鹿茸菇生态学特性与液体菌种配方的优化研究

张凌姗

鹿茸菇生态学特性与液体菌种配方的优化研究

张凌姗

（古田县食用菌研发中心，福建 古田 352200）

以鹿茸菇菌丝为实验材料，以菌丝生长速度和菌丝干重为主要指标，用平板培养法和液体摇瓶培养法，观测其不同温度、培养基pH、碳源、氮源条件下的菌丝生长情况，并优化液体菌种配方。试验结果为：适合鹿茸菇生长的最佳碳源为淀粉，最佳氮源为酵母粉，菌丝生长的最适温度为 24 ℃，最适pH为5.6。液体菌种的最优碳源氮源配置培养基为面粉和蛋白胨，25 ℃、120 rpm振荡培养10天后的菌丝干重0.820 g/mL。

鹿茸菇；液体菌种；培养基配方；菌丝干重

鹿茸菇（）又称荷叶离褶伞，在我国云南又称为冷香菌、一窝羊、北风菌等，属担子菌亚门，菌伞目，白蘑科，离伞菌属[1]。研究表明，鹿茸菇子实体中粗蛋白、氨基酸含量较高，脂肪含量较低，还含有对人体有益的微量元素锌、铜、硒和大量维生素，具有较高的营养价值。据现代科学研究结果，鹿茸菇含有β-葡聚糖，长期食用有抗肿瘤的功效；其还具有降血压、降胆固醇、抑制糖尿病和抗过敏等药用功效[2]。有关鹿茸菇的研究目前主要集中在栽培技术上，对培养条件研究多不系统，且缺少液体菌种培养方面的报道。本文对鹿茸菇生态学特性和液体菌种配方予以研究报道。

1 试验材料

1.1 供试菌株

鹿茸菇1号，编号LR01，保藏于古田县食用菌研发中心。

1.2 培养基配方

PDB培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL。PSB培养基：马铃薯200 g，蔗糖20 g，水1 000 mL。PMB培养基：马铃薯200 g，麦芽糖20 g，水1 000 mL。

基础培养基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，维生素B110 mg，琼脂20 g、蒸馏水 1 000 mL。基础液体培养基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，维生素B110 mg，蒸馏水1 000 mL。

2 试验方法

2.1 生态学特性研究

（1）温度。将鹿茸菇菌株接种到PDA平板培养基上，于24 ℃下培养14天后，在超净工作台上用经过火焰灼烧灭菌并冷却的直径为6 mm的打孔器打取菌落圆片，将菌落圆片接种到直径9 cm的PDA平板上，置于24 ℃恒温箱中避光倒置培养。5天后，沿菌落边缘划线，然后分别置于4 ℃、20 ℃、22 ℃、24 ℃、26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃恒温培养箱内培养，每温度设3个重复。7天后采用划“十”字法测量标记线到菌落边缘的长度，观察菌丝长势，计算菌丝生长速度[3]，菌丝生长速度=/7。

（2）pH。用1 moL/L NaOH和1 moL/L HCl调节PDA培养基pH为4.6，5.6，6.6，7.6，8.6，9.6，10.6，每pH设3个重复。按2.1（1）方法定量接种后，置于24 ℃恒温培养箱中培养。14天后采用划“十”字法测量菌落直径，观察菌丝长势，计算菌丝生长速度[4]，菌丝生长速度=（－6）/（2×14）。

（3）碳源。以基础培养基为对照，分别以蔗糖、麦芽糖、淀粉、木糖代替基础培养基中的葡萄糖，共制备5种不同碳源的培养基。按2.1（1）方法定量接种于各碳源平板培养基上，置于24 ℃恒温培养箱中培养，每种碳源设3个重复。14天后采用划“十”字法测量菌落直径，观察菌丝长势，按2.1（2）方法计算菌丝长速。

（4）氮源。以基础培养基为对照，分别以酵母粉、硫酸铵、硝酸钾、尿素代替基础培养基中的蛋白胨，共制备5种不同氮源的培养基。按2.1（1）方法定量接种于各氮源培养基上，置于24 ℃恒温培养箱中培养，每种氮源设3个重复。14天后采用划“十”字法测量菌落直径，观察菌丝长势，按2.1（2）计算菌丝长速。

表1 不同温度下的菌丝生长情况

注：菌丝生长速度后不同大小写字母分别表示差异极显著和显著。表2同。

2.2 液体菌种配方优化试验

（1）碳源。以基础液体培养基为对照，分别用蔗糖、麦芽糖、淀粉、甘露醇、玉米粉、面粉代替其中的葡萄糖，配制成7种不同碳源的液体培养基。采用121 ℃高压灭菌30 min。将鹿茸菇菌种接在PDA平板上培养10天后，用经灼烧灭菌并冷却的直径为6 mm打孔器打取菌落圆片接种到上述7个处理液体培养基上，每培养基接种3片，每处理设4个重复。接种后置于120 r/min、25 ℃摇床条件下培养10天。培养后的菌液采取真空抽滤法，将获得的菌丝置于55 ℃下干燥至恒重，测量菌丝体质量[5-7]。

（2）氮源。以基础液体培养基为对照组，分别以黄豆粉、酵母粉、酒石酸铵、硫酸铵、硝酸铵代替蛋白胨，配制成6种不同氮源的液体培养基。方法步骤同2.2（1）。

（3）以上述方法选出的最佳碳源和氮源，配制成优化的液体培养基（简称BP培养基），同时配置PDB、PSB、PMB培养基为对照。其他步骤同2.2（1）。

3 结果与分析

3.1 生态学特性表现

（1）温度与菌丝生长的关系。鹿茸菇在20～32 ℃下均可生长，且菌丝生长速度随着温度升高呈现出先升高后降低的趋势，在22～28 ℃条件下菌丝生长较快速，长势浓密，最适温度为24 ℃；在4 ℃下菌丝停止生长，接种块菌丝洁白，放置12天后转入24 ℃可恢复生长；在34 ℃下菌丝也不生长，接种块菌丝颜色变黄，转入24 ℃后不能恢复生长（表1）。

（2）pH与菌丝生长的关系。鹿茸菇菌丝在pH 4.6～10.6下均可生长，其中在pH 5.6～8.6范围内菌丝长速差异不显著，以pH 5.6～6.6的菌丝生长快速、浓密（表2）。表明该菌适于在偏酸性环境下生长。

（3）碳源与菌丝生长的关系。鹿茸菇对供试5种碳源均能利用，且均表现菌丝稠密、洁白，但存在一定的差异（表3）。其中以淀粉为碳源的菌丝生长速度快，平均长速为1.81 mm/d；以木糖为碳源的生长慢，平均长速为0.73 mm/d；以淀粉和麦芽糖为碳源的，相互间差异未达极显著水平。

表2 不同pH下的菌丝生长情况

表3 不同碳源和氮源下的菌丝生长情况

注：菌丝长势，所有碳源培养基均为稠密、洁白；氮源培养基中，蛋白胨、酵母粉菌丝稠密洁白，硝酸钾菌丝稀疏、透明，硫酸铵菌丝白色、几乎不生长，尿素菌丝枯黄、不生长。

表4 不同碳源、氮源下液体菌种的菌丝干重

表5 不同液体培养基下的菌丝生长情况

（4）氮源与菌丝生长的关系。鹿茸菇对除尿素、硫酸铵外的其他3种供试氮源均能利用，但相互间存在显著性差异（表3）。其中，以酵母粉为氮源菌丝长速最快，为1.75 mm/d，且长势好，表现稠密、洁白；以蛋白胨为氮源的对照，菌丝长速虽稍慢于以硝酸钾为氮源的处理，但长势较好，表现稠密、洁白；以尿素和硫酸铵为氮源的处理菌丝几乎不生长。

3.2 液体菌种培养基配方优化试验结果

（1）碳源。如表4所示，以面粉为碳源时，菌丝体的干重大，菌球数量多、分布密实、大小均匀；以蔗糖、麦芽糖、葡萄糖为碳源的处理，菌球数量均较多，菌丝干重相互间差异不显著。以玉米粉为碳源的，由于玉米粉本身有一定重量，所以菌丝干重较重而存在一定的误差。因此，宜选择面粉为鹿茸菇液体菌种配方的较佳碳源。

（2）氮源。以蛋白胨为氮源培养的菌丝干重大，为0.230 g/L，但其与以酵母粉为氮源的处理间差异不显著。以黄豆粉为氮源的处理菌丝干重高达0.408 g/L，但其中都是黄豆粉，并无菌丝（表4）。因此，宜选择蛋白胨为鹿茸菇液体菌种配方的较佳氮源。

（3）不同类型液体培养基的菌丝生长情况。优化的BP培养基中的菌丝量极显著大于PSB、PDB、PMB培养基（表5），干重为0.820 g/L，菌球密布，大小均匀。适合用于鹿茸菇液体菌种生产。

4 结论与讨论

鹿茸菇是一种新兴的食用菌品类，了解其生态学特性是人工栽培的前提。鹿茸菇固体菌种萌发慢，容易被污染，液体菌种能够克服这一缺点，因此，液体菌种优化配方对人工栽培具有重要参考价值。本试验对鹿茸菇生态学特性的研究结果显示，在PDA培养基上，最适培养条件为温度24 ℃、pH 5.6；在固体培养基上的最适碳源为淀粉，最适氮源为酵母粉。对其液体菌种配方优化的研究结果，最优碳源、氮源分别为面粉、蛋白胨，培养出的液体菌种表现分散性好、菌球多、大小均匀。

本试验在研究鹿茸菇生态学特性和优化液体菌种配方的过程中，仅进行了实验室条件下和生产中一些常见原料的单因素试验，

对于不同碳源、氮源无机盐的多因素多水平研究还需做更多的探索。此外，本试验液体菌种配方优化仅在摇床培养条件下进行，是否适用于大规模的发酵罐培养也有待进一步试验论证。

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张凌姗（1991—），女，本科，助理工程师，主要从事食用菌栽培技术研究。E-mail：ywl123789@qq.com。

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2095-0934（2020）06-425-04