2018—2020年河南省兽医系统实验室检测能力比对

（河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州 471000）

实验室检测能力比对是农业农村部加强兽医系统实验室管理的主要抓手，也是科学评价和提高实验室管理水平和检测能力的重要手段[1]。为进一步加强河南省兽医系统实验室管理，提高全省兽医系统实验室检测诊断能力，建立省、市、县三级动物疫情监测预警机制和风险评估模型，实施定点、定量、跟踪监测模式[2]，河南省动物疫病预防控制中心（以下称省中心）2018—2020 年均组织开展了全省兽医系统实验室检测能力比对。全省共有18 个省辖市、10 个省直管县/市和117 个县/区级兽医实验室参加，均在规定时间内完成了比对盲样领取、实验室检测、报告出具和结果上报。比对结果客观地反映了河南省兽医系统实验室的技术水平和存在的问题，为进一步完善兽医系统实验室管理体系，健全动物疫情监测预警机制和风险评估模型提供政策建议。

1 材料与方法

1.1 比对项目

按照河南省兽医系统实验室检测能力比对方案的有关要求，2018—2020 年涉及的比对项目共有8 个，分别是禽流感病毒（AIV）抗体检测、H7亚型AIV 抗体检测（HI 试验）、布鲁氏菌抗体检测（试管凝集试验）、猪伪狂犬病病毒（PRV）gB抗体检测（ELISA）、A 型口蹄疫病毒（FMDV）抗体检测（液相阻断ELISA）、FMDV 核酸检测（荧光RT-PCR）、H7 亚型AIV 核酸检测（荧光RTPCR）、塞内卡病毒（SVA）核酸检测（荧光RTPCR）、非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测（荧光PCR）。

1.2 比对方法、标准和试剂

2018—2020 年实验室能力比对试验涉及项目虽略有调整，但均采用国家兽医参考实验室或专业实验室推荐的方法，比对试剂为自行准备（表1）。

表1 实验室比对项目、方法和标准

1.3 比对样品

比对样品由省中心实验室制备、验证、编号和分装，每个检测项目设5 份盲样，各参考值样品数目不定。

1.3.1 H7 亚型AIV 抗体检测样品 由哈尔滨维科生物技术有限公司购入该项目标准阴性血清、阳性血清，稀释得到鸡血清样品5 份，标定参考值分别为6log2、3log2、0log2。

1.3.2 布鲁氏菌抗体检测样品 由中国兽医药品监察所购入该项目标准阴性血清、阳性血清，稀释得到牛血清样品5 份，标定参考值分别为强阳性（1:400）、阳性（1:100）、阴性（＜1:50）。

1.3.3 PRV-gB 抗体检测样品 由IDEXX 公司购入该项目标准阴性血清、阳性血清，稀释得到猪血清样品5 份，标定参考值分别为强阳性、弱阳性、阴性。

1.3.4 A 型FMDV 抗体检测样品 由中国兰州兽医研究所购入该项目阴性血清、阳性血清，稀释得到血清样品5 份，标定参考值分别为强阳性（1:720）、阳性（1:360）、阴性（＜1:16）。

1.3.5 FMDV 核酸检测样品 由中国兰州兽医研究所购入抗原稀释得到样品5 份，标定参考值分别为阳性、阴性。

1.3.6 H7 亚型AIV 核酸检测样品 由哈尔滨维科生物技术有限公司购入该项目标准抗原，稀释得到样品5 份，标定参考值分别为阳性、阴性。

1.3.7 SVA 核酸检测样品 由SVA 灭活稀释得到样品5 份，标定参考值分别为阳性、阴性。

1.3.8 ASFV 核酸检测样品 由中国动物疫病预防控制中心购入质粒稀释得到样品5 份，标定参考值分别为阳性、阴性。

1.4 比对样品的保存和传递

为保证比对样品良好的生物学活性，样品均存放于-20 ℃以下的冰柜中。分发时将样品和试剂放入带有冰袋的泡沫箱中保存，由参加比对的省辖市实验室派专人在规定时间内统一领取，并在12 h内送达参加比对的实验室。

1.5 评判标准

相关比对项目评判标准见表2。

2 比对结果

2.1 省辖市兽医实验室

2018—2020 年18 个省辖市兽医系统实验室参赛率均为100%，2018 年所有项目平均正确率97.30%，12 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，3 个比对项次结果正确率低于60%；2019年所有项目平均正确率为96.98%，12 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，1 个比对项次结果正确率低于60%；2020 年所有项目平均正确率为95.28%，7 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，1 个比对项次结果正确率低于60%（表3）。

2.2 省直管县/市兽医系统实验室

2018—2020 年10 个省直管县/市兽医实验室参赛率均为100%，2018 年所有项目平均正确率为93.05%，3 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，2 个比对项次结果正确率低于60%；2019年所有项目平均正确率为95.37%，3 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，1 个比对项目结次正确率低于60%；2020 年所有项目平均正确率为84.57%，1 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，6 个比对项次结果正确率低于60%（表3）。2.3 县/区级兽医实验室

2018—2020 年117 个县/区兽医实验室参赛率分别为100%、100%、95.87%，2018 年所有项目平均正确率为91.51%，50 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，38 个比对项次结果正确率低于60%；2019 年所有项目平均正确率为91.26%，77 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，27 个比对项次结果正确率低于60%；2020年所有项目平均正确率为88.54%，17 个实验室所有比对项目检测结果全部正确，58 个比对项次结果正确率低于60%（表3）。

表2 比对样品项目判定标准

表3 2018—2020 年各省辖市、直管县/市、县/区级实验室比对结果

3 讨论

3.1 从总体比对结果来看

省辖市兽医实验室2018—2020 年所有项目比对结果正确率超过95%，省直管县/市和县/区级实验室2018—2019 年所有项目比对结果正确率超过90%，2020 年开展加大病原学比对项目后，所有项目比对结果正确率超过80%。这表明全省大部分兽医实验室能够为河南省动物疫情风险评估及动物疫病预防控制体系提供有力支撑。同时也反映了市县两级实验室检测水平存在一定差距，尤其是在直管县/市和各县/区级广泛开展病原学检测项目比对后，差距更为明显，部分实验室尤其是县/区级实验室检测能力有待提高。

3.2 从不同项目检测结果来看

就省辖市、省直管县/市、县/区级兽医实验室各项检测结果的稳定性而言，定性检测结果高于定量检测结果，普通ELISA、固相ELISA 结果高于液相阻断ELISA 结果，表明全省兽医系统实验室技术人员需进一步提升操作水平，同时要加强仪器设备的更新和维护，确保结果的准确性[3]。

3.3 从参加比对项目设置来看

参赛项目按照国家兽医工作要点要求，紧跟当前疫情形势，加大病原学项目的比对力度。2018年省辖市和5 个（50%）省直管县/市兽医实验室参加病原学比对项目；2019 年省辖市、9 个（90%）省直管县/市和67 个（57.26%）县/区级兽医实验室参加病原学比对项目，但县区级仅比对一个病原学项目；2020 年全部省辖市、直管县市和96 个（82.05%）县/区级兽医实验室参加所有病原学比对项目。加上后续继续开展的非洲猪瘟项目比对，目前全省共有18 个省辖市、10 个省直管县/市和109 个县区级实验室具备非洲猪瘟检测资质，其余县/区级实验室也在有序筹备中。但各级要意识到具备病原学检测能力和实际工作需求的差距，积极提升自身检测能力和实验室管理水平[4]。

3.4 从检测试剂来看

比对试验所用检测试剂从开始的全部由省中心派发到部分自行准备再到现在的全部自行准备。虽然试剂完全一致化会减少试剂盒厂家和批次之间差异造成的误差，但逐步实行自行准备试剂以来，全省比对结果并无明显差异，表明河南多数实验室日常使用的试剂稳定性较好，能满足动物疫病检测的需要。个别实验室个别项目存在较大误差的原因可能与其试验操作人员技术不熟练、理论知识不足或实验室仪器配置不到位有关[5]。

4 小结

本次比对试验项目涉及禽流感、口蹄疫、非洲猪瘟等重大动物疫病及布病等人兽共患病；比对方法涉及HI 试验、试管凝集试验、ELISA、液相阻断ELISA、荧光PCR、荧光RT-PCR 等，河南省各级实验室均展现了较高水平，但也暴露了个别检测项目的不足。建议以此为契机，深入分析查找问题，研究制定改进措施，强化实验室日常监管，完善实验室质量管理体系和生物安全管理体系建设，加强检测设备的补充更新，加强对实验室技术人员的专业培训，不断提升其专业水平[6]。