岩黄连与抗生素配伍后对金黄色葡萄球菌体外抑菌效果的比较

2020-12-24 02:34孙桃桃钟枝梅杨雨晴单浩浩左瑞华
关键词:磷霉素青霉素黄连

孙桃桃,蒋 平,钟枝梅,方 妍,杨雨晴,单浩浩,左瑞华

(1.皖西学院生物与制药工程学院,安徽,六安237012;2.安徽省中药资源保护与持续利用工程实验室,安徽,六安237012)

近年来,抗生素药物的快速发展和广泛使用,使细菌性感染类疾病在治疗过程中出现了很多问题,如细菌耐药性和耐药菌的传播等[1]。何源等[2]对重庆市生牛乳中金黄色葡萄球菌耐药谱调查发现,检出的金黄色葡萄球菌对于青霉素G、红霉素、克林霉素、四环素、头孢他啶、苯唑西林、头孢喹肟、诺氟沙星、环丙沙星等均有不同程度的耐药,其中对青霉素G 耐药性最强,高达89.19%,其次为红霉素、克林霉素,分别为62.16%,60.16%,而四重耐药的金黄色葡萄球菌高达35.14%。可见细菌耐药性之严重,导致在临床中可用的抗生素种类越来越少。

虽然抗菌中药的使用,可以有效缓解细菌耐药性等问题,但由于中药的抗菌效率不及抗生素,导致其在临床抗感染过程中很少单独使用;而大多与抗生素一起联合应用于抗感染治疗。谢思露等[3]研究发现,水飞蓟宾和青霉素联合用药,对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌有相加作用,水飞蓟宾和红霉素联合用药对金黄色葡萄球菌的抑菌有相加作用,对表皮葡萄球菌的抑菌效果有协同作用。这说明中药与西药联用可以有效增强临床抗菌药效,降低抗生素的使用量。但是在临床应用时应注意中药和西药之间的配伍效应。

岩黄连为罂粟目罂粟科中草药,具有清热解毒、利湿、止痛止血等功效,对腹泻、痢疾等疾病有很好疗效。同时也有研究报道,岩黄连内的巴马汀成分对肠道致病菌和化脓性球菌也有明显抑菌作用[4]。但是,岩黄连对金黄色葡萄球菌的抑菌效果及其与抗生素的联合抑菌效果却不知晓。因此,本试验主要探究岩黄连及其与抗生素的联合用药后对金黄色葡萄球菌抑菌效果,以期对细菌性疾病的治疗提供参考。

1 材料

1.1 菌种

金黄色葡萄球菌标准株(CMCC 26112),由北京豫鼎鑫捷科技有限公司惠赠。

1.2 药品和试剂

岩黄连,购自成都潽禧草堂;注射用青霉素钠,批号:H45021515,购自于桂林南药股份有限公司;注射用头孢拉定,批号:H20067737,购自于山东鲁抗医药股份有限公司;注射用磷霉素钠,批号H43020770,购自于湖南科伦制药有限公司;左氧氟沙星,批号:170714022-A,购自六安华源制药有限公司。LB琼脂,批号:20171030-00,杭州微生物试剂有限公司;LB液体,批号:20170921,青岛海博生物科技有限公司;MH 琼脂,货号:HB6232,青岛海博生物技术有限公司。

2 方法

2.1 岩黄连药液的制备

取适量干燥的岩黄连饮片,研磨,过80目筛,准确称取岩黄连粉末50 g 置于烧杯中,加250 mL纯水,混匀,浸泡30 min,进行2次水提,合并2次滤液,离心除质,减压浓缩,加水定容,使岩黄连生药浓度为1 g/mL,高压灭菌,置于4 ℃保存。

2.2 抗生素工作液的配制

将头孢拉定、磷霉素钠和青霉素用生理盐水配成终浓度为0.5 mg/mL。而左氧氟沙星原液浓度为0.5 mg/mL。

2.3 培养基的配制

根据说明书配置LB琼脂培养基和LB肉汤培养基,调节PH,高压灭菌;量取配好的MH琼脂培养基5 mL 于离心管中,高压灭菌后,备用。

2.4 悬菌液的制备

按照四区划线法将活化的金黄色葡萄球菌菌液接种到LB琼脂培养基上,37℃,培养24 h,使用接种针挑取1~2个细菌菌落接种到LB液体培养基中,在恒温条件下,摇床摇动24 h。血球计数板计数,将金黄色葡萄球菌浓度稀释到1.5×105CFU/mL。

2.5 最小抑菌浓度(MIC)测定

按照美国临床实验室国家标准委员会(NCCLS)推荐的方法,向已灭菌的MH琼脂培养基中加入抗生素工作液和岩黄连药液,使得抗生素终浓度为:16、8、4、2、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL,岩黄连药液的终浓度为320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25 mg/mL。每次实验分别作3个阴性对照和阳性对照组。混匀,加入到6孔板里,待冷凝备用。

分别向含药培养基和阳性对照组各孔中加入100 μL 菌液(1.5×105CFU/mL),阴性对照组加入等量的生理盐水。涂布后,37℃培养,24 h 后观察试验结果,本试验以无金黄色葡萄球菌生长的浓度为MIC。每个试验进行3 次重复,每个浓度也做3次重复。

2.6 体外联合抑菌试验(FIC)

采用棋盘稀释法来分别测定岩黄连药液与头孢拉定、左氧氟沙星、青霉素、磷霉素联合使用时对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,以各药单测时MIC值的2倍、1倍、0.5倍、0.25倍、0.125倍组合,测定步骤同“2.5最小抑菌浓度( MIC)测定”。并按照下面FIC计算公式计算其FIC,每个试验进行3次重复,每个浓度也做3次重复。

表1 配伍效应分级标准[5]Table 1 Classification standard of compatibility of medicines

3 结果

如表2所示,头孢拉定、左氧氟沙星、青霉素、磷霉素、岩黄连药液对金黄色葡萄球菌的MIC分别为1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.25 μg/mL、0.5 μg/mL、20 mg/mL。根据FIC值的判断标准,岩黄连与磷霉素联用后1<FIC 2≦,表现为无关作用;岩黄连与头孢拉定、青霉素、左氧氟沙星联用后FIC 0.5≦ ,表现为协同作用。

表2 岩黄连与四种抗生素联合用药时对金黄色葡萄球菌体外抑菌作用Table 2 Inhibitory effect of CSB combined with four antibiotics on Staphylococcus aureus in vitro

4 讨论

岩黄连,其味苦、性凉,具有清热解毒、利湿、止痛止血等功效,对腹泻、痢疾、口舌糜烂等病症具有很好疗效。王奇志等[6]研究发现,岩黄连中含有去氢岩黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄连碱等成分。Aghayan 等[7]研究发现,小檗碱和巴马汀对烧伤后感染的铜绿假单胞菌具有明显的抑制作用。Severina 等[8]研究发现,小檗碱和巴马汀能通过金黄色葡萄球菌菌膜的多抗药性泵,从而达到抑制金黄色葡萄球菌生长的作用。这也表明岩黄连具有抗菌抑菌的作用。本研究结果表明,岩黄连的MIC为20 mg/mL,具有相对高效的抑菌效果。

虽然中药具有相对高效的抑菌效果,但是由于多数中药在临床抑菌抗菌方面起效慢,很难进行大面积的推广应用。中西药联合使用可以有效解决中药起效慢等问题。李学思等[9]研究发现,青霉素G与黄芩、黄连素等联用具有较好抑制金黄色葡萄球菌的作用;罗开碧等[10]用黄连、三七、蒲公英等中草药与抗生素联用治疗猪圆环病毒与细菌混合感染,结果使治愈率提高5.55%,表明中药能有效增强抗生素的临床疗效,或二者之间具有较好的协同作用。本研究结果表明,岩黄连与青霉素、头孢拉定、左氧氟沙星联用后表现为协同作用;岩黄连与磷霉素联用后表现为无关作用。

虽然中西药联用有许多优势,但是不合理的中西药结合使用反而会产生药效拮抗、增强毒性、不良反应等,这给临床上会带来很大的危害[11]。韩莹等[11]发现,洋金花等与强心苷类药物联用易引起患者中毒。陈四玉等[12]的研究发现,清开灵与头孢曲松钠联用后对金黄色葡萄球菌的抑制呈拮抗作用。研究表明不合理的中西药联合应用不仅危害机体的健康,而且会增加患者的经济成本,造成资源的浪费。因此,中西药联用要更加科学、合理、规范。

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