mL/ 只；C 栋和D 栋为新支流法四联矿物油佐剂疫苗对照组，1日龄颈部皮下注射0.2mL/ 只。试验组与对照组其余疫苗免疫程序相同，1 日龄新支二联弱毒苗喷雾免疫（0.6 羽份/ 只），7 日龄新支二联弱毒苗饮水免疫（1.5 羽份/ 只）。

1.4 免疫应激

1 日龄注射灭活苗，观察雏鸡进入鸡舍后，雏鸡在养殖笼内的分布、饮水、采食情况，记录数据并拍照。

1.5 疫苗吸收

分别在7、14 日龄时，每组剖杀10 只试验鸡只，观察颈部灭活苗注射部位疫苗吸收情况，并拍照。

1.6 免疫器官指数

分别在7、14、21、35 日龄，各栋随机抽取10 只，控饲3h，称重、剖杀，称取胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官重量，计算免疫器官指数。

免疫器官指数=免疫器官鲜重（g）÷体重（kg）

1.7 抗体滴度检测

分别在7、14、21、28 和35 日龄及出栏时，各栋随机采血10份，分离血清，利用ELISA 试剂盒、血凝/ 血凝抑制试验检测IBD、IB、H9 AIV、ND 抗体滴度。

1.8 数据分析

试验数据采用SPSS 20 软件对所得数据进行单因素方差分析（One-way ANOVA），试验结果以平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 免疫应激

各组雏鸡进入鸡舍后，开始饮水时间、开始吃料时间、早期耗料量以及在养殖笼内雏鸡分布无明显差异（图1）。

2.2 疫苗吸收情况

于7、14 日龄剖杀各栋雏鸡，观察疫苗吸收情况。试验组疫苗吸收稍优于对照组（图2）。

2.3 免疫器官指数

7 日龄时，试验组A 栋胸腺指数极显著高于对照组C 栋和D栋（P≤0.01）；21 日龄时，试验组A 栋和B 栋胸腺指数显著高于对照组C 栋和D 栋（P≤0.05）。脾脏指数和法氏囊指数，试验组与对照组无显著性差异。

表1 试验鸡只免疫器官指数

2.4 抗体水平

21 日龄时，H9 抗体滴度试验组显著高于对照组C 栋（P≤0.05）；ND 抗体滴度，各日龄试验组与对照组均无显著性差异（表2）。IB及IBD 抗体滴度，各日龄试验组与对照组差异均无显著性差异（未附数据）。

3 讨论与结论

新支流法四联新型疫苗佐剂疫苗免疫效果具有一定的优势。新型疫苗佐剂含有高分子胶和植物提取物[3]，能够提高机体非特异性免疫[4]，在免疫早期能够促进胸腺发育，提高胸腺指数；抗体结果显示，虽然只有在21 日龄时，试验组H9 AIV 抗体滴度显著高于对照组，但从数据可以看出，在21 日龄前，试验组H9 抗体滴度和ND 抗体滴度平均值皆高于对照组，证明新支流法四联新型疫苗佐剂疫苗在肉鸡早期具有一定的优势。

图1 雏鸡分布 A.试验组；B.对照组

图3 7 日龄、14 日龄疫苗吸收情况 A7-D7.各组7 日龄；A14-D14.各组14 日龄

表2 试验鸡只ND和H9亚型流感HI抗体水平

1 日龄防疫新支流法疫苗，对肉鸡40 日龄前能够提高较好的保护。长期以来，新流灭活疫苗或新支流灭活疫苗的防疫，多在养殖场7～9 日龄进行。随着养殖规模扩大，在养殖场进行注射免疫存在应激大、操作困难、对生物安全构成威胁等不足，因此，希望肉鸡防疫孵化场完成，但1 日龄进行灭活疫苗防疫对后期抗体滴度是否满足需要存在争议。目前白羽肉鸡出栏时间多在40 日龄左右，通过1 日龄防疫新支流法四联疫苗，可以对4 种主要的流行病提供较好的抗体保护。但抗体数据显示，35 日龄后，各组抗体皆有所降低，且从标准差可以看出，抗体离散度明显扩大。因此，饲养周期超过40 日龄的鸡群，建议加强免疫。