仙牛腰骶痛颗粒对SD大鼠非压迫腰椎间盘突出的影响

2020-12-23 07:50宫海全许艳茹于艳辉
人参研究 2020年6期
关键词:硬膜外低剂量腰椎间盘

宫海全,许艳茹,石 菊,于艳辉,吴 萍,徐 建

(吉林修正药业新药开发有限公司·吉林长春·130012)

仙牛腰骶痛颗粒由淫羊藿、千年健、地枫皮、牛膝组成。功能主治温阳祛湿,通经止痛,用于治疗腰骶痛寒湿阻络证。腰骶痛是腰椎骨质增生、腰肌劳损、腰椎间盘突出多种因素造成的临床上一种常见的疾病,本研究采用硬膜外穿刺非压迫性腰椎间盘突出模型,观察仙牛腰骶痛颗粒对腰椎间盘突出疼痛改善作用,明确药物作用机制,为其临床应用提供理论依据。

1 材料

1.1 动物

SD大鼠,雌雄各半,体重200~220g,均购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。

1.2 药物

仙牛腰骶痛颗粒:由修正药业集团长春高新制药有限公司提供,批号:20191110;美洛昔康片:上海勃林格殷格翰药业有限公司,批号:A89562;SP、IgM、IgG、IL-1、IL-6、PGE2试剂盒, 购自南京建成生物工程研究所,批号:20191204。

1.3 仪器

SMP500-18272-LSIO酶标仪;Primo型低温冷冻离心机。

2 方法[1-5]

2.1 分组

将60大鼠随机分组,分别为空白组、模型对照组、阳性对照组(美洛昔康片1.4mg·kg-1)、仙牛腰骶痛颗粒低、中、高剂量组(2.2、4.4、8.8g·kg-1),每日 1 次,连续灌胃14d,灌胃容积为10mL·kg-1。

2.2 模型建立

空白组不做特殊处理,其余各组均使用医用绷带在生理弯曲范围内将鼠尾折成U型呈屈曲位,每日1次,早上缠上绷带,晚上解开,建立非压迫性腰椎间盘退变的模型。30日后,正常组不作任何特殊处理。1%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉,无菌条件下距尾根部1cm处切下鼠尾并用2-0号四线间断缝合伤口。切开尾部椎间盘,见髓核呈胶冻样约10mg,取5个髓核并加入50L生理盐水,充分搅拌稀释成混悬液用。大鼠屈曲侧卧位,以L4-5椎体间隙为穿刺点用9号腰椎穿刺针行硬膜外穿刺,分别注射20μl自体髓核混悬液和2%利多卡因30μl。穿刺方向为针的近端偏向头侧约因个体差异而角度不同斜行刺入20°至30°不等。缝合后,腹腔注射抗生素预防感染。

2.3 指标测定

腹主动脉取血 5mL,3500 r·min-1,离心 15min,吸取上清液分装,-20℃保存备用。严格按试剂盒说明书测定各组大鼠血清中SP、IgM、IgG的含量,在取完血清标本后切取腰4神经根,以不锈钢电动匀浆器制备组织匀浆 4000r离心15min取上清液作样本测定IL-1、IL-6、PGE2。

2.4 统计学分析

数据用SPSS19.0统计学软件处理,进行t检验,用均值±标准差(x±S)表示,P<0.05有统计学意义。

3 实验结果

3.1 对大鼠血清IgM、IgG、SP的影响

大鼠硬膜外穿刺非压迫性腰椎间盘突出模型后,与空白组相比,模型组血清中IgM、IgG、SP释放量增加(P<0.01);与模型组比较,仙牛腰骶痛颗粒高、中、低剂量组能够明显抑制IgM、IgG的释放及SP的合成(P<0.001,P<0.01),结果见表1。

表1 对大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影响(±s,n=10)

表1 对大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影响(±s,n=10)

与空白组比较,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

组别 剂量(g/kg)IgM(μg/ml)IgG(mg/ml) SP(ng/ml)空白组 - 11561.1±1196.88 49.5±6.2 887.2±242.9模型组 - 12204.7±1149.3 57.2±2.2## 924.0±116.5阳性组 1.4mg 11773.7±1245.3 46.69±5.6***698.0±117.4**高剂量组 8.8 11349.3±757.7 48.74±5.2***575.0±249.1**中剂量组 4.4 10908.2±1194.1 43.0±11.3** 435.8±207.6***低剂量组 2.2 8818.3±718.3*** 38.2±7.3*** 187.8±78.8***

3.2 对大鼠神经根中IL-1、IL-6、PGE2含量的影响

大鼠硬膜外穿刺非压迫性腰椎间盘突出模型后,与空白组比较,模型组大鼠IL-1、IL-6释放量,PGE2合成明显升高(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,高、中、低剂量组能够明显抑制IL-1、IL-6的释放以及PGE2 合成速度(P<0.001,P<0.01,P<0.05),结果见表2。

表2 大鼠神经根中IL-1、IL-6、PGE2含量(x±S,n=10)

4 讨论

腰椎间盘突出是导致腰背痛的病因之一,其发病率为5%~10%,占腰腿痛病人的60%以上,据流行病学调查,腰背痛的发病率已位于三大慢性病第三位。临床研究表明,神经根的机械压迫并不是发病的唯一原因,椎间盘组织突出后会诱发的化学性炎症和自身免疫反应也会影响疼痛。非压迫性腰椎间盘退变虽没有直接对神经根造成机械压迫,但退变的椎间盘因破裂等因素产生各种各样的生物化学因子,如髓核等因子作用于神经根造成损伤和疼痛[5-8]。

IL-1和IL-6是非常经典的炎症介质,且能刺激增加疼痛介质PGE2及P物质(SP)的合成,导致局部疼痛的敏感度增加,从而进一步加重腰腿疼痛[9-12],临床证明,IL-1和IL-6在突出椎间盘组织中具有较高的活性[13-16]。本研究表明:仙牛腰骶痛颗粒高、中、低剂量组可降低IgM、IgG含量,调控自身免疫反应,同时仙牛腰骶痛颗粒可减少IL-1、IL-6的释放,抑制致痛物质PGE2、SP的合成,进而缓解腰椎间盘突出的疼痛。

综上所述,仙牛腰骶痛颗粒可能通过调控IgM、IgG自身免疫,阻断炎性因子IL-1、IL-6的释放,抑制致痛物质PGE2、SP的合成,从而达到改善腰椎间盘突出疼痛的作用,但其确切的分子机制有待进一步探讨研究。

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