化学发光法检测HBsAg临界值结果的研究及处理

南京市高淳人民医院（211300）孙颖

血液中乙肝标志物的种类较多，其中表面抗原（HBsAg)是最主要的，HBsAg阳性是确诊乙型肝炎的基本条件。由于人类个体差异及感染时间长短等因素，人体内HBsAg含量存在高低差异，我国低浓度的 HBsAg人群在乙肝患者中，占有一定的比例，约占阳性的23%，因此，不能轻视这部分人群，如未及时检出，乙肝病毒可能会通过输血、手术等途径扩散开来，造成疾病的传播，低浓度HBsAg患者的发现对临床选择正确治疗手段甚至医生自我保护有重大意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2016年6月～12月HBsAg 定量结果为临界值(0.05 IU/ml≤HBsAg≤2IU/m1)的样本共30份。

1.2 试剂与方法

1.2.1 仪器试剂 美国雅培的ARCHITECT IR2000全自动化学发光微粒子免疫分析仪，原装配套HBsAg试剂及确认试剂，按保养手册进行仪器的保养及维护，每日检测质控，使用安图专用发光定量质控品。

1.2.2 测定方法 采用化学发光微粒子免疫检测技术测定HBsAg，当出现结果0.05～2IU/ml时，将标本用最大离心力重新离心10min以上，再次测定HBsAg，如结果<0.05IU/ml，则报告HBsAg阴性；如检测结果仍落在0.05～2之间，则进行HBsAg抗体中和确认试验，HBsAg确认试验是利用CMIA技术，同时测定中和及未中和标本的HBsAg的S/CO值，如果未中和标本信号S/CO≥0.70，且中和标本的RLU与未中和标本相比减少了>50%时，即可确认HBsAg阳性。

2 结果

3 0 例H B s A g 定量检测初次结果为0.06～1.43，平均0.55，均为临界结果，标本经重新离心10min以上，再次检测HBsAg，结果为0.07～1.87，平均0.54，用抗体中和确认试验进行HBsAg确认，按照判断标准中和率下降>50%为确认试验阳性，30例标本中有28例符合标准，HBsAg确认为阳性，2例未确认，确认试验阳率高达93%。

3 讨论

乙肝是我国最常见的肝脏疾病，临床常常应用抗原抗体特异性结合原理的方法来测定HBsAg及相关抗体，其检测结果是诊断乙肝的基础。由于检测方法的灵敏度各有差异，导致一些低浓度HBsAg不能被检测出，尤其是临界值。据研究[1]低浓度HBsAg的出现原因较复杂，可能是以下3个方面：①患者处于乙肝感染的隐匿期、急性乙肝恢复期、感染后自身痊愈的后期携带者，此时病毒是低水平复制，并且可能存在血清学转换，出现抗体[2]。②病毒的变异会使HBsAg的抗原性发生改变，导致灵敏度不够，结果表现为弱阳性，体内的HBsAg含量实际很高。③因机体的免疫系统对病毒的应答反应表现为免疫耐受，导致表面抗原水平表达较低。

日常工作中，本院每月检测的近2000例HBsAg约有3～5例为低浓度，约占总数的1%～2%，比例虽不高，日积月累，将是一份大数据，怎样准确报告，避免引起纠纷，是我们必须面对的问题，按照检验操作规程，当结果存在疑问时，应该进行抗体中和确认试验或HBV-DNA检测以验证结果的可靠性。但是，由于进口试剂成本以及标本数量不能满足日常检测的需要，HBsAg确认试验未能开展，我们与试剂厂家联系，最终予以检测。

本次研究结果显示，30例标本大多数能被特异性抗体吸附，证明患者体内确实存在病毒抗原，HBsAg阳性为真实结果；2例不能进行确认者，具体原因不能查明，有研究[3]提出可能是因为血中难以消失的物质的干扰以及抗体中和试验的本身敏感性对检测的干扰，在HBsAg浓度很低时，会导致中和试验呈假阴性。同时，雅培试剂说明书上也特别提出：因为早期感染或早期恢复，非特异性结合可能掩盖样品中低浓度的HBsAg，导致假阴性，对此，我们建议对HBsAg定量结果为阳性而确认试验阴性者，应建立跟踪随访记录，掌握HBsAg在病情变化中的改变。

随着时代的发展，人们法律意识日益增强，CMIA法检测HBsAg结果为弱阳性的标本，换一种灵敏度不及CMIA的方法来检测，很可能会出现阴性结果，这种时阴时阳的结果容易引起医患纠纷，必须引起足够的重视。所以本次研究建议在条件允许的情况下，特别是当HBsAg为低浓度值(<2IU/ml)时，应进行HBsAg抗体中和确认试验，以保证结果的准确性，避免差错的发生。