25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂高效液相色谱分析

李彦飞，冯泽腾，张小军

(中农立华生物科技股份有限公司，北京 100052)

苯唑草酮(topramezone)，化学名称为[3-(4,5-二氢-3-异噁唑基)-4-甲基磺酰-2-甲基苯]-(5-羟基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮，是由巴斯夫公司开发的一类对羟基苯基丙酮酸酯双氧化酶(HPPD)类抑制剂。其属于苯甲酯吡唑酮类除草剂，能有效防除玉米田阔叶杂草及禾本科杂草，但对莎草科杂草效果较差，具有活性高、杀草谱广、可混性强以及对作物和环境安全等优点[1-3]。三氯吡氧乙酸(triclopyr)，又名绿草定，化学名称为3,5,6-三氯-2-吡啶氧基乙酸，是由陶氏化学公司开发的一种内吸传导型选择性吡啶氧羧酸类除草剂，在植物体内可传导到全株，造成植物根、茎、叶畸形，储藏物质耗尽，维管束被栓塞或破裂，植株逐渐死亡。禾本科作物对三氯吡氧乙酸具有耐药性，因此，该剂可用于非耕地防除木本植物及阔叶杂草，也可用于禾本科作物如高粱、燕麦、小麦和玉米等作物田中阔叶杂草的防治[4-7]。

目前有关苯唑草酮及三氯吡氧乙酸单剂的分析方法有较多文献记载，但对于二者复配制剂的分析方法尚无报道。本文旨在建立一种可同时对25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸进行定量分析的高效液相色谱法。该方法操作简便、快速稳定，适用于农药制剂中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的定量分析。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

美国Agilent 1220型高效液相色谱仪配紫外检测器及色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；TU-1901型普析通用紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

乙腈(色谱纯)(Thermofisher)，85%磷酸(分析纯)(国药集团)，新蒸二次蒸馏水；苯唑草酮标样(纯度≥99%)，三氯吡氧乙酸标样(纯度≥99%)，北京勤诚亦信科技开发有限公司提供；25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂，自制。

1.2 色谱条件

液相色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，内装5 μm C18填充物)；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)，流量：0.8 mL/min；柱温：室温；检测波长：254 nm；进样体积：5.0 μL。在上述色谱操作条件下，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的保留时间分别约为3.6 min和9.7 min。苯唑草酮及三氯吡氧乙酸标样及制剂样品的高效液相色谱图分别见图1、2。

图1 苯唑草酮(进样浓度200 mg/L)及三氯吡氧乙酸(进样浓度800 mg/L)标样高效液相色谱图

图2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂高效液相色谱图

1.3 溶液的配制

1.3.1 标样溶液的配制

准确称取0.02 g苯唑草酮标样(精确至0.000 02 g)或0.08 g三氯吡氧乙酸标样(精确至0.000 2 g)，分别置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，脱气后备用。

1.3.2 试样溶液的配制

准确称取0.4 g 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂样品(精确至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，脱气后备用。

1.4 测定

在以上色谱条件下，待仪器基线状态稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的复性，待各针标样相对响应值的变化小于1.5%时按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进行分析测定。重，的

1.5 计算

将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中的苯唑草酮或三氯吡氧乙酸峰面积分别进行平均。试样中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的质量分数X(%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面积值；A2为样品溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面积值；m1为苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)标样的质量(g)；m2为样品的质量(g)；P为标样中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的质量分数(%)

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

试验发现，当选用甲醇与水混合溶剂为流动相时，苯唑草酮的出峰时间太早且峰形较差，拖尾严重，而采用乙腈-水混合溶剂为流动相时，苯唑草酮的峰形明显优于以甲醇-水作为流动相的峰形，且加入0.1%磷酸后其峰形和分离度均有明显改善。当流动相中乙腈比例太高时，苯唑草酮及三氯吡氧乙酸出峰时间均提前，分离度变差。当流速控制在0.8 mL/min，乙腈-0.1%磷酸水溶液的体积比为50∶50时，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的出峰时间相对适中，且峰形尖锐对称，无拖尾，分离效果最好。

2.2 检测波长的选择

利用TU-1901型普析通用紫外可见分光光度计对苯唑草酮和三氯吡氧乙酸标样溶液进行全波长紫外扫描，得到苯唑草酮或三氯吡氧乙酸的最大吸收波长与相关浓度响应值的紫外吸收光谱图。经验证，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸在波长254 nm下均有较大紫外吸收，且能够得到较好的峰型，同时避免杂质的干扰。因此本试验选定254 nm作为本分析方法的检测波长。

2.3 分析方法的线性相关性

分别称取5个不同质量的苯唑草酮、三氯吡氧乙酸标样于5个100 mL的容量瓶中，配制成一系列标准溶液，按照本方法所确定的液谱条件进行进样测定，结果见表1。以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的进样质量(x)为横坐标，以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)同质量浓度溶液的峰面积(Y)为纵坐标作图，得苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的线性关系曲线，见图3和图4。可见，苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的质量浓度与其响应值之间呈现出良好的线性关系，其线性方程分别为y苯唑草酮=1 642.5x+8.046 2，y三氯吡氧乙酸=92.661x-4.406 2，相关系数分别为r2苯唑草酮=0.999 9，r2三氯吡氧乙酸=0.999 4。

表1 线性关系试验结果

图3 苯唑草酮进样质量与峰面积之间的线性关系

2.4 方法的精密度

从同一批25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂样品中准确连续称取5个试样，在上述规定操作条件下进行分析，试验结果见表2。由表2可见，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的标准偏差分别为0.012%和0.013%，变异系数分别为0.24%和0.06%，说明该方法的精密度良好，能满足日常定量分析的要求。

2.5 方法的准确度

准确称取5个25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂试样，加入一定量的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸标样，按1.2的液相色谱条件进行测定，并计算回收率，结果见表3。可见，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸加标回收率分别为99.0%～100.5%和99.3%～101.6%，平均回收率分别为99.5%和99.7%，说明该方法准确度较高，可满足定量分析要求。

图4 三氯吡氧乙酸进样质量与峰面积之间的线性关系

表2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂分析方法精密度试验

表3 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂加标回收率试验

3 结论

本文建立了采用高效液相色谱法同时快速测定混配制剂中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的方法。采用C18不锈钢色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)和紫外检测器，以乙腈-0.1%磷酸水溶液(体积比50∶50)为流动相，同一色谱柱定量分析检测25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸2种有效成分，得到2种有效成分的加标回收率和精密度相对较高，线性关系良好。该方法具有操作简便快速、检测过程稳定、检测结果准确、分离效果好等特点，可用于25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸悬浮剂生产过程中产品质量检测与质量控制。