2019年山东省兽医系统实验室检测能力比对

（山东省动物疫病预防与控制中心，山东济南 250010）

兽医系统实验室是指隶属各级畜牧兽医主管部门，承担着动物疫病诊断、监测和检测等任务的各级兽医实验室[1]，是养殖业健康发展的关键技术保障。为规范实验室建设，提升动物疫情监测预警水平，按照农业农村部要求，多个省级动物疫病预防控制机构先后开展检测能力比对，对辖区内兽医系统实验室检测能力进行评价[2-4]。经山东省无规定疫病区建设工作的推进和山东省中长期动物疫病防治规划的实施，山东省所有的市级兽医系统实验室、省内的国家动物疫情测报站以及80%以上的县级兽医系统实验室具备了病原学和血清学检测能力。基于此，2019 年山东省动物疫病预防控制中心（以下称省中心）组织全省98 个兽医系统实验室进行了检测能力比对，要求在规定时间内报送检测结果。比对试验结果总体上客观反映了山东省兽医系统实验室的检测能力和技术水平。

1 材料和方法

1.1 比对项目、方法和依据

本次比对共设置4 个试验项目，分别为非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测、禽流感病毒（AIV）核酸检测、H5 亚型AIV 抗体检测和口蹄疫病毒非结构蛋白（FMDV-NSP）抗体检测。ASFV 核酸检测和AIV 核酸检测采用聚合酶链式反应（PCR），H5 亚型AIV 抗体检测采用血凝抑制试验（HI），FMDV-NSP 抗体检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行。所选择的项目依据国家标准或国家推荐的检测方法。

1.2 盲样设置以及判定标准

比对样品由相应的国家参考实验室或试剂公司提供，经省中心验证后，重新对样品进行编号、分装、分组和发放。每个试验项目设置盲样5 份，包括弱阳性、强阳性和阴性3个不同滴度的样品（表1）。

1.3 盲样发放

样品由参加比对的各实验室派专人统一到省中心领取，全程冷藏运输，并于12 h 内送达，48 h内完成所有试验，并按规定上报结果。

2 结果

2.1 总体情况

全省共98 个兽医系统实验室（市级16 个、国家动物疫情测报站16 个、县级兽医系统实验室66 个）参加了此次检测能力比对（表2）。ASFV核酸检测、AIV 核酸检测、H5 亚型AIV 抗体检测和FMDV-NSP 抗体检测4 个项目，每个试验项目各有盲样490 份，结果实验室正确率分别为87.76%、85.71%、93.88%和97.96%，样品正确率分别为96.73%、95.55%、97.14%和99.95%。

2.2 市级兽医系统实验室比对

16 个市级实验室的比对结果见表3。其中15 个实验室检测结果全部正确，实验室正确率为93.75%；AIV 核酸检测、H5 亚型AIV 抗体检测、FMDV-NSP 抗体检测实验室正确率和样品正确率均为100%，ASFV 核酸检测实验室检测结果正确率和样品正确率分别为93.75%和98.75%。

表1 盲样设置及判定标准

表2 兽医系统实验室检测能力比对结果

2.3 国家动物疫情测报站比对

16 个国家动物疫情测报站的比对结果见表4。其中11 个实验室检测结果全部正确，实验室检测结果正确率为68.75%。ASFV 核酸检测、AIV 核酸检测、H5 亚型AIV 抗体检测和FMDV-NSP 抗体检测的实验室正确率分别为81.25%、87.50%、93.75% 和100%；样品正确率分别为96.25%、95.00%、95.00%和100%。

2.4 县级兽医系统实验室检测能力比对

66 个实验室的监测能力比对结果见表5。其中43 个实验室检测结果完全正确，实验室检测结果正确率为65.15%，ASFV 核酸检测、AIV 核酸检测、H5 亚型AIV 抗体检测和FMDV-NSP 抗体检测的实验室正确率分别为87.88%、81.81%、95.31%和96.97%。

2.5 检测结果存在错误的实验室情况

98 个实验室中，69 个实验室检测结果全部正确。存在错误的29 个实验室中，1 项检测项目存在错误实验室24 个，占错误实验室的82.75%，2个检测项目存在错误的实验室5 个，占错误实验室的17.25%，无3个以上检测项目错误的实验室（表6）。

表3 山东省市级兽医系统实验室检测能力比对结果

表4 国家动物疫情测报站检测能力比对结果

表5 山东省县级系统兽医实验室检测能力比对结果

表6 检测结果错误实验室情况

3 分析与讨论

ASFV 核酸、AIV 核酸、AIV 抗体、FMDVNSP 抗体检测4 个试验项目的比对实验室正确率分别为87.76%、85.71%、93.88% 和97.96%，检测项目正确率均在80%以上，但没有1 个项目的实验室正确率能达到100%。ASFV 核酸和AIV 核酸检测采用PCR 方法进行，正确率最低，分别为87.76%和85.71%，检测结果错误的实验室主要集中在国家动物疫情测报站和县级实验室，仅1 个市级实验室存在ASFV 核酸检测结果的错误；AIV抗体检测采用HI 方法，实验室正确率为93.88%，有6 个实验室检测结果存在1 个滴度以上的误差；FMDV-NSP 抗体检测采用ELISA 方法，实验室正确率为97.96%，有2 个实验室检测结果存在差异。从检测方法来看，ELISA ＞HI ＞PCR。分析其原因，ELISA 作为最常用的血清学检测方法，采用成品的检测试剂盒，操作过程较为简单，主要是加样和洗涤，结果判定采用机器判读，而且只判定阴阳性，没有检测数值判定；HI 是实验室常用的血清学检测方法，但是红细胞、血凝抗原需要实验室自行制备，结果需要操作人员人为判定，存在主观差异；PCR 方法作为病原学检测常用的检测方法，从样品处理、核酸提取、PCR 扩增到结果判定，操作比较复杂，对操作人员技术要求较高，可能造成结果差别较大。从实验室等级分布来看，市级兽医系统实验室＞国家动物疫情测报站＞县级兽医系统实验室，这可能与不同级别实验室的人员、设备、环境、操作规范性不同有关，这也是不同级别兽医实验室检测能力的客观反映。

4 有关思考

4.1 强化专业技术人员队伍力量

实验室检测是一项专业性较强的技术工作，人员的技术水平和规范操作与检测结果的正确性成正比。兽医系统实验室考核管理办法要求兽医系统实验室“具有与所承担任务相适应的专业技术人员和熟悉实验室管理法律法规标准的管理人员，专业技术人员比例不得少于80%”，但现状是实验室人员变动频繁，尤其是县级兽医系统实验室，多数实验室人员身兼多职，仅在实验室有监测任务时才进入实验室进行检测，缺少规范的操作训练和科学的结果分析判断能力。

4.2 加强实验室基础设施建设

“实验室建设符合兽医实验室建设标准，具有与所承担任务相适应的实验场所、仪器设备，且仪器设备配备率和完好率达到100%”。实验室仪器设备陈旧老化，超期服役、灵敏性较差等现象在各级兽医系统实验室尤其是县级实验室普遍存在，这也直接影响检测的数据结果。

4.3 提升实验室管理水平

兽医系统实验室应建立质量手册、程序文件、作业指导书等相关文件，健全各种记录表格，规范实验室工作流程，提升实验室管理和运行水平，促进实验室走向规范化、科学化和常态化的管理。只有这样才能做好动物疫病防控的技术支撑力量。

4.4 推进社会化服务机制建设

兽医系统实验室作为畜牧兽医主管部门的技术支撑，承担着动物疫病检测与诊断、动物疫情和免疫状况监测、动物疫病防控的任务，不应仅开展主动监测任务，也应与所在地的疫情形势结合起来，开展被动监测，与当地的规模化养殖场户等结合起来，开展服务性检测。只有实验室正常运作，才能锻炼出高水平技术队伍，并在实验室运行过程中发现不足，从而持续优化改进。