续断中绿原酸的提取工艺研究

陈雯

重庆中药材有限公司 重庆 401120

续断为川续断科植物川续断（Dipsacus asperoids C．Y．chenget．T．M．Ai）的干燥根，又名川断，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效[1]秋季采挖，除去根头及须根，用微火烘至半干，堆置“发汗”至内部变绿色时，再烘干。续断味苦、辛，性微温，归肝、肾经。酒续断多用于风湿痹痛，跌扑损伤。盐续断多用于腰膝酸软。续断始载于《神农本草经》，列为上品，主要分布于四川、湖北、云南、贵州等地。续断中主要成分为皂苷类成分，而续断中还含有绿原酸、原儿茶酸、阿魏酸等多种具有显著疗效的酚酸。绿原酸（chlorogenic acid）是由咖啡酸（caffeic acid）与奎尼酸组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名3-O-咖啡酰奎尼酸（3-O-caffeoylquinic acid），分子式：C16H18O9，分子量：345．30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸是抗菌、止血、消炎、利胆、增高白血球、抗病毒药物的重要原料，具有肾上腺素类似的作用[2]；绿原酸对人有致敏作用，吸人含有绿原酸的植物尘埃后，可发生气喘、皮炎等，但食人后可经小肠分泌物作用，变为无致敏性物质；绿原酸具有降压和抗肿瘤作用；绿原酸及其衍生物具有比抗坏血酸，咖啡酸和生育酚更强的自由基清除效果，可有效清除DPPH 自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基；它还可抑制低密度脂蛋白的氧化；绿原酸对体内自由基的有效清除，对于维持机体细胞正常的结构和功能，防止和延缓肿瘤、突变和衰老等现象的发生具有中药作用；绿原酸是一种有效的酚型抗氧化剂，其抗氧化能力要强于咖啡酸、对羟苯酸、阿魏酸和丁香酸，以及常见的抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚（BHA）和生育酚，但和丁基羟基甲苯（BHT）的抗氧化能力相当[3]。本实验通过分析资料，采取了正交实验法续确定续断中绿原酸的提取工艺，并对续断中绿原酸的含量进行了分析。

1 实验材料

1.1 实验仪器

中药粉碎机 上海淀久中药机械制造有限公司

HH-6恒温数显水浴锅 江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司

SHZ-D(III)循环水式真空泵 巩义市予华仪器有限责任公司

KQ5200DA型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司

岛津LC－20AD高效液相色谱仪 日本岛津公司

AL204型电子天平（万分之一） 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司

DGG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱 上海森信实验仪器有限公司

1.2 实验样品

续断

绿原酸标准品

1.3 实验试剂

普惠牌医用乙醇 重庆普惠有限公司

盐酸 重庆川东化工（集团）有限公司

甲醇 重庆川东化工（集团）有限公司

盐酸 重庆川东化工（集团）有限公司

磷酸 重庆川东化工（集团）有限公司

乙腈（色谱纯）

甲醇（色谱纯）

超纯水

2 实验方法与结果分析

2.1 绿原酸含量测定

（1）色谱条件。色谱柱：Hypersil-C18 BDS色谱柱（5μm，250mm＊4．6mm）；流动相：

0．5%磷酸溶液-乙腈（17:83）；流速：1ml/min；柱温：室温；检测波长：323nm

（2）标准品配置。精密称取绿原酸标准品3．8mg，置于5ml容量瓶中，用甲醇定容至5ml，即得。

（3）供试品溶液配置。将续断药材置于烘箱中65℃两小时烘干，粉碎，过三号筛，精密称取5g置于250ml圆底烧瓶中，按表5试验方法加入ph为4的乙醇溶液，静置2-3h，水浴，过滤取滤液过微孔滤膜（0．45μm），即得。

（4）精密度实验。取浓度0．226mg/ml标准品溶液，每次精密吸取20μl，重复进样5次，记录峰面积如表1：

表1 记录峰面积表

计算得RSD=1．05%，结果表明，精密度良好。

（5）稳定性实验。取浓度0．226mg/ml标准品溶液，分别在0,1h，2h，4h，8h进样，每次精密吸取20μl，记录峰面积如表2：

表2 记录峰面积表

计算得RSD=1．35%,结果表明，在8小时内，绿原酸样品稳定。

2.2 正交实验设计与结果

实验选取乙醇浓度，提取温度，物料比，提取次数4个因素，设计四因素三水平L9（34）正交实验，正交实验因素水平表3：

表3 实验因素水平表

根据以上两个表中实验数据分析得出续断中提取绿原酸的影响因素顺序为提取次数＞乙醇浓度＞物料比＞温度，较佳工艺条件为：乙醇浓度60%，提取温度80℃，物料质量体积比为20ml/g，提取次数为3次。

（3）优化工艺验证。取续断粉末2g，按最优工艺进行提取，重复3次，测得绿原酸的平均得率为3．74mg/g。

3 结语

通过对续断中绿原酸提取的正交实验分析，对各个数据具体而细致的分析，发现对提取的绿原酸含量影响最大的因素是提取次数，其次为物料比，再次为乙醇浓度，影响最小的为提取温度，进而对比选择出最佳工艺条件为：乙醇浓度60%，提取温度80℃，物料质量体积比为20ml/g，提取次数为3次。后通过验证试验证明在该条件下，绿原酸平均得率较高。但是本实验仅仅得到绿原酸的粗品，对续断中绿原酸的纯化工艺有待进一步的研究，也希望通过本实验使大家引起对续断中绿原酸的重视，对续断进一步的开发利用。