肺癌病人血清CD147表达及临床意义 *

乔晓娟, 邢智伟, 赵美娜, 马补换, 孙维廷, 刘彩霞

(内蒙古医科大学附属医院,内蒙古呼和浩特010050)

CD147分子,又称基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrixmetallo-proteinase inducer,EMMPRIN),可刺激成纤维细胞产生大量基质金属蛋白酶从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移[1,2]。目前对肺癌病人血清中CD147表达临床意义尚不明确。本研究拟通过检测肺癌病人血清中CD147表达水平,分析其与临床病理因素及预后因素的关系,明确其在肺癌诊断及预后中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤科、胸外科2013-08～2014-06住院的初治肺癌病人82例为研究对象。均未接受手术、化疗、放疗、靶向及生物治疗。所有病人均经病理和(或)细胞学确诊。按美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)2010年第7版分期系统进行pTNM或cTNM分期。同期采集30例健康志愿者血清标本作为对照组。每一位入组病人、健康志愿者均知情同意并签署留取血液标本知情同意书。每一份标本3000转/min钟离心10～15min后,收集血清置于-80℃冰箱保存,集中进行检测。

1.2 主要试剂和仪器

CD147ELIAS 试剂盒购于武汉优尔生公司,BIO-RAD Mode1680酶标仪购于美国BIO-RAD公司。

1.3 实验方法

ELISA法检测血清中CD147水平。分别设标准孔、待测样品孔、空白孔,向相应的孔中加入稀释好的标准品或血清样品,每个标准品及样品均做复孔,100μL每孔。37℃温育2h,弃去液体,甩干。每孔加检测溶液A工作液100μL,37℃温育1h,洗板3次。每孔加检测溶液B工作液100μL,37℃温育30min,洗板5次。每孔加底物溶液90μL,37℃避光显色。每孔加终止溶液50μL,终止反应。用酶标仪在450nm波长测量各孔的OD值,根据酶标仪所测标准品OD值及对应浓度,制作出标准曲线及回归方程式,将样本的OD值代入方程,计算出样本浓度,乘以稀释倍数,得出血清中CD147的实际浓度。

1.4 随访

采用门诊随诊和电话随访方式进行。随访时间截止至2017-06-30,仍存活病人按末次随访日期作为截尾数据。

1.5 统计学分析

所有数据经统计软件SPSS19.0进行统计学分析,非正态分布的数据用中位数和范围表示。分析分类变量之间关系,应用χ2检验。分析计量参数之间是否有差异,应用非参数检验。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的绘制应用SPSS19.0软件进行操作,最佳临界值(cut-off值)的确定在Excel表格中进行。应用 Kaplan-Meier 法计算生存曲线,并应用 Log-rank 检验进行比较。本研究以P<0.05(双侧检验)为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌病人及正常人血清CD147水平的检测

ELISA法测定82例肺癌病人和30例健康志愿者血清CD147水平,结果显示,肺癌病人血清CD147水平为563.77(范围,50.32-910.80)pg/mL,健康志愿者血清CD147水平为381.05(范围:43.38-474.52)pg/mL,肺癌病人血清CD147水平高于健康志愿者,两者差异具有统计学意义(P<0.001)。

应用SPSS19.0绘制ROC曲线(见图1),ROC曲线下面积为0.876(95%CI:0.812-0.939),曲线下面积差异有统计学意义(P<0.001)。血清CD147的cut-off值为466.14pg/mL时,敏感性:75.6%,特异性:96.2%,阳性预测值98.4%,阴性预测值59.1%。

以cut-off值466.14pg/mL为标准,肺癌病人血清CD147水平升高者占75.6%(62/82),仅有3.3%(1/30)健康志愿者血清CD147水平升高,肺癌病人血清CD147阳性率高于健康对照组,二者差异有统计学意义(P <0.001)。

2.2 肺癌病人血清CD147水平与临床特征的关系

肺癌病人血清CD147水平与远处转移及TNM分期相关,与病人性别、年龄、吸烟状态、PS评分、组织学类型、原发肿瘤大小、区域淋巴结转移无相关性(P>0.05)。M1病人血清CD147水平571.35(范围，50.32-898.71)Pg/mL显著高于M0病人489.72(范围，50.32-898.71)Pg/mL,差异有统计学意义(P=0.037)。Ⅳ期病人血清CD147水平显著高于Ⅲ期病人,差异均有统计学意义(P=0.037)。

2.3 不同病理类型病人血清CD147水平与临床特征关系

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)病人血清CD147水平与病人性别、年龄、吸烟状态、PS评分、组织学类型、原发肿瘤大小、区域淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无相关性(P >0.05)。

入组的SCLC病人29例,为Ⅲ期和Ⅳ期接受化疗病人,无T1及N0、N1病人。SCLC病人血清CD147水平与远处转移及TNM分期相关,M1病人血清CD147水平显著高于M0病人,差异有统计学意义(P=0.043)。Ⅳ期病人血清CD147水平显著高于Ⅲ期病人,差异均有统计学意义(P=0.043)。而SCLC病人血清CD147水平性别、年龄、吸烟状态、PS评分、原发肿瘤大小、区域淋巴结转移均无相关性(P >0.05)。

2.4 肺癌病人血清CD147表达与肺癌病人生存的关系

以cut-off值466.14pg/mL为标准,将肺癌病人分为CD147低表达组和CD147高表达组,进行3年随访,生存分析结果显示血清CD147表达与肺癌病人生存无关(P>0.05)。生存曲线提示与CD147高表达组比较,CD147低表达组病人生存期有延长趋势,考虑CD147表达水平可能与肺癌病人的远期生存相关(见图2)。

3 讨论

恶性肿瘤的侵袭和转移往往是肿瘤治疗失败的主要原因,其相关的细胞和分子机制极为复杂[3]。近年来,在肺癌侵袭转移分子机制的研究中发现许多与肺癌侵袭转移有关的物质。CD147分子,是一种高表达于肿瘤细胞表面的糖蛋白,来源于人肺癌细胞系LX-1,属于免疫球蛋白超家族。CD147在肿瘤发展过程中起到重要调控作用,通过一种和(或)多种信号通路使MMPs 的分泌增加,进而促使肿瘤细胞生长及侵袭。并且能调节肿瘤细胞增生和血管形成[4]。

目前研究表明:CD147在胃癌、头颈部鳞癌等多种恶性肿瘤组织中表达增高,与肿瘤发生及发展密切相关[5,6]。Xu[7]的研究结果显示:非小细胞肺癌组织中CD147高表达,与肿瘤的进展和预后相关。袁铃[8]的研究同样提示:非小细胞肺癌组织中CD147表达明显高于癌旁组织及其相对应的正常肺组织,结合临床病理特征发现CD147表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、是否伴淋巴结转移及TNM 分期密切相关。但目前对肺癌病人血清中CD147表达临床意义尚不明确。本研究应用ELISA法检测肺癌病人血清中CD147水平,分析其与临床病理参数的关系,探讨肺癌病人血清CD147水平的临床意义。

本实验结果显示肺癌病人无论是血清CD147水平还是血清CD147阳性率均显著高于健康对照组,血清CD147水平有可能作为肺癌诊断的分子标志物。血清CD147诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.876,敏感性:75.6%,特异性:96.2%,提示血清CD147在肺癌中的诊断效能较好。

本研究检测了肺癌病人血清CD147水平,结果显示血清CD147水平与远处转移及TNM分期相关,随着远处转移的出现及TNM分期的进展,血清CD147的水平增高,提示CD147在肿瘤的进展中发挥着重要作用。

进一步分析不同病理类型血清CD147水平与临床特征关系,结果显示:NSCLC病人血清CD147水平与临床特征无关,而SCLC病人血清CD147水平与远处转移及TNM分期相关。与NSCLC相比,SCLC具有肿瘤倍增速度快,恶性程度高,较早发生广泛转移,具有更高的侵袭性,CDl47通过刺激成纤维细胞产生大量基质金属蛋白酶从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移,有可能在SCLC发展过程中起重要作用。

进一步对肺癌病人血清CD147表达水平与生存关系的研究显示,血清CD147低表达组与高表达组生存期的差异无统计学意义(P=0.155)。但CD147低表达组病人生存期有延长趋势,考虑CD147表达水平可能与肺癌病人的远期生存相关。

本实验结果提示血清CD147水平有可能作为肺癌诊断的分子标志物。血清CD147表达水平与远处转移及TNM分期有关,且分层分析显示高侵袭性SCLC病人血清CD147表达水平与远处转移及TNM分期同样相关,血清CD147水平有可能是小细胞肺癌预后的标志物,有待进一步探究。因本实验样本量少,实验结论只有一定的参考意义,只有扩大样本量,才能更精确分析CD147在肺癌诊断及预后中的价值。