美洲大蠊多肽逆转人肝癌HepG2/ADM细胞多药耐药性的作用及机制研究

李彩琳，吕 鸿，张鸿翰，王彦权，彭 芳

美洲大蠊多肽逆转人肝癌HepG2/ADM细胞多药耐药性的作用及机制研究

李彩琳，吕 鸿，张鸿翰，王彦权，彭 芳*

大理大学药学院，云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南 大理 671000

探讨美洲大蠊多肽（PAE2）逆转人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM的作用及机制。噻唑蓝（MTT）法检测HepG2/ADM细胞对不同化疗药物的耐药性以及PAE2联合化疗药物（5-氟尿嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、奥沙利铂）对HepG2/ADM细胞增殖的影响；激光共聚焦观察PAE2对HepG2/ADM细胞中药物累积的影响；Western blotting法检测PAE2对HepG2/ADM细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X，Bax）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase 9，Caspase-9）、DNA修复酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP）表达的影响；qRT-PCR法检测PAE2对多药耐药蛋白1（multiple drug resistance 1，MDR1）、乳腺癌耐药相关蛋白（breast cancer resistant protein，BCRP）和酶介导的多药耐药途径中蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ，Top Ⅱ）的mRNA表达。PAE2抑制HepG2/ADM细胞增殖，呈时间和剂量相关性。PAE2可逆转HepG2/ADM对不同化疗药物的耐药性；PAE2可上调HepG2/ADM细胞中阿霉素水平，呈剂量相关性。PAE2可显著上调耐药细胞中Bax、cleaved Caspase-9 p37蛋白表达水平（＜0.05、0.01），显著下调Bcl-2蛋白表达水平（＜0.01），对cleaved PARP蛋白表达无显著影响。PAE2均显著下调HepG2/ADM细胞中、、、mRNA水平（＜0.01）。结论 PAE2可以通过减少药物外排、促进细胞凋亡、下调耐药蛋白表达等途径逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性。

美洲大蠊多肽；PAE2；肝癌；多药耐药；HepG2/ADM细胞

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，死亡率位于全球癌症第3位[1]。临床治疗采用手术、放化疗、生物疗法以及多种方法的联用。由于肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药性（multi-drug resistance，MDR），从而降低药物疗效，抗肝癌药物的治疗效果无法显著提高。近48年来，多药耐药性成为生物学家重要的攻克目标[2-3]。研究表明，细胞产生多药耐药相关蛋白（multi-drug resistance-associated protein，MRP），增加P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表达[4]，从而促进药物外排[5-6]。临床上使用P-gp抑制剂来减少肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药性，但由于化疗药物的毒性、药物相互作用等因素疗效并不显著。化学药物逆转多药耐药的作用机制单一、效果不佳，因此寻找高效低毒的药物来逆转肝癌细胞的耐药性尤为重要。

美洲大蠊L. 是蜚蠊科动物体积最大的昆虫，美洲大蠊多肽具有抗炎、镇痛、抗氧化、减轻肝损伤、抗肿瘤等多种药理作用[7-10]。课题组前期研究表明，美洲大蠊粗提物脱脂膏通过促进细胞凋亡、增加细胞内药物聚集，抑制P-gp、MRP、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等表达，从而抑制肿瘤生长、逆转肝癌细胞多药耐药等作用[11-16]。PAE2是从美洲大蠊中分离得到的具有明确氨基酸系列且效果最优的多肽小分子。本研究采用人肝癌细胞HepG2、多药耐药细胞株HepG2/ADM，分别从细胞内药物累积、细胞生长抑制、MRP和酶介导的MDR途径相关蛋白几个方面探讨PAE2逆转HepG2/ADM多药耐药性的作用及机制。

1 材料

1.1 细胞

人肝癌HepG2、HepG2/ADM细胞购自齐氏生物科技有限公司。

1.2 药物与试剂

PAE2（白色粉末，批号P18267，质量分数98.071%）由大理大学药学院张成桂博士提供，以DMEM培养基配制成相应质量浓度用于后续实验；5-氟尿嘧啶（批号WXBC6532V，质量分数＞99%）、青霉素链霉素混合液（批号20190909），购自Sigma公司；阿霉素（批号131102，质量分数98.0%），购自浙江海正药业有限公司；长春新碱（批号SV8300，质量分数≥98.0%）、索拉非尼（批号720N021，质量分数≥99.0%），购自索莱宝公司科技有限公司；奥沙利铂（批号T0164，质量分数≥99.95%），购自TargetMol公司；环磷酰胺（批号0A355A），购自百特国际有限公司；胎牛血清（FBS，批号2166446），购自美国Gibco公司；DMEM培养基（批号F909FA0001）、多药耐药蛋白1（multiple drugresistance 1，MDR1）、BCRP、蛋白激酶C（proteinkinase C，PKC）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ，Top Ⅱ）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase，GAPDH）引物购自上海生工生物工程股份有限公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔免疫球蛋白抗体（批号ab6721），购自美国Abcam公司；B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）兔抗多克隆抗体（批号00071452）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase 9，Caspase-9）兔抗多克隆抗体（批号000744407）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl 2-associated X，Bax）兔抗多克隆抗体（批号00073304）、DNA修复酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP）兔抗多克隆抗体（批号00055579），购自美国Proteintech公司；GAPDH兔抗多克隆抗体（批号072319191203）、cDNA第一链合成试剂盒（批号050720190702）、BCA蛋白测定试剂盒（批号P0010），购自碧云天生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯或实验室常用试剂。

1.3 仪器

3111型CO2培养箱、SN255939型酶标仪（美国Thermo Fisher公司）；TCS SP8型激光共聚焦显微镜（德国徕卡显微系统有限公司）；BB16UV/BB5060UV型垂直流超净台（苏州安泰空气技术有限公司）；BSA24S型电子分析天平（Sartorius公司）；TS100型倒置光学显微镜（Olymplus公司）；SN255939型酶标仪（Thermo公司）；785BR15145型聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（美国Bio-Rad）；TD3型台式低速离心机（湖南湘仪实验仪器开发有限公司）。

2 实验方法

2.1 细胞培养

HepG2、HepG2/ADM细胞用含10% FBS和1%青链霉素双抗的DMEM培养基，HepG2/ADM细胞另加入阿霉素（0.5 μg/L）以维持细胞的耐药性，于37 ℃、5% CO2恒温恒湿培养箱培养。

2.2 PAE2对HepG2/ADM细胞增殖的影响

取对数生长期的HepG2/ADM细胞，胰酶消化后，以2.5×105个/mL接种于96孔板，培养24 h。分别加入不同质量浓度（0.1、1、10、100、1000、10 000 g/mL）PAE2，孵育48 h后弃去培养基，每孔加入100 μL含10% MTT的培养基，继续培养4 h，再加入100 μL DMSO，振荡30 min，待紫色结晶完全溶解后，用全自动酶标仪于570 nm处测定吸光度（）。采用SPSS软件计算PAE2对HepG2/ADM细胞的5%抑制浓度（5% inhibitory concentration，IC5）、10%抑制浓度（10% inhibitory concentration，IC10）、20%抑制浓度（20% inhibitory concentration，IC20），分别作为逆转多药耐药实验的低、中、高剂量。

2.3 HepG2/ADM细胞的多药耐药性以及PAE2对HepG2/ADM细胞耐药性的逆转作用

实验分为对照组、模型组、PAE2（IC20＝183.19 μg/mL）组。对照组取对数生长期的HepG2细胞，其余2组取对数生长期的HepG2/ADM细胞，以2.5×105个/mL接种于96孔板，培养至细胞融合度为70%。各组加入以DMEM培养基配制成相应质量浓度的化疗药物，PAE2组另加入PAE2溶液，同时设试剂对照组和细胞空白对照组。其中化疗药物质量浓度分别为5-氟尿嘧啶（10、20、40、80、160 μg/mL）、阿霉素（0.31、0.63、1.25、2.50、5.00 μg/mL）、环磷酰胺（40、80、160、320、640 μg/mL）、长春新碱（5、10、20、40、80 μg/mL）、奥沙利铂（10、20、40、80、160 μg/mL）。培养48 h后，每孔加入20 μL MTT，继续培养4 h，每孔加入100 μL DMSO，振荡30 min，待紫色结晶完全溶解，采用全自动酶标仪于570 nm处测定值，计算细胞的生长抑制率、耐药倍数和逆转倍数[17]。

生长抑制率＝1－(给药－试剂对照)/(细胞空白对照－试剂对照)

耐药倍数＝耐药细胞IC50/敏感细胞IC50

逆转倍数＝耐药细胞IC50/PAE2处理后耐药细胞IC50

2.4 PAE2对HepG2/ADM细胞药物累积的影响

实验分为对照组、模型组、索拉非尼（2.40 μg/mL，以DMEM培养基配制成相应质量浓度）组、PAE2低剂量（IC5＝3.21 μg/mL）组、PAE2中剂量（IC10＝22.19 μg/mL）组、PAE2高剂量（IC20＝183.19 μg/mL）组。对照组取对数生长期的HepG2细胞，其余各组取HepG2/ADM细胞，以8×106个/mL接种于直径3 cm、含细胞爬片的小皿中，培养24 h。除对照和模型组外，其余组分别加入对应药物，培养48 h。PBS洗涤，加入含阿霉素（5 μg/mL）的培养基，继续培养2 h；用冷PBS洗涤3次，每次5 min，加入4%多聚甲醛避光固定30 min；用冷PBS洗涤2次，每次5 min，加入DAPI染色5 min；用冷PBS洗涤3次，每次5 min；用抗荧光淬灭封片剂封片，避光保存，次日于激光共聚焦显微镜下拍照观察。镜下ADM阳性表达为红色荧光，细胞核呈蓝色荧光。采用Image J 6.0软件计算阿霉素阳性细胞的荧光强度值，荧光强度值越大表明药物含量越高。

2.5 PAE2对HepG2/ADM细胞凋亡相关蛋白表达的影响

实验分为对照组、模型组、索拉非尼（2.40 μg/mL）组、PAE2低剂量（3.21 μg/mL）组、PAE2中剂量（22.19 μg/mL）组、PAE2高剂量（183.19 μg/mL）组。对照组取对数生长期的HepG2细胞，其余各组取HepG2/ADM细胞，以7.5×105个/孔接种于24孔板中，培养24 h。除对照和模型组外，其余组分别加入对应药物，培养48 h。以PBS洗涤后加入50 μL含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，于冰上孵育30 min，16 100×，离心5 min，收集上清，采用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白的质量浓度。蛋白样品经SDS-PAGE电泳分离，转至PVDF膜，以5%脱脂牛奶封闭2 h，分别加入Bcl-2（1∶1500）、Caspase-9（1∶800）、Bax（1∶2000）、PARP（1∶500）、GAPDH（1∶5000）抗体，于4 ℃孵育过夜；加入辣根过氧化物酶标记山羊抗兔免疫球蛋白抗体（1∶500），室温孵育2 h，于凝胶成像仪显影。采用Image J 6.0软件分析蛋白条带灰度值，以目的蛋白条带与GAPDH蛋白条带灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平。

2.6 PAE2对HepG2/ADM细胞多药耐药和酶介导的MDR途径相关蛋白mRNA水平的影响

实验分为对照组、模型组、索拉非尼（2.40 μg/mL）组、PAE2低剂量（3.21 μg/mL）组、PAE2中剂量（22.19 μg/mL）组、PAE2高剂量（183.19 μg/mL）组。对照组取对数生长期的HepG2细胞，其余各组取HepG2/ADM细胞，以2.4×105个/孔接种于6孔板中，培养24 h。除对照和模型组外，其余组分别加入对应药物，培养48 h。用Trizol试剂提取总RNA，测定其质量浓度和纯度；按cDNA第一链合成试剂盒说明书操作合成cDNA；以cDNA为模板进行qRT-PCR扩增，反应程序：95 ℃预变性2 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，40 个循环。引物序列：上游引物5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’，下游引物5’-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’；上游引物5’-TATAGCTCAGATCATTGTCACAGTC-3’，下游引物5’-GTTGGTCGTCAGGAAGAAGAG-3’；上游引物5’-CCCAAACATTGACAAATCCTAACC-3’，下游引物5’-CAACCAAGGAGGGTACCAGATG-3’；上游引物5’-GAAACGGAATCCTTGGTCAGAT-3’，下游引物5’-TTTCGGCTGCTGCTCTCCTA-3’；上游引物5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3’，下游引物5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。

2.7 统计学方法

3 结果

3.1 细胞形态

如图1所示，和HepG2细胞相比，HepG2/ADM细胞大小不等且有明显触角。

3.2 PAE2对HepG2/ADM细胞增殖的影响

如图2所示，选取细胞倍增时间和较小抑制浓度作为后续实验药物剂量，采用药物作用48 h的IC5（3.21 μg/mL）、IC10（22.19 μg/mL）、IC20（183.19 μg/mL）分别作为PAE2低、中、高剂量。

图1 HepG2 (A) 和HepG2/ADM (B) 细胞形态(×200)

图2 PAE2对HepG2/ADM细胞增殖的影响()

3.3 HepG2/ADM细胞的多药耐药性以及PAE2对HepG2/ADM细胞耐药性的逆转作用

如图3所示，与对照组相比，化疗药物对HepG2/ADM细胞生长的抑制作用较弱，HepG2/ADM细胞对不同化疗药物均存在耐药性；PAE2联合化疗药物可增强对HepG2/ADM细胞生长的抑制作用，HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性降低。如表1所示，HepG2/ADM细胞对5-氟尿嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、奥沙利铂的耐药倍数分别为2.18、1.87、4.78、3.10、2.00，PAE2对5-氟尿嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、奥沙利铂的逆转倍数分别为1.15、1.16、1.25、1.94、1.39。表明PAE2可逆转HepG2/ADM细胞对不同化疗药物的多药耐药性。

图3 HepG2/ADM细胞对不同化疗药物的多药耐药性以及PAE2对HepG2/ADM细胞耐药性的逆转作用

表1 HepG2/ADM对不同化疗药物的耐药倍数以及PAE2对HepG2/ADM细胞耐药性的逆转倍数()

与对照组比较：##＜0.01；与模型组比较：*＜0.05**＜0.01

##< 0.01control group;*< 0.05**< 0.01model group

3.4 PAE2对HepG2/ADM细胞药物累积的影响

利用阿霉素自发荧光的特点，观察阿霉素在细胞中的累积。为了维持细胞耐药性，用含阿霉素的培养基培养细胞，因此HepG2/ADM细胞荧光强于HepG2。如图4和表2所示，与对照组相比，其余各组细胞中阿霉素累积水平明显增加（＜0.05、0.01）；与模型组相比，PAE2中、高剂量组细胞中阿霉素累积水平显著增加（＜0.01）。表明PAE2可抑制HepG2/ADM细胞对药物的外排作用，HepG2/ADM细胞耐药性减弱。

图4 PAE2对HepG2/ADM细胞药物累积的影响(×400)

表2 PAE2对HepG2/ADM细胞药物累积的影响()

与对照组比较：#＜0.05##＜0.01；与模型组比较：**＜0.01

#< 0.05##< 0.01control group;**< 0.01model group

3.5 PAE2对HepG2/ADM细胞凋亡相关蛋白表达的影响

如图5所示，与对照组比较，模型组Bcl-2、cleaved Capase-9 p37、cleaved PARP蛋白表达显著升高（＜0.01），Bax蛋白表达无显著变化；与模型组比较，PAE2可显著升高Bax、cleaved Capase-9 p37蛋白表达（＜0.05、0.01），并降低Bcl-2蛋白表达（＜0.05），呈剂量相关性，但cleaved PARP蛋白表达无显著变化。

3.6 PAE2对HepG2/ADM细胞多药耐药和酶介导的MDR途径相关蛋白mRNA水平的影响

如表3所示，与对照比比较，模型组多药耐药相关蛋白、、mRNA水平显著升高（＜0.01），mRNA水平显著降低（＜0.01）；与模型组比较，PAE2显著下调、、mRNA水平（＜0.01），显著升高mRNA水平（＜0.01），降低HepG2/ADM细胞的耐药性。

与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与索拉非尼组比较：▲P＜0.05

表3 PAE2对HepG2/ADM细胞多药耐药和酶介导的MDR途径相关蛋白mRNA水平的影响()

与对照组比较：##＜0.01；与模型组比较：**＜0.01；与索拉非尼组比较：▲＜0.05

##< 0.01control group;**< 0.01model group;▲< 0.05sorafenib group

4 讨论

肝癌致死率极高，由于临床诊断发现较晚，手术切除疗效不佳[18]，且易对化疗药物产生多药耐药性。5-氟尿嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、奥沙利铂为临床常用且易产生耐药的化疗药物。5-氟尿嘧啶通过抑制胸腺核苷合成酶，从而抑制DNA合成，发挥抗肿瘤作用；阿霉素可抑制Top Ⅰ活性从而干扰转录、抑制RNA合成、干扰DNA复制，影响处于各个周期的细胞；长春新碱可以抑制微管蛋白的聚合从而影响纺锤微管的形成，使细胞终止于细胞中期，从而影响肿瘤细胞的生长；环磷酰胺是氮芥类抗肿瘤药，经过细胞内磷酸酶水解为氮芥后发挥细胞毒性，杀死肿瘤细胞；奥沙利铂为铂类抗肿瘤药，可与DNA形成交叉连接，抑制DNA的复制和转录。虽然各种化疗药物的作用机制不同，但临床应用表明肿瘤对各种化疗药物均存在耐药性。肝癌的多药耐药一直是临床治疗的一大难题，肝癌的多药耐药是多机制、多因素作用的结果[19]。药物产生多药耐药的机制主要包括耐药蛋白介导的MDR（MRP、BCRP、LRP）、酶系统异常导致的MDR（Top II、PKC）、DNA修复机制、微管与微管蛋白异常导致的MDR、凋亡通路受阻等[20-22]。化疗药物和生物药逆转肝癌多药耐药的作用机制单一，中药具有多靶点、不良反应小等特点，研究前景广阔。课题组前期研究发现美洲大蠊具有抗肿瘤活性，可逆转肿瘤的多药耐药。本研究通过比较HepG2、耐药细胞HepG2/ADM的形态差异以及HepG2/ADM细胞对5种临床常用化疗药物的耐药性，确定HepG2/ADM细胞的多药耐药作用。在逆转MDR实验中，选择PAE2的安全剂量IC20与化疗药物联用，确定PAE2具有逆转HepG2/ADM细胞多药耐药的作用。由于HepG2/ADM细胞可增加药物外排，本研究利用阿霉素自发红色荧光的特点，采用激光共聚焦观察HepG2/ADM细胞中阿霉素的累积，结果显示，PAE2组细胞中红色荧光明显增多，表明PAE2减少了药物外排。

细胞凋亡是受多基因控制的细胞自主、有序的死亡，包括抑癌基因p53、Caspase家族、Bcl-2家族等[7]。Bax是人体最主要的凋亡基因，属于Bcl-2家族，编码的Bax蛋白可与Bcl-2形成异二聚体，对Bcl-2产生抑制作用。Bcl-2是细胞凋亡中重要的抑凋亡因子，可增强细胞对大多数DNA损伤因子的抵抗性，抑制大多数化疗药物引起的靶细胞凋亡，但对细胞损伤和DNA修复没有影响。Caspase-9是Caspase家族的重要成员，受到凋亡刺激时可生成放大凋亡反应的p37亚基，裂解的Caspase-9进一步加工其他Caspase成员如Caspase-3、Caspase-7，启动Caspase级联，导致细胞凋亡。PARP是一类涉及DNA损伤反应的核蛋白酶家族，由PARP剪切的cleaved PARP被认为是细胞凋亡的一个重要指标[23-25]。本研究结果显示，PAE2可显著上调HepG2/ADM细胞Bax、cleaved Caspase-9 p37蛋白表达，显著下调Bcl-2蛋白表达。表明PAE2可上调促凋亡蛋白、下调抗凋亡蛋白，加速细胞凋亡。本研究发现与HepG2细胞相比，HepG2/ADM细胞中促凋亡相关蛋白表达水平显著增加，推测这可能是耐药细胞的一种自我保护机制，耐药细胞能量代谢快，通过促进部分细胞凋亡，以获得更多能量，后续研究有待进一步验证。

PKC是一种磷脂依赖性的胞质丝氨酸/苏氨酸激酶，参与细胞内信号转导[23]。研究表明，细胞的多药耐药与BCRP、Top Ⅱ联系密切[24-25]。结果显示，PAE2显著降低HepG2/ADM细胞中多药耐药相关蛋白（）、酶介导的MDR途径中相关因子（、）mRNA水平，降低HepG2/ADM细胞的多药耐药性。多药耐药阻碍现代医学科学发展，且细胞耐药机制复杂。PAE2成分明确、作用靶点多样，本研究从逆转多药耐药的角度为临床克服多药耐药提供了一种新的可能，为其临床研究奠定基础。课题组后续将对多药耐药的体内研究、能量代谢等进一步探究。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Effect and mechanism of polypeptide fromon reversing multi-drug resistance of hepatocellular carcinoma in HepG2/ADM cells

LI Cai-lin, LYU Hong, ZHANG Hong-han, WANG Yan-quan, PENG Fang

Yunnan Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D,College of Pharmacy, Dali University, Dali 671000, China

To investigate the reverse effect of polypeptide from Meizhoudalian () (PAE2) on multi-drug resistance of HepG2/ADM cells.The drug resistance of HepG2/ADM cells to different chemotherapeutic drugs and effects of PAE2combined with chemotherapeutic drugs on proliferation of HepG2/ADM cells were detected by MTT; The influence of PAE2on drug accumulation was observed by Laser Scanning Confocal Microscopy; The expression of Bcl-2 associated X (Bax), B-cell lymphoma-2 (Bcl-2), cysteinyl aspartate specific proteinase 9 (Caspase-9) and poly ADP-ribose polymerase (PARP) were detected by Western blotting; qRT-PCR was used to detect the mRNA expression of multiple drug resistance 1 (MDR1), breast cancer resistant protein (BCRP), protein kinase C (PKC) and topoisomerase Ⅱ (Top Ⅱ).Growth of HepG2/ADM cells was inhibited by PAE2with a time and dose dependent. PAE2reversed the multi-drug resistance of HepG2/ADM cells to different chemotherapeutic drugs; Level of doxorubicin in drug-resistant cells was increased by PAE2in a dose-dependent manner. Expressions of Bax, cleaved Caspase-9 p37 were significantly increased (< 0.05,0.01) and the expression of Bcl-2 was significantly decreased by PAE2in HepG2/ADM cells (< 0.01), the expression of cleaved PARP had no changed. Levels of,,andmRNA in HepG2/ADM cells were significantly reduced by PAE2.PAE2reversed the multidrug resistance of HepG2/ADM cells by reducing drug efflux, promoting cell apoptosis and reducing the expressions of drug-resistant protein.

Meizhoudalian () polypeptide; PAE2; hepatocellular carcinoma; multi-drug resistance; HepG2/ADM cells

R285.5

A

0253 - 2670(2021)01 - 0152 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.019

2020-07-10

国家自然科学基金资助项目（81560600）；云南省应用基础研究重点项目（2017FH001-010）

李彩琳（1993—），云南曲靖人，硕士研究生，研究方向为抗肿瘤药理学。E-mail: 253550890@qq.com

彭 芳，教授，硕士，研究方向为抗肿瘤药理学。Tel: (0872)2257392 E-mail: pengfang6556@aliyun.com

[责任编辑 李亚楠]