MTHFR基因多态性与血清叶酸、同型半胱氨酸代谢的关系分析

陈爱保,向 欢,赵红萍

深圳恒生医院检验科，广东深圳 518102

人类亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因位于染色体的1p36.3，全长1 980 bp,其第4外显子上的第677个核苷酸碱基可发生胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的突变，可由677CC(正常野生型)突变为677CT(杂合突变型)或677TT(纯合突变型)。突变后的MTHFR活性下降，可致叶酸代谢障碍引起低叶酸，继发同型半胱氨酸代谢障碍引起高同型半胱氨酸血症，高同型半胱氨酸是引发高血压等心脑血管疾病、新生儿出生缺陷的高风险因素[1]。只有早发现基因是否有突变，及时补充叶酸，防止高同型半胱氨酸血症的产生，才是控制相关疾病发生的良策。鉴于此，本研究通过收集相关资料进一步分析认证MTHFR基因多态性与叶酸、同型半胱氨酸的代谢关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2019年1-12月在本院同时做外周血细胞MTHFR 基因检测、血清叶酸、血清同型半胱氨酸检测的500例受试者临床资料，其中男性270例、女性230例，年龄19～70岁，平均(35.5±5.0)岁。

1.2方法

1.2.1标本准备 空腹采紫头管抗凝血2 mL及橙管非抗凝血4 mL，采血前1周未服用叶酸。

1.2.2血细胞MTHFR基因检测及判断标准 采用西安金磁纳米生物技术有限公司生产的PCR-金磁微粒层析法试剂盒，雅培LA480核酸扩增仪。对标本进行DNA提取、扩增、产物分析。其原理是通过对等位基因MTHFR C677T基因突变位点的引物设计及标记，利用等位基因特异性PCR方法扩增获得特定的扩增片段，标记有地高辛分子的PCR产物在与所构筑的基因分型检测体系中纳米金磁微粒表面抗地高辛单抗相互作用，通过侧向流层析技术实现其基因多态性检测。判断标准：(1)反应板中M试剂T线处条带显示阴性而WT试剂T线处条带显示阳性则其基因型为正常CC型；(2)反应板中M试剂T线处条带显示阳性，WT试剂T线处条带阳性则其基因型为杂合突变CT型；(3)反应板中M试剂T线处条带显示阳性而WT试剂显示阴性则其基因型为TT纯合突变型，详细操作方法及结果判断按试剂盒说明书进行。

1.2.3血清叶酸检测 采用i200SR雅培化学发光仪检测叶酸水平，正常参考范围为7.0～45.4 nmol/L。

1.2.4血清同型半胱氨酸检测 采用LST008AS日立全自动生化仪检测同型半胱氨酸水平，正常参考范围为0～15 μmol/L。

2 结 果

2.1500例受试者中不同性别、年龄段各基因型构成比比较 不同性别、年龄段受试者各基因型构成比比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同性别、年龄段受试者各基因型构成比比较[n(%)]

2.2各基因型受试者血清叶酸和同型半胱氨酸检测结果比较 220例CC型受试者血清叶酸水平为(27.5±5.0)nmol/L，有2例受试者低于正常参考范围。145例CT型受试者血清叶酸水平为(9.5±1.4)nmol/L，有7例受试者低于正常参考范围。135例TT型受试者血清叶酸水平为(6.5±0.5)nmol/L，有35例受试者低于正常参考范围。220例CC型受试者血清同型半胱氨酸水平为(6.0±0.8)μmol/L，均在正常参考范围。145例CT型受试者血清同型半胱氨酸水平为(11.5±1.0)μmol/L，有2例受试者高于正常参考范围；135例TT型检测者血清同型半胱氨酸水平为(13.5±1.5)μmol/L，有9例受试者高于正常参考范围。TT型和CT型受试者血清叶酸水平低于正常参考范围的人数及血清同型半胱氨酸水平高于正常参考范围的人数明显多于CC型受试者，差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

MTHFR是叶酸代谢的关键酶，其功能是将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸是同型半胱氨酸再次甲基化为蛋氨酸的甲基供体[3]。MTHFR对热不耐受，易突变为CT型和TT型[3]，突变后的CT型和TT型酶活力分别只有CC型的65%和30%[4]，特别是TT型人群，因叶酸代谢障碍致叶酸缺乏，可引起同型半胱氨酸再次甲基化受阻，体内同型半胱氨酸不同程度堆积，可导致血管内皮损伤、刺激血管平滑肌增生、破坏机体凝血和纤溶系统，使机体处于血栓状态，是H型高血压、冠心病的高风险因素，也可导致脑卒中发生风险升高11～28倍[5]；叶酸代谢障碍是孕妇出现早产、出生低体质量儿、神经管畸形、唇腭裂的高风险因素[6]；也是突发性耳聋发生的高危险因素[8]。叶酸是水溶性B族维生素，是合成核酸所需的辅酶，叶酸缺乏可导致细胞DNA合成减少，细胞成熟障碍，可致贫血[7]；有报道称TT型男性精子的前运动率要明显低于CC型[8]。

同型半胱氨酸是人体必需氨基酸——蛋氨酸代谢的中间产物，其升高可能因不良的饮食结构和习惯引起，也可因基因MTHFR活性下降引起，减少富含蛋氨酸食物的摄入，多食新鲜的蔬菜水果能有效降低同型半胱氨酸水平。人体自身不能合成叶酸，需从食物补充，天然的叶酸又极不稳定，易受阳光、加热的影响而发生氧化，遗传基因正常人群可从日常饮食中得到叶酸的满足。而MTHFR基因突变后的CT型和TT人群不要等到已经发生了H型高血压或遗传性耳聋等因叶酸、同型半胱氨酸代谢障碍引发的疾病，再来进行基因、叶酸、同型半胱氨酸检测，则为时已晚[10]。早检测、早干预是预防相关疾病发生的良策[11]。