吴茱萸多糖含量测定及抗胃溃疡作用研究

范美玲

（广东省四会市中医院药剂科，广东 四会 526200）

吴茱萸属芸香科吴茱萸属植物，多用于治疗头痛、腹痛等，药理研究表明，吴茱萸对消化系统、心血管系统等有调节、保护作用［1］。当前对于吴茱萸的研究主要是对药效的分析，很少对吴茱萸多糖进行研究。多糖作为中药的药效基础，能够起到诸多的作用，如抗肿瘤、降血脂、保护肝脏等多种活性作用。本研究对吴茱萸中的多糖含量进行测定，同时分析抗胃溃疡作用，报道如下。

1 仪器与材料

1.1 材料

采用6种不同来源的吴茱萸作为材料，主要源于安徽、山东、四川、江西、湖北、河北等省份，并依据《中国药典》检验，同时把不同来源的吴茱萸制成粉末状，保存待用。

1.2 仪器设备

双光束紫外可见分光光度计（西门子，型号DR3900）；全能型高性能台式冷冻离心机（北京昊诺斯科技有限公司，型号ST40R）；高精密电子分析天平（厦门米德电子科技有限公司，型号FA1004T）；蒽酮（武汉欣欣佳丽生物科技有限公司）；奥美拉唑肠溶片（江苏联环药业股份有限公司，批号H20044871，规格10mg）；生理盐水（北京生物制品研究所有限责任公司，国药准字S10870001，规格5.0mL）。

2 方法及结果

2.1 检测吴茱萸多糖含量

2.1.1 对吴茱萸多糖标本溶液进行配置

将10.0g吴茱萸粉末放置在烧杯内，随后添加无水乙醇100mL进行浸泡1～2h，将过滤后的药材放置在盛有100mL蒸馏水的烧杯内，重复提取2次，每次4h，然后进行离心，并混合2次获得的上清液。将混合后的上清液进行浓缩，浓缩到100mL，随后加入无水乙醇300mL，并放置在温度为4℃的冰箱内12h，第2天把标本溶液进行离心，观察到絮状物沉淀，将絮状物转移到100mL容量瓶内，然后添加蒸馏水进行溶解、定容。最后取10.0mL溶液转移到100mL容量瓶内加水稀释进行定容，配置成吴茱萸多糖溶液。

2.1.2 配置0.2%的蒽酮-硫酸溶液

将0.2g蒽酮放置在烧杯内，缓缓添加浓硫酸进行溶解，并转移定容到100mL棕色容量瓶内，获得浓度为0.2%的蒽酮-硫酸溶液，现配现用，避光储存。

2.1.3 配置葡萄糖溶液

取0.1g干燥到恒重的无水葡萄糖，将其转移到盛有100mL的蒸馏水容量瓶中进行定容，随后取10.0mL的溶液转移到100mL容量瓶中，添加蒸馏水进行稀释到刻度线，获得浓度100ug/mL的葡萄糖标准溶液。

2.1.4 验证方法

线性和范围：取0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL葡萄糖标准溶液放置在10mL量筒中，并添加适量的蒸馏水进行稀释，对0.2%6mL的蒽酮-硫酸溶液进行摇匀，同时放置在冰水浴中10min，放入温度为80℃的水浴中保温8min后，置于冰水浴中冷却，在620nm位置对其吸光度进行测定。横坐标表示葡萄糖浓度、纵坐标表示吸光度值，方程为：Y=0.0515X+0.962，r=0.9994，表明葡萄糖浓度在5.0～17.2μg/mL范围与吸光度值呈现线性关系。

重复性：取吴茱萸多糖标本溶液2.0mL放置在量筒内，配置6份，依据线性和范围进行操作并测量，相对标准偏差为1.2%，具有较好的重复性。

稳定性：将2.0mL的吴茱萸多糖标本溶液分别配置出15min、30min、1h、1.5h、2h测定其吸光度值，相对标准偏差为2.2%，显示所配置的溶液在2h内处于稳定状态。

加样回收率：取吴茱萸多糖标本溶液1.0mL放置在量筒内，共5份，分别添加0.4mL的葡萄糖标准溶液，随后加水稀释到2mL，并计算加样回收率为95.8%，相对标准偏差为1.5%。

测定样品：分别去6批吴茱萸各10.0g，按照上述操作进行测量，计算不同来源药材中的多糖含量，见表1。

表1 各地吴茱萸中的多糖含量比较 mg/g

结果显示，吴茱萸药材中多糖含量的差异与来源存在着较大的关系，并能够看出来自江西、湖北、四川的吴茱萸药材中多糖含量较为丰富，且多糖含量均大于5mg/g，来自安徽、山东、河北的吴茱萸药材中多糖含量较为缺乏，且多糖含量均小于5mg/g。由此可见，影响吴茱萸中多糖含量的的原因与生长环境存在很大关系，所以在研究吴茱萸多糖时应考虑到药材的出处。

2.2 分析吴茱萸多糖的抗胃溃疡作用

2.2.1 配置吴茱萸多糖溶液

把30.0g吴茱萸粉末放置在500mL的烧杯内，添加无水乙醇脱脂400mL，离心后获得脱脂后的吴茱萸，并将其放置在烧杯内，添加600mL蒸馏水重复提取2次，每次提取时间为3h，再次进行离心，把2次获得的上清液合并，并浓缩到500mL，向获得的溶液内添加无水乙醇2400mL，放置在温度为4℃的冰箱，保存12h。第2天对溶液进行过滤，获得吴茱萸多糖，最后溶于100mL蒸馏水，获得浓度为0.4g/mL吴茱萸多糖溶液。

2.2.2 制备奥美拉唑溶液

取奥美拉唑肠溶片5粒即40mg，研磨至粉末状，随后放置在100mL蒸馏水中，即获得浓度为0.4mg/mL的奥美拉唑溶液。

2.2.3 药效试验

取20只健康SD大鼠，体质量为180～250g，平均（215±16）g，随机分为4组，分别为空白组、常规组、观察组及阳性对照组，每组各5只。空白组与常规组每天喂食蒸馏水10mL/kg，观察组每天喂食吴茱萸多糖溶液8g/kg，阳性对照组每天喂食奥美拉唑2.5mg/kg，每天1次，连续喂食1周。实验开始前，让大鼠禁食1天，在最后1次喂食药物后，固定大鼠，把剑突浸泡在20℃范围内凉水中8h，随后戊巴比妥钠麻醉剂，充分暴露胃部，结扎贲门，随后向胃内注入甲醛固定液，对幽门进行结扎，然后剪掉其胃部，顺着胃大弯剪开并展开，使用浓度为0.9%的生理盐水进行冲洗，记录黏膜顺畅情况，最后将胃组织浸泡在浓度为10%的甲醇溶液中2天，进行HE染色后做组织病理学观察。

2.2.4 药效学结果

用肉眼、显微镜对大鼠胃组织进行观察，结果发现：空白组为粉红色，且没有出血点。常规组为暗红色，且发生胃黏膜充血，呈现点状或线状分布出血点。与常规组比较，阳性对照组、观察组大鼠胃黏膜损伤程度较轻。结果显示，与常规组比较，观察组的溃疡指数明显减小（P＜0.05），且观察组的溃疡抑制率为53.7%，证实吴茱萸多糖能够起到抗胃溃疡的作用。

3 讨 论

在测定吴茱萸多糖含量时，对波长、显色剂的用量、加热时间等采用单因素循环法分别进行检测，确定了最佳的检测波长、显色剂用量、加热时间、加热温度分别为620nm、6mL、6min、80℃，经证实该方法完全符合线性、回收率等要求［2-3］。此次研究通过制备大鼠胃溃疡模型，方法简便、容易，且具有较高的成功率，能够从胃溃疡指数、胃组织形态学分析吴茱萸多糖的抗胃溃疡作用［4-5］。此次研究通过对不同来源的吴茱萸进行测定，结果证实，影响吴茱萸多糖含量的原因主要与来源存在着存在密切关系。经证实，吴茱萸能够有效改善胃溃疡损伤程度，且有防治胃溃疡的作用［6］。