人参蜜百部醇提物对烟熏法诱导慢性支气管炎模型大鼠的作用研究

律广富，朴永革 ，黄晓巍，李宝志 ，林 贺，马 超，程延福 ，庄雪峰，李岳宸 ，林 喆

（1.长春中医药大学吉林省人参科学研究院，长春130117；2.吉林烟草工业有限责任公司，长春130031；3.长春中医药大学，长春130117）

慢性支气管炎是呼吸系统的慢性非特异性炎症反应，中老年人发病率较高且病程缓慢。初期在寒冷季节发病，年龄越大，发病机率就越高[1-2]。中药在治疗慢性支气管炎方面提供了巨大的帮助，常用的中药有养阴清肺汤、杏苏二陈汤、宣白承气汤等[3-5]。

人参属五加科植物，味甘，性温，喜阴凉，具有大补元气、调补五脏，祛除邪气，明目益智、复脉固脱等功效[6]。主要含有皂苷、多糖、挥发油和氨基酸等化学成份，具有抗疲劳、抗衰老、抗氧化和提高免疫力等药理作用[7]，也有祛痰、健胃、利尿等作用。百部为止咳杀虫类药物，临床常于治疗咳嗽、哮喘等。研究表明百部蜜炙后止咳作用优于生百部[8]。

本实验采用烟熏法诱导慢性支气管炎大鼠模型，评价人参蜜百部醇提物对模型大鼠咳喘次数的影响，同时检测大鼠 SOD、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 等因子水平变化，分析人参蜜百部对慢性支气管炎大鼠治疗作用。

1 实验材料

1.1 实验动物

SPF级雄性SD大鼠60只，180～200g，长春市亿斯实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK（吉）-2018-0003。

1.2 药品与试剂

人参 （购自吉林国安药业有限公司20181101）；蜜百部 （购自吉林国安药业有限公司20160701）；醋酸地塞米松片（遂成药业股份有限公司，H41021038，规格 0.75mg/片）；SOD(批号：20200924)；MDA(批号：20200924)；TNF-α (批号：20200924)；IL-6(批 号：20200924)；IL-1β(批号：20200924)；试剂盒（购自南京建成生物研究所有限公司）。

1.3 实验仪器

电子天平 （福州华志）；JA2003B电子分析天平（上海越平）；粉碎机（北京中兴伟业）；WP-UP-III-40精密型超体纯水机 （四川沃特尔）；4℃低温离心机（Cerrtrifuge 5810R）；恒温培养箱（EYEL4 SLI-700）；MultiskanFC型酶标仪（上海赛默飞世尔）。

2 实验方法

2.1 药物制备

人参蜜百部提取物的制备：取人参与蜜百部药材用粉碎机粉碎，按1∶1混合，用10倍量的70%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并提取液，回收乙醇并浓缩至浸膏，4℃冷藏保存待用。

2.2 分组及模型制备

分组：SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组（醋酸地塞米松）、人参蜜百部高、中、低剂量组，每组10只。

模型制备：除空白组外,各组大鼠每天在自制的烟熏仓内接受烟熏（烟熏仓尺寸长55cm，高40cm，宽30cm）,每日两次,每次30min,连续6周。

2.3 给药

第4周开始灌胃给药，给药剂量为阳性药组给予醋酸地塞米松 （1mg/kg），人参蜜百部高剂量组（12g/kg），人参蜜百部中剂量组（6g/kg），人参蜜百部低剂量组（3g/kg），空白组给予等量蒸馏水。

2.4 指标检测

2.4.1 大鼠咳喘次数变化

末次灌胃给药30min后，记录大鼠5 min内出现的咳嗽次数。

2.4.2 样本采集

将大鼠麻醉后腹主动脉取血，4℃，3000r/min离心15min，分离血清，-20℃保存待用。

2.4.3 大鼠血清SDO、MDA测定

取冻存血清按试剂盒说明检测血清中SOD、MDA含量。

2.4.4 大鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-1β 测定

取冻存血清按试剂盒说明书，检测血清中TNF-α、IL-6、IL-1β 含量。

2.5 统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析，计量资料以±s表示，比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义即具有明显差异；P＜0.01为具有显著性差异。

3 结果

3.1 人参蜜百部醇提物对大鼠咳喘次数的影响

与空白组比较，模型组大鼠咳喘次数明显增加（P＜0.01），与模型组相比，醋酸地塞米松组、人参蜜百部高、中剂量组大鼠咳喘次数均显著降低（P＜0.01），人参蜜百部低剂量组大鼠咳喘次数显著降低 （P＜0.05），结果见表1。

表1 人参蜜百部醇提物对大鼠咳喘次数的影响（n=10，±s）

表1 人参蜜百部醇提物对大鼠咳喘次数的影响（n=10，±s）

注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂量 咳喘次数空白组 - 0模型组 - 18.1±5.1##醋酸地塞米松组 1mg/kg 10.6±4.5**人参蜜百部醇提物高剂量组 12g/kg 11.3±3.5**人参蜜百部醇提物中剂量组 6g/kg 11.6±4.2**人参蜜百部醇提物低剂量组 3g/kg 12.9±4.7*

3.2 人参蜜百部醇提物对大鼠血清SOD、MDA的影响

与空白组相比，模型组大鼠血清SOD含量明显下降（P＜0.01）、MDA 明显升高（P＜0.01），给药后，与模型组相比各给药组大鼠血清SOD明显升高 （P＜0.01）、MDA 明显下降（P＜0.01），结果见表2。

表2 人参蜜百部醇提物对大鼠血清SOD、MDA含量的影响（n=10，±s）

表2 人参蜜百部醇提物对大鼠血清SOD、MDA含量的影响（n=10，±s）

注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01。

组别 剂量 SOD(U/mL) MDA（mmol/L）空白组 - 266.21±22.12 9.24±3.21模型组 - 202.3±19.71## 27.77±2.22##醋酸地塞米松组 1mg/kg 243.37±18.82** 15.35±3.21**人参蜜百部醇提物高剂量组 12g/kg 240.52±20.31** 17.72±2.66**人参蜜百部醇提物中剂量组 6g/kg 238.99±19.34** 18.51±3.22**人参蜜百部醇提物低剂量组 3g/kg 229.71±22.55** 20.22±4.25**

3.3 人参蜜百部醇提物对大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β的影响

与空白组比较，模型组大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β明显增加（P＜0.01），与模型组相比，醋酸地塞米松组、人参蜜百部高、中剂量组大鼠TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著降低（P＜0.01），人参蜜百部低剂量组TNF-α含量显著降低（P＜0.05），结果见表3。

表3 人参蜜百部醇提物对大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响（n=10，±s）

表3 人参蜜百部醇提物对大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响（n=10，±s）

注：与空白组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂量 TNF-α（ng/L） IL-6（ng/L） IL-1β（ng/L）空白组 - 1231.25±131.11 101.25±7.32 136.62±9.93模型组 - 1719.56±161.36## 152.31±8.82## 211.23±10.62##醋酸地塞米松组 1mg/kg 1337.25±121.1** 112.64±7.56** 157.57±10.38**人参蜜百部醇提物高剂量组 12g/kg 1393.38±157.21** 119.35±5.89** 158.34±11.25**人参蜜百部醇提物中剂量组 6g/kg 1411.32±150.53** 127.56±6.78** 162.77±12.52**人参蜜百部醇提物低剂量组 3g/kg 1509.86±177.21* 135.75±8.21** 171.25±12.11**

4 讨论

慢性支气管炎是一类常见的呼吸系统疾病，发病人群广，复发率高，吸烟为本病发病的主要因素，特别是老年人为易感人群，据统计，50岁以上人群患病率为15%，如不尽早进行治疗，可引起诸多并发症[9-10]。慢性支气管炎正在成为威胁老年人健康的又一大杀手。因此对慢性支气管炎的防治迫在眉睫。

本研究采用烟熏法诱导慢性支气管炎模型大鼠，该方法是将动物放入大小合适烟室内，通入烟雾，一段时间后取出动物，根据实际需求，重复不同次数和天数，以获得所需的支气管损伤模型[11]。此法由于操作简便，可用于鼠[12-15]、犬、猴等多种动物，支气管慢性炎症病变确切，成为最常用的方法[11]。

有研究表明，烟熏法诱导慢性支气管炎小鼠气道上皮下出现炎性细胞，支气管内有黏液栓，肺泡灌洗液中蛋白含量增加，白细胞总数增加，其机制与氧化应激过强有关[16]。尚立群等[17]发现安石榴苷可显著促进慢性支气管炎大鼠肺组织及血清中的SOD活性，抑制MDA的产生。黄勇等[18]发现野菊花提取物能够降低慢性支气管大鼠体内TNF-α、IL-6含量,改善肺组织的病理损伤。李海峰等[19]发现“复方白毛夏枯草”能降低血清TNF-α和IL-1β含量,这可能是该方治疗慢性支气管炎的作用机制之一。现代药理学研究表明，人参具有抗氧化作用，蜜百部有较好的止咳作用[6-7]，初步推断二者对慢性支气管炎有一定的治疗作用，而本实验结果表明，人参蜜百部提取物可明显降低大鼠咳喘次数，对慢性支气管炎的作用可能与提升 SOD、降低 MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平有关。