核酸检测与酶联免疫吸附检测在无偿献血血液标本乙肝病毒筛查中的应用比较

成守泽

【摘要】目的：分析核酸检测与酶联免疫吸附检测在无偿献血血液标本乙肝病毒筛查中的应用情况。方法：选择2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的无偿献血样32428份为研究样本，所有受试者的血液样本均经过金标试纸法检测HBsAg以及干化学法测定ALT显示合格，将样本分为两份，分别开展核酸检测以及ELISA测定，分析结果。结果：相较于ELISA检测法，核酸检验法的特异性以及灵敏度明显更高（P<0.05）。核酸检测特异度为99.98%。灵敏度为80.85%;ELISA检测特异度为70.05%，灵敏度为70.21%。结论：在开展HBVI临床筛查时，应用核酸检测法所得出的结果特异性更强、灵敏度更高，该法应用前景广阔，因此值得进一步推广应用。

【关键词】核酸检测;酶联免疫吸附试验;无偿献血;乙肝病毒筛查

[中图分类号]R446.6：8512.62 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）01-0137-02

酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）为经典血清学诊断方式。其有着快速、灵敏以及价格经济等等特征。其主要实验原理为：抗体与酶复合物联合显色，其能够发挥出维持抗体免疫活性的效用。现如今，酶联吸附免疫法为临床中开展乙肝病毒检测的常用方式。这种方法于血液筛查中可发挥出一定作用。而核酸检测法（nucleic acid testing，NAT）不但能够有效减少输血传播病原体风险度，另外也可缩减病毒检测窗口期。其在测定隐匿性乙肝病毒感染方面意义重大[1]。

为了全面探究两种检测方式于无偿献血血液样本乙肝病毒筛查中的应用价值，本实验选择2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的无偿献血样32428份为研究样本，对上述病情进行全面分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的无偿献血样32428份为研究样本。所有受试者的血液样本均经过金标试纸法检测HBsAg以及干化学法测定ALT显示合格。将样本分为两份，分别开展核酸检测以及ELISA测定。并在样本试剂瓶上有效记录编码以及收集日期，于采集后4h内离心处理，放在冰箱内低温保存。

1.2 方法 本实验所使用的ELISA测定设备为瑞±哈密顿公司生产，型号为FAME24/20型全自动酶免分析仪。核酸检测利用美国罗氏公司所生产的实时荧光定量PCR系统完成。

所有受试样本均实施PCR系统HBV-DNA检测以及ELISA法实施HBV血清标记物检测，将1g（HBV-DNA）在2.7以上阳性标准[2]。完成静脉采血之后留取两份样本，完成核酸检测以及ELISA检测。均在收集样本之后48h内完成。针对无法完成的样本，需要在提取血浆之后放置于-20℃环境下妥善保存，并在1周内完成检测。

1.3 观察指标 针对于三类HBV感染状态的HBeAg阳性情况加以记录以及分析，具体包含慢性感染或急性感染[HBsAg（+）/HBeAb（+）]、小三阳[HBsAg（+）/HBeAb（+）/HBcAb（+）]、大三阳[HBeAg（+）/HBeAg（+）/HBeAb（+）]。

1.4 统计学原理 本实验使用SPSS20.0统计软件，对数据内的计数资料开展x2检验分析，若P<0.05，证实相关数据存在统计学差异。

2 结果

相较于ELISA检测法，核酸检验法的特异性以及灵敏度明显更高（P<0.05）。核酸检测特异度为99.98%。灵敏度为80.85%;ELISA检测特异度为70.05%，灵敏度为70.21%。ELISA检测结果、核酸检测结果分别与金标试纸法检测结果对比情况，详见表1、表2。

3 讨论

相关文献证实：当人体生成抗体以后，其会在相当长一段时间内留存于机体之中。但因为抗体浓度水平较低，在此刻利用酶联免疫吸附法开展检测效果精准度差。核酸检测法所出具的结果有着良好的灵敏度和特异度。在临床中，一般将核酸检测结果视为酶联免疫吸附实验结果的互补型实验结论。

核酸检测法是通过分析血液内微小病毒核酸，经聚合酶链式反应扩张，通过荧光信号加以识别。尽早实施核酸检测，可以显著缩短窗口期时间。在全面推广核酸检测法之前，美国有90%以上的输血者传播人类免疫缺陷病毒;有75%以上的输血传播丙肝病毒的危险性主要来自于窗口期感染献血。迄今为止，诸多国家纷纷开设了和血液筛查项目。其主要内容包含筛查丙肝病毒、乙肝病毒以及人类免疫缺陷病毒。利用此法可以全面提升临床用血的安全性，另外也可以减少输血感染发生率。

中国属于HBV感染的高发国。乙肝病毒感染往往经血液传播。由此能够看出，做好HBV筛查工作是相当重要的。当前，ELISA检测法已然成为了临床诊断HBV感染的最常用方式。其在疾病诊断与血清学筛查中发挥了不可替代的作用。这种方法有着进行方便快捷、价格经济等等优势。但值得注意的是，此法也存在一定局限性。比如说HBV感染具有一定窗口期，进而令ELISA检测法与临床应用中存在漏检的不良情况[3]。

而HBV-DNA为一类近几年发展而来的新式分子生物学检测方式。其能够实现于早期发现HBV感染，同时也可对病毒加以定量。利用此法所取得的结果灵敏性高可、靠性强。该法可以对HBV感染真实情况加以反应，其灵敏度以及特异性均较高。现如今，我国诸多血站已然广泛应用了核酸检测法用于无偿献血者血液病毒感染筛查工作之中，且取得了满意成效[4]。

有文献报道表明[5]：HBV-DNA检测以及ELISA检测法测定HBV-DNA的结果存在一定差异。在该实验中，共计28例样本HBsAg检测阴性，而经HBV-DNA检验结果为阳性。之所以出现这种情况，主要原因在于在乙肝病毒感染先期無偿献血者血液内病毒数量极少，而应用ELISA无法检测出HBsAgo而在这时，病毒的DNA已然存在于无偿献血者的血清样本之内。所以说，其HBV-DNA检测结果表现为阳性。在该实验中，有19份血液样本的HBsAg阳性，而HBV-DNA为阴性。之所以出现这种现象，主要原因在于乙肝患者经药物治疗之后，血液内仅仅存在HBsAg，而无病毒DNA。此刻，该受试者的病毒复制率和传染性均较低。

長久以来，在中国无偿献血受试者的血液筛查工作之中，通常沿用的模式为：择取两类不同厂家生产的酶联免疫吸附试验试剂盒，针对于血液样本开展2次筛查。利用这种方法以削减血液检测所造成的误差。有文献表明：针对于10571例标本应用酶联免疫吸附法加以测定，最终检测出50例乙肝表面抗原阳性样本，综合检出率为0.4%;抗-HCV阳性共计58例，检出率为0.54%;抗-HCV阳性共计%例，检出率为0.9%。虽然说现如今我国ELISA检测技术比以往更为先进，能够在一定程度上减少输血感染风险。但值得说明的是，应用ELISA检测HIV、HCV、HPV病毒的抗原或抗体，针对于HIV、HCV以及HBV窗口期感染变异病毒等等仍旧没有办法第一时间检出。另外也会受到诸如环境操作、试剂设备等等因素所产生的影响，因此存在较高的漏诊率。

以酶联免疫吸附实验为基础，联合实施核酸检测能够取得满意成效。在该项调查中，应用此法检测出HBV-DNA阳性共计20例，检出率约0.18%。而HIV-RNA与HCV-RNA没有发现阳性样本。经过对比，单一检测法以及综合检测法测定乙肝病毒阳性样本结果，在此其中共计4例样本属于酶联免疫吸附实验阴性而核酸检测阳性。经后期采血随访，表明其属于窗口期感染。

核酸检测为一类新式的生物分子学检测方式。其能够有效测定受试者HBV-DNA含量水平继而体现出机体真实的感染情况。该法有着易实现自动化、核酸标本回收率高等优势，属于一类血清学诊断方式的有效补充，尤其适合于大量血样本筛查工作。

有文献表明：将某血液中心所收集的12758例血样本为研究对象，分别开展ELISA检测以及NTA检测，结果证实：两类方式在测定HBV阳性率方面无明显差别（P>0.05），相较于ELISA法，NAT法针对于HBV诊断特异度、灵敏度明显更高，并且核酸检测法的窗口期显著比ELISA法更短。由此能够看出，核酸检测法在测定血样本内HBV应用价值更高。之所以出现这种情况，主要原因在于乙肝病毒感染存在隐匿性的特征。另外感染也存在窗口期。ELISA法主要经过把酶复合物以及抗体结合显色方式用于检测，其非常容易受到诸如病毒感染窗口期以及病毒变异等等因素的影响，继而引发漏诊事件发生。

与之相比，NAT能够经过核酸扩张技术，继而测定出血样本内较早出现的病毒核酸。同时，对其开展定量可以更为直接有效的体现出机体HBV感染的真实情况。因而利用此法所得出的效果灵敏性高、特异性强。另外有研究表明：在大三阳血样本内HBV-DNA含量水平以及阳性率明显比小三阳以及急性感染/感染慢性期的标本。由此能够看出，HBV-DNA含量水平可以在极大程度上体现出HBV传染程度。随着受试者机体中HBV-DNA水平上升，病毒传染性越强。在此其中，慢性感染期以及急性感染HBV不存在传染性;小三阳虽然有一定传染性，但并不强。而大三阳则有相当高的传染性。临床中，可以通过定量测定的方式，用以检测HBV-DNA含量水平，进而知晓HBV传染性。

本实验中，将32428份无偿鲜血的血液样本视为研究对象，全面对比了该血液样本中HBV筛查时利用核酸检测以及ELISA检测两种方法的测定结果。最终证实：在开展HBV筛查时，核酸检测法所体现出的特异性、灵敏性明显比ELISA更高，组间数据存在统计学意义（P<0.05）。

由此能够看出，在开展HBVI临床筛查时，应用核酸检测法所得出的结果特异性更强、灵敏度更高，该法应用前景广阔，因此值得进一步推广应用。

参考文献

[1]苏俊，骆冬云.核酸检测与酶联免疫吸附检测在无偿献血血液标本乙肝病毒筛查中的应用价值比较[J].中国乡村医药，2015，22（16）：58-59.

[2]高永庆.化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物比较[J].临床军医杂志，2019，47（2）：215-216.

[3]黄百里.磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标记物的作用评价[J].临床检验杂志（电子版），2019，8（3）：146-147.

[4]Chenyin H，Nizhen J，Man C，et al.Discussion on screening strategyfor human immunodeficiency virus，hepatitis C virus and hepatitis Bin blood donations[J].chinese journal of blood transfusion，2015.

[5]Dong W，Yuan Y，Liang Z，et al.Application of identification nucleicacid testing for screening of hepatitis B virus in blood samples[J].intemational journal of laboratory medicine，2012.